TP-ELISA、TRUST以及两种方法联合检测在梅毒感染诊断中的价值

(濮阳市红十字中心血站，河南 濮阳 457000)

梅毒是由梅毒螺旋体(Treponema pallidum,TP)感染所引起的慢性性传播疾病，其传染力强，危害性大，临床症状千变万化，早期侵犯皮肤与生殖器，进一步会随淋巴系统、血液循环向全身扩散，造成全身各脏器损伤，甚至威胁生命安全。如能早期发现、正规治疗对患者预后具有积极意义 。目前临床上对于梅毒螺旋体感染的检测常采用梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验(Treponema pallidum enzyme-linked immunosorbent assay,TP-ELISA)、甲苯胺红不加热血清试验(Toluidine red unheated serological test，TRUST)、梅毒螺旋体明胶凝集试验(Treponema pallidum particle assay，TPPA)等方法进行[1]。其中TPPA 法检测梅毒具有灵敏度、特异度均较高的优点，普遍将其作为梅毒诊断的“金标准”，但该方法费用昂贵，操作繁琐，专业要求较高，在基层筛查中难以广泛使用。TP-ELISA、TRUST两种方法因其实用、方便、快捷等优点而被广泛使用，但其存在假阳性、假阴性等现象，检测准确性尚未明确[2]。本次研究以219例疑似梅毒患者血清作为研究对象，以TPPA法检测结果作为标准，评价TP-ELISA法、TRUST法以及两种方法联合检测对梅毒的诊断价值，为梅毒的早期诊断提供参考依据。报告如下。

1 资料与方法

1.1 样本来源

血清样本来自2017年1月～2017年12月在濮阳市红十字中心血站就诊初步诊断为疑似梅毒的219例患者，患者中男133例，女86例；年龄24～53岁，平均(32.7±6.9)岁。

1.2 方法

1.2.1 检测方法 所有患者血清均使用TP-ELISA、TPPA、TRUST等方法进行检测。TP-ELISA将微孔板用特异性原包裹后再检测血清中的抗TP-IgM、抗TP-IgG抗体，采用酶标仪仪器(美国Molecular Devices，型号：SpectraMax M5)450 nm读取吸光度(A值)，A值小于临界值为阴性，A值大于临界值为阳性；试剂盒由上海实业科华公司生产。TPPA将菌株纯化后进行抗原抗体反应，检测血清中的抗体，采用稀释液在U形板上将每份血清样本作倍比稀释，加致敏粒子孔≥1∶80凝集为阳性，试剂盒由日本富士株式会社生产。TRUST在血清凝集后对非特异性抗体检测，试剂盒由上海荣盛药业有限公司提供。所有操作均严格按照说明书要求进行。

1.2.2 观察指标 以TPPA法检测结果作为标准，对比TRUST法、TP-ELISA法和两种方法联合检测所得灵敏度和特异度。灵敏度是指检查(或筛检)方法将实际有病的人正确判断为患者的能力，灵敏度=(试验阳性的患者数/患者数)*100%，假阴性率=1-灵敏度；特异度是指检查(或筛检)方法将实际无病的人正确判断为非患者的能力，特异度=(试验阴性的非患者数/非患者数)*100%，假阳性率=1-特异度；约登指数=灵敏度+特异度-1。

1.3 统计学方法

研究数据分析采用SPSS19.0统计软件进行，计数资料用%表示，组间比较用χ2检验，以P<0.05为差别有统计学意义。

2 结果

2.1 TP-ELISA和TRUST两种方法对疑似梅毒诊断结果比较

以TPPA法诊断结果作为金标准，219例疑似梅毒患者中130例诊断为梅毒。TP-ELISA法检测199例符合诊断，其中阳性114例符合诊断，阴性85例符合诊断；TRUST法检测175例符合诊断，其中阳性92例符合诊断，阴性83例符合诊断；TP-ELISA+ TRUST联合检测209例符合诊断，其中阳性123例符合诊断，阴性86例符合诊断。TP-ELISA+ TRUST组对疑似梅毒诊断准确率高于TP-ELISA组和TRUST组，差异有统计学意义(χ2=27.90，P<0.05)。见表1。

表1 TP-ELISA 和TRUST两种方法与TPPA法检测梅毒螺旋体结果比较 n(%)

2.2 TP-ELISA和TRUST两种方法对梅毒诊断价值比较

结果显示，TP-ELISA法和TRUST法对梅毒感染诊断的灵敏度分别为87.69%和70.77%，特异度分别为95.51%和93.26%，约登指数分别为0.8320和0.6403。而TP-ELISA+TRUST联合检测的灵敏度、特异度、约登指数均较高，分别为94.62%、96.63%、0.9125。见表2。

表2 TP-ELISA和TRUST两种方法对梅毒诊断价值的比较

3 讨论

由于梅毒的唯一宿主是人类机体，其病程较为漫长，症状复杂，人体感染后会出现两种抗体，其中一类是非特异性抗体，梅毒螺旋体在破坏机体组织过程中产生的一种抗原性心磷脂，使得机体产生反应素，但该类抗体不会直接针对梅毒螺旋体，无特异性；另一类则为抗梅毒螺旋体的特异性抗体，常侵犯机体各组织、器官，增加诊断难度[3]。临床研究指出，机体感染梅毒后IgM抗体与IgG抗体分别在2周、4周后形成，非特异性抗体物质的反应素则晚于特异性抗体，在5～7周后形成[4]。

TP-ELSIA法也被称为双抗原夹心法，是一种临床较为普遍使用的特异性检测技术，通过检测梅毒螺旋体特异性IgM抗体和IgG抗体进行诊断，其操作简单、快捷、全自动化检测等特征，且价格较低，仪器操作规范，资料便于保存，适合样本量大的体检、流行病学调查[5]。TRUST作为非特异性抗体试验，抗原为心磷脂加入活性炭组成复合物，通过检测血清中抗心磷脂抗体滴度进行诊断，具有操作简单、价格低等优点，但其检测结果与其他疾病会出现同样的非特异性反应，易于形成假阳性结果[6]。

本次研究219例初诊疑似梅毒患者中130例通过TPPA试验结合临床症状最终确诊。研究结果显示TP-ELISA法和TRUST法对疑似梅毒诊断准确率分别为90.87%和79.91%，两种方法单独诊断虽然特异度均较高，但灵敏度却相对较低，漏诊率较高，但如果将两种方法联合使用对梅毒感染诊断准确率可达到95.43%，而且可明显提高诊断的灵敏度以及降低漏诊率，约登指数达到0.9125，具有较高诊断价值。提示在临床工作中 ，TP-ELISA法和TRUST法虽然操作简单、快捷，但梅毒鉴别诊断较为复杂，单一检测容易受其它因素影响，出现假阳性和假阴性结果，从而影响进一步治疗，但将两种方法联合检测可以以较低的成本获得更好检查效果。

综上所述，TP-ELISA、TRUST两种方法诊断梅毒感染快捷、实用、操作简单，但单独使用灵敏度相对较低，漏诊率较高，将两种方法联合使用可显著提高灵敏度，增强发现病人的能力，减少漏诊的发生，对梅毒感染诊断价值较高，值得在临床广泛应用。