灰树花菌丝生长最佳培养基碳氮比研究

孙厚静 谌金吾* 闫 静 王 杰 谢 永 王正文 姜发洋 吴凤莲

（1贵州省黔东南州农业科学院，贵州凯里556000；2杭州市农业科学研究院，浙江杭州310024）

灰树花（Grifola frondosa）俗称栗蘑、舞茸菇、莲花菇等，又名贝叶多孔菌，属于担子菌亚门、层菌纲、非褶菌目，多孔菌科，树花属[1]。灰树花是一种珍贵的食药用菌，其子实体香味浓郁，味道鲜美，口感极佳，富含灰树花多糖、多种维生素和人体所需的必需氨基酸，具有降“三高”及增强人体免疫力的作用[2-3]。

近20年来，国内对于灰树花的栽培技术、生态习性与营养物质提取等进行了大量的研究。张一帆等研究表明灰树花栽培配方的碳氮比对灰树花菌丝体的生长速度有显著影响，菌丝体的生长速度随栽培配方料碳氮比的上升而加快[4]。为探明灰树花菌丝生长最佳C∶N，笔者进行不同碳氮比的固体培养基培养灰树花菌丝试验，比较灰树花菌丝生长状况。现将试验结果总结如下。

1 材料与方法

1.1 供试菌株

灰1、灰江、灰山、庆灰151、庆灰152共计5个菌株，引自杭州市农业科学研究院蔬菜所菌种站。

1.2 培养基

1.2.1 母种培养基

加富PDA:在1000 mL普通PDA培养基中加入蛋白胨10 g、MgSO41.5 g、KH2PO43 g、琼脂 20 g[5]。

1.2.2 不同碳氮比的试验培养基

配方①（C∶N=15∶1）:蔗糖 3.1000%，蛋白胨0.6667%，MgSO40.1500%，KH2PO40.3000%，琼脂2.0000%，VB110 mg∕L，VB210 mg∕L；配方②（C∶N=20∶1）:蔗 糖 3.1000%，蛋 白 胨 0.5000%，MgSO40.1500%，KH2PO40.3000%，琼 脂 2.0000%，VB110 mg∕L，VB210 mg∕L；配方③（C∶N=25∶1）:蔗糖3.1000%，蛋白胨0.4000%，MgSO40.1500%，KH2PO40.3000%，琼脂2.0000%，VB110 mg∕L，VB210 mg∕L；配 方 ④（C∶N=30∶1）:蔗 糖 3.1000%，蛋 白 胨0.3333%，MgSO40.1500%，KH2PO40.3000%，琼脂2.0000%，VB110 mg∕L，VB210 mg∕L；配方⑤（C∶N=35∶1）:蔗 糖 3.1000%，蛋 白 胨 0.2857%，MgSO40.1500%，KH2PO40.3000%，琼 脂 2.0000%，VB110 mg∕L，VB210 mg∕L；配方⑥（C∶N=40∶1）:蔗糖3.1%，蛋白胨 0.2500%，MgSO40.1500%，KH2PO40.3000%，琼脂2.0000%，VB110 mg∕L，VB210 mg∕L。

按以上配方配制好培养基后，放入高压灭菌锅中121℃灭菌0.5 h，降温至60～70℃后，即可以在超净工作台上进行分装平板，冷却后接种。

1.3 试验方法

1.3.1 菌株间的拮抗试验

为检验5个灰树花菌株是否存在同种异名的情况，进行了五个菌株拮抗试验，把灰1、灰江、灰山、151、152两两组合，共计10组试验，使用直径为7 cm的培养皿培养观察。接种时过培养皿圆心画一条直线为平板中心线，标记为Y轴，在Y轴两侧接入约黄豆粒大小两块试验菌株菌块，每个平板重复3次。然后放置25℃培养箱中倒置培养，观察菌丝接触区有无对峙反应。如果无条带，表示两菌株基因极相似或相同，种源关系近；如若有条带则表示种源关系远，为不同菌株。

1.3.2 菌丝长速、长势试验

将扩繁后的母种分别接种于相同的加富PDA固体培养基中，每个菌株5次重复。然后置于25℃恒温培养箱中倒置培养（直到菌丝长满平板）。每4 d测量一次菌丝长速，每天观察长势，并记录。

1.3.3 不同碳氮比培养基培养试验

供试培养基为1.2.2所述的6种培养基，加富PDA为对照组。将培养基分装在9 cm的平板中，每个平板加入15～20 mL培养基。待其自然冷却后，将供试菌株分别接种到不同碳氮比的固体培养基中。采用5 mm的打孔器打孔接种，将菌种块尽量接种于平板正中心（圆心位置），每个试验3组重复。然后置于25℃恒温培养箱中倒置培养。每4 d测量一次长速，每天观察长势，并记录。

2 结果与分析

2.1 供试灰树花菌株之间的拮抗

5个菌株拮抗培养结果见表1。由表1可见，5个受检菌株之间均出现了拮抗反应，菌丝都不融合，除了灰1与151、灰1与152、151与152三组拮抗线不明显以外，其余组合都有明显拮抗线，菌丝接触后都形成沟状，没有出现隆起。供试菌株菌丝相互接触后长势有强弱之分。5个供试灰树花菌株中，灰1与庆灰151、庆灰152之间亲缘关系较近。灰1与灰山、灰江，庆灰151与灰山、灰江，庆灰152与灰山、灰江，灰山与灰江之间拮抗线明显，亲缘关系比较远。

2.2 加富PDA培养基上供试灰树花菌株菌丝生长势、长速

5个供试菌株在25℃恒温培养，其菌丝生长势与生长速度见表2。由表2可见，灰山长势最佳，菌丝呈白色，菌丝边缘整齐，菌台略厚，呈绒毛状、乳白色。灰1长速仅次于灰山，长势与庆灰151、庆灰152相近，都较强，菌丝边缘整齐，颜色边缘为乳白色，菌台较厚，呈浅绿色，绒毛状。庆灰151与庆灰152长势及长速都比较相近仅次于灰1，菌丝生长整齐，菌台微厚，边缘乳白色，接种块附近浅绿色、绒毛状。灰江长势最差，长速最慢，乳白色，菌台厚，绒毛状。

2.3 不同碳氮比培养基中供试灰树花菌株菌丝长势、长速

5个供试灰树花菌株在供试培养基上菌丝长势与长速见表3、图1。由图1可见，灰山的长势、长速比其他菌株好、快，且与表2结果相符。碳氮比为30∶1的培养基上，供试灰树花菌株菌丝生长都比较好，长势最佳，长速最快。

表1 供试灰树花菌株拮抗

表2 供试灰树花菌株菌丝长速、长势比较（加富PDA）

表3 不同碳氮比培养基上供试灰树花菌株菌丝生长情况

图1 供试灰树花菌株在不同碳氮比培养基上菌丝生长情况

3 小 结

在加富PDA培养基上，供试5个灰树花菌株中灰山长势最佳，长速最快，灰1、庆灰151、庆灰152菌丝长势与长速差异不大，而灰江菌丝长势弱，长速最慢，颜色基本都呈边缘乳白色，近接种块浅绿色。在相同的培养条件下，培养基碳氮比能够影响菌丝生长，而本试验能够明确看出，碳氮比为30∶1时，供试灰树花菌株菌丝长势良好、生长快，与张一帆等灰树花菌丝体的生长速度随栽培料碳氮比上升而加快的结论相一致[4]。但是当氮源逐渐减少时，菌丝体的生长也会受到一定的限制。