寻常型银屑病皮损中Cx蛋白及其mRNA表达及与病情严重程度的相关性研究

夏米娜，刘彦群，翟晓翔

（1.徐州市中医院，江苏徐州221000；2.徐州医科大学附属医院，江苏徐州221000）

银屑病是一种有遗传背景的自身免疫性皮肤病，30%的银屑病患者其发病机制主要和免疫、遗传、感染以及环境因素有关。近年来，有学者提出，银屑病的发病与病情发展与细胞间信息传递的异常有关，缝隙连接是细胞间信息传递的基础结构，缝隙连接（Cx）蛋白是缝隙连接的最小功能单位，Cx蛋白的水平高低直接影响细胞的新陈代谢、增殖、分化及内环境的稳定[1]。本文旨在研究分析部分Cx蛋白及其mRNA在寻常型银屑病皮损中的表达水平及其与病情严重程度的联系，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 临床资料 选取2015年1月—2017年12月我院接诊治疗的寻常型银屑病患者80例作为研究组，其中男46例，女34例，年龄20～65岁，平均（36.1±4.4）岁，病程 3个月～15年，所选取的患者病理组织检测结果及临床症状均符合中华医学会寻常型银屑病的诊断标准。

排除标准：①有心、肝、肾、脑、血液等严重系统疾病者；②半年内接受过系统或局部银屑病治疗者；③免疫功能紊乱者；④合并患有其他皮肤科疾病者；⑤长期或近期接受免疫抑制机或生物制剂治疗者；⑥孕期及妊娠期女性患者。

选取同期在我院进行体检的健康人80例作为对照组，其中男43例，女37例，年龄18～65岁，平均（35.5±3.9）岁。

研究组和对照组年龄、性别一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05），可进行研究对比，本研究所选取的患者均事先知情，签署知情通知书并获得了本院伦理委员会的批准。

1.1.2 主要试剂 免疫组化试剂盒，美国Sigma公司；基因组扩增试剂盒，美国Sigma公司；DAB显色试剂盒，美国Sigma公司；其余试剂均为国产分析纯。

1.1.3 仪器与设备 B203LED型光学显微镜，重庆奥特光学仪器有限公司；DMI6000B型倒置荧光显微镜，美国Sigma公司。

1.2 方法

1.2.1 病情评定 采用银屑病皮损面积与严重程度指数（PASI）评分对患者病情进行评定[2]。根据PASI总分进行病情分级：PASI≤15为轻度，15＜PASI＜30 为中度，PASI≥30 为重度。

1.2.2 指标检测 采集对照组和研究组皮损及正常皮肤组织，制作2份切片，分别用作蛋白及其mRNA检测。严格按照试剂盒说明书进行染色操作，分别采用光学显微镜和倒置荧光显微镜对染色结果进行观察，以胞核或胞质内出现黄色或棕黄色颗粒为阳性染色，以无明显染色或组织色与背景色一致为阴性对照。400倍视野下取4个有代表性且非连续的视野，观察切片染色深度和分布情况，采用Image pro-Plus6.0软件计算分析皮损组织与健康皮肤Cx蛋白及其对应mRNA的光密度平均值IOD/AOI。

1.3 统计学处理 选用SPSS 19.0统计学软件进行数据处理，计量资料采用X+S（mean±SD）描述，多组间比较采用F值检验，2组间比较采用配对t检验，采用Pearson相关系数进行相关行分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Cx蛋白表达比较 4组患者Cx26蛋白平均光密度值比较差异有统计学意义（F=10.620，P=0.000），轻度患者Cx26蛋白平均光密度值高于对照组（t=20.461，P=0.000），中度患者Cx26蛋白平均光密度值高于轻度患者（t=7.082，P=0.004），重度患者Cx26蛋白平均光密度值高于轻度患者（t=10.083，P=0.002）。4组患者Cx43蛋白平均光密度值比较差异有统计学意义（F=16.911，P=0.000），轻度患者 Cx43蛋白平均光密度值高于对照组（t=11.274，P=0.002），中度患者Cx43蛋白平均光密度值高于轻度患者（t=4.382，P=0.004），重度患者 Cx43 蛋白平均光密度值高于轻度患者（t=5.773，P=0.004）。4组Cx30、Cx31、Cx31.1、Cx32、Cx37 及 Cx45 蛋白平均光密度值比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

2.2 mRNA表达比较 4组患者Cx26蛋白对应mRNA平均光密度值比较差异有统计学意义（F=8.988，P=0.001），轻度患者Cx26蛋白对应mRNA平均光密度值高于对照组（t=9.151，P=0.001），中度患者Cx26蛋白对应mRNA平均光密度值高于轻度患者（t=5.044，P=0.004），重度患者Cx26蛋白对应 mRNA平均光密度值高于轻度患者（t=7.312，P=0.002）。4组患者Cx43蛋白对应mRNA平均光密度值比较差异有统计学意义（F=11.149，P=0.000），轻度患者 Cx43蛋白对应mRNA平均光密度值高于对照组（t=7.422，P=0.002），中度患者Cx43蛋白对应mRNA平均光密度值高于轻度患者（t=7.310，P=0.002），重度患者Cx43蛋白对应mRNA平均光密度值高于轻度患者（t=8.579，P=0.001）。4 组 Cx30、Cx31、Cx31.1、Cx32、Cx37及Cx45蛋白对应mRNA平均光密度值相比差异无统计学意义（P＞0.05），见表 2。

2.3 相关性分析 比较分析表1、表2中不同病情患者CX蛋白及其mRNA表达水平，Cx30、Cx31、Cx31.1、Cx32、Cx37、及 Cx45及其 mRNA 在不同病情严重程度患者间的表达差异无统计学意义（P＞0.05），轻度、中度和重度患者Cx26和Cx43蛋白及其mRNA表达差异有统计学意义（P＜0.05），Cx26（r=0.624，P＜0.01）和 Cx43（r=0.595，P＜0.01）及其 mRNA 与 PASI评分存在显著的正相关性。

3 讨论

银屑病是临床皮肤科的常见疾病，有影响因素多、病程长、病情顽固易复发的特点，其发病机制受多基因遗传、免疫、环境等因素影响。遗传因素：银屑病属于一种常见的多基因且复发的遗产疾病，以及成为当今各国皮肤病和遗传学家研究的重点对象。研究数据显示，FANs在汉族人群中进行精密定位后发现，HLA-C成为易感基因[3]。在各国银屑病患者中，13q21-32和17q22-25证实LCE基因属于易感基因，和银屑病的病理学改变以及角质细胞的增生过度有相关性。免疫因素：银屑病不仅表现在皮肤损伤，并且还存在单核细胞和淋巴细胞浸润，主要的病理特征是T淋巴细胞真皮浸润，主要是通过T淋巴细胞介导免疫在银屑病的发病中发挥着重要作用，T淋巴细胞会活化并释放白细胞介素（IL），IL-6和IL-8受到刺激后会促进胶原细胞增生，出现白细胞凝聚和黏附。巨噬细胞会促进IL-α和干扰素（IFN）-γ的分泌，诱导内皮细胞表达，会造成白细胞的外渗。多种细胞共同作用发生免疫反应，角质细胞作为靶细胞，促进细胞因子间的表达，诱导表皮发生免疫反应。研究显示银屑病患者的病变位置棘层细胞增厚，且末梢神经增生，长时间在较高的炎性水平中，经过治疗患病处，肥大细胞密度降低，但是与正常相比，仍然很高[4]。因此，其是造成银屑病经常反复发病的原因。环境因素：银屑病发病和季节有相关性，银屑病的初次发病在春季的时间较多，在冬季会加重，日照时间也是一种不利因素。吸烟会促进中性粒细胞的活化，可以改变吞噬细胞的氧化代谢，加重炎症反应，对酶的释放有促进作用，从而加重患者的皮损状况。

表1 对照组和研究组CX蛋白平均光密度值比较 （mean±SD）

表2 对照组和研究组CX蛋白对应mRNA平均光密度值比较 （mean±SD）

Cx蛋白是细胞缝隙连接的基本功能单位，细胞缝隙连接是广泛存在于除血细胞和骨骼细胞外的其他细胞间的一种连接形式，细胞通过缝隙连接进行信息、物质和能量的传递交换，从而调节细胞新陈代谢、增殖和分化，维持细胞内环境稳定，目前临床已发现的Cx蛋白约有20多种，根据蛋白质相对分子质量进行命名，如 Cx26、Cx30、Cx32、Cx37、Cx40、Cx43等，不同的连接蛋白参与调节不同的生理活动[5-8]。Cx26参与调节控制细胞的信息传递及分化，在内耳和毛囊外毛根鞘有显著的高表达，Cx26的异常突变对皮肤损伤和耳聋与有着直接的影响，临床差异较大，导致皮肤过度角化的情况相对较多[9-10]。Cx30主要表达于表皮、大脑和内耳中，其突变可引起汗性外胚层发育不良，又称为Clouston综合症，临床表现为甲发育不良、掌跖角化过度、毛发稀疏，部分患者并发有听力减退、智力障碍、斜视等，临床差异较大。Cx31主要表达于表皮颗粒层，作用于角质形成细胞分化晚期，其突变可引起可变性红斑角化症，多发病于出生时或早年，临床特征主要表现为正常皮肤或红斑上出现角化过度性斑片，斑片存在时间及部位无规律性，少部分持久存在。Cx43分布较为广泛，几乎存在于所有组织和细胞中，其突变对皮肤、毛发、神经退化等均有一定的影响。多项研究指出，在皮肤病中，Cx蛋白最明显的表达是上调增加角质形成细胞的增殖和分化，例如Cx26和Cx43在银屑病斑块及肿瘤乳头瘤中的显著升高[11，13]。

本文研究中，2 组 Cx30、Cx31、Cx31.1、Cx32、Cx37及Cx45蛋白及其对应mRNA表达比较差异无统计学意义（P＞0.05），研究组 Cx26、Cx43 蛋白及其对应mRNA表达显著高于对照组（P＜0.05），不同病情严重程度的患者Cx26和Cx43蛋白及其mRNA表达差异有统计学意义（P＞0.05），Cx26（r=0.624，P＜0.01）和 Cx43（r=0.595，P＜0.01）及其 mRNA 表达水平与PASI评分存在显著的正相关性，说明Cx26和Cx43与银屑病的发病及病情发展存在显著的紧密联系，其表达水平高低可以在一定程度上反应病情程度。本文研究结果与Shaker等[14]和Boehncke[15]的结果保持一致。

综上所述，本文通过对比寻常型银屑病患者皮损组织与健康人正常皮肤中部分Cx蛋白及其mRNA表达水平的差异，分析不同病情患者指标表达水平与病情严重程度的联系，得出Cx26和Cx43及其mRNA表达水平与患者PASI评分正相关，其表达水平的高低可以在一定程度上直接反应病情程度，为银屑病临床治疗中病情诊断及监控提供乐一些理论参考，但研究内容相对较为局限，对于Cx蛋白与上述疾病的作用机制还需要更进一步的研究支持。