白介素-17、白介素-35在稽留流产患者血清中的表达及临床意义

李 丽, 张 羽, 李红梅

(延安大学附属医院 产科, 陕西 延安, 716000)

稽留流产(MA)是指胚胎或胎儿虽然已经在子宫内死亡，但没有自动从机体内排出的自然流产形式，目前发生率有较为明显的增高趋势[1]。MA发病复杂，目前仍有50%病因无法明确[2], 而免疫因素成为近几年的研究热点。辅助性T细胞(Th)17/调节性T细胞(Treg)模式在母胎界面的免疫调节影响着妊娠结局[3], 其中白介素-17(IL-17)是Th17细胞分泌的具有促炎作用的炎症因子，白介素-35(IL-35)是Treg细胞分泌的具有抑炎作用的抑炎因子，二者在母胎界面的动态平衡对妊娠起着决定性作用[4]。本研究通过检测母体外周血血清IL-17及IL-35的表达水平来分析其对MA的影响，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年3—9月在本院就诊的30例MA患者设为病例组，纳入标准: 停经7～12周，既往月经规律，经血清人绒毛膜促性腺激素(HCG)及B超动态监测诊断为MA患者; 无感染、内分泌异常、生殖系统畸形、染色体异常等。另选取同期30例正常早孕要求终止妊娠患者设为对照组，纳入标准: 停经7～12周，既往月经规律，B超可见胎心，本次妊娠无感染、保胎、先兆流产史; 患者同意。排除标准: 有其他内外科疾病合并症史、不良嗜好史。2组患者年龄、孕周及孕次比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。本研究经医院伦理委员会审核并通过。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂: HBS酶标仪和HBS-4009全自动洗板机购买自华泰和合商贸有限公司, HT-400B电热恒温培养箱购买自上海赫田科学仪器有限公司, TGL-168 离心机(上海安亭科学仪器厂), XW-80A 旋涡离合器(上海青浦沪西仪器厂), DHG-9023A 电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司), 0.1～50.0 mL分液器(TOMOS LIFE SCIENCE Group), 人IL-17和IL-35酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒均购买自上海抚生实业有限公司。

1.2.2 标本的采集与处理: 2组患者均在行人工流产术前采集肘前静脉血5 mL, 以3 500 转/min的转速离心15 min后取上层血清，采用ELISA方法检测血清中IL-17、IL-35浓度，具体实验步骤严格按照试剂盒说明进行操作。

1.3 结果计算与判断

采用酶标仪测出标准品各浓度在450 nm处的光密度(OD)值。以标准品浓度为横坐标，标准品OD值为纵坐标做出标准曲线。将所有样品OD值根据标准曲线得出样品血清中IL-17及IL-35的浓度值。

1.4 统计学分析

2 结 果

2.1 血清中IL-17及IL-35浓度水平变化

观察组血清IL-17浓度显著高于对照组(P<0.05), IL-35浓度显著低于对照组(P<0.05)。见表1。

表1 2组患者血清IL-17、IL-35浓度比较 pg/mL

IL-17: 白细胞介素-17; IL-35: 白细胞介素-35。

与对照组比较, *P<0.05。

2.2 血清及胚胎绒毛组织中IL-17及IL-35表达的相关性分析

2组患者的血清及胚胎绒毛组织中IL-17及IL-35的表达均呈负相关(r=-0.756,P<0.05)。

3 讨 论

表达父系Ⅰ类抗原的滋养层被认为类似于半同种异体移植物，可被母体CD4+T细胞所排斥，因此，妊娠的过程会激发母体一系列的免疫反应[5], 而母体能否对其产生免疫耐受对于胚胎的植入及维持至关重要[6]。一次成功的妊娠取决于母胎界面免疫因子的动态平衡，当胚胎植入时，母体内促炎因子会及时减少，免疫调节会转向免疫耐受，从而抑制机体对胚胎的排斥反应[7]。在这一系列适应性免疫应答过程中，Th细胞和Treg细胞发挥了重要作用[8]。

与Th1及Th2不同, Th17细胞形成了CD4+T淋巴细胞的新子集，介导外来组织的炎症反应、自身免疫疾病及同种异体移植物的排斥反应。而这些细胞与Treg细胞密切相关, Treg细胞是抑制机体自身免疫炎症反应的重要调节因素，特别是在外周血及外周组织[9]。研究[10]表明，妊娠失败与体内Treg细胞数量的减少有关，且在不明原因复发性流产患者体内也观察到了Th17/Treg细胞的免疫失衡。此外，还有学者[11]认为，促进同种异体移植物排斥的Th17型细胞相关因子可能会导致妊娠的不良结局，而促进母体对胎儿免疫耐受的Treg细胞相关因子可能会改善妊娠结局。

IL-17为Th17细胞分泌的促炎因子，在复杂的免疫炎症反应中发挥着重要作用。IL-17分为6种类型，即IL-17 A～F, 其DNA序列具有同源性，属于同一个家族[12]。IL-17A是家族中最早发现的炎性因子，当机体受到内源性、外源性、病毒、真菌及寄生虫等感染时, IL-17A会及时介导机体产生炎症反应，从而保护机体免受病原体入侵。但当这种炎症反应过度激活时，便会对自身组织进行攻击从而发生自身免疫性疾病。同理，当胚胎这种半同种异体移植物植入母体时，若机体对其产生过度排斥，将会导致不良的妊娠结局，甚至发生流产。Qian等[3]研究认为，对于习惯性流产、子痫前期、先兆流产等病理性妊娠患者来说，其血清中IL-17水平明显较高，提示IL-17水平升高与患者妊娠失败具有一定相关性。本研究结果显示, MA患者体内IL-17含量较正常妊娠患者明显增多，与Qian等研究结果一致。

在Th17/Treg免疫调节的模式中, Treg细胞可以产生抑制性炎症因子IL-35。IL-35是2007年被命名的一种新型免疫抑制因子，属于IL-12家族，由α和β链的异源二聚体组成，受体为IL-12Rβ2和gp130[13]。IL-35主要由Treg细胞分泌，并且对Treg细胞介导的体内、外免疫抑制调节有着必不可少的作用。越来越多的研究表明，IL-35在自身免疫性疾病和传染病中担任重要角色。有研究[14]表明，IL-35可有效减轻同种异体移植物的排斥反应，并且在免疫性、感染性等类型的疾病发生、发展过程中，可能发挥较为独特的作用。而在母胎界面中，IL-35可以调节免疫抑制作用，减少机体对胚胎的攻击，从而确保妊娠顺利进行。Ozkan等[4]报道称，复发性流产患者体内IL-35的表达水平明显较正常妊娠患者低，与本研究结论一致。

因机体对外来物的识别作用产生一系列的适应性免疫应答，当免疫炎症反应大于免疫抑制反应时，机体将出现排斥作用。但正常的妊娠过程并没有因为免疫排斥作用而导致妊娠失败，而是通过免疫反应的“重新调整”，激活了免疫抑制作用而保护胚胎顺利生长，这就是免疫调节的动态平衡。因此，本研究通过检测外周血中Th17/Treg细胞的特异性相关因子的含量，间接反映两者的免疫调节作用对妊娠的影响。只有当IL-17/IL-35达到免疫平衡，即促炎反应与抑炎反应达到平衡时，才能确保妊娠物不被母体所排斥，最终使胚胎顺利生长。本研究对稽留流产患者血清中IL-17、IL-35的表达水平进行检测，提示Th17/Treg在不良妊娠结局中可能发挥较为关键的作用。本研究结果也显示, IL-17升高及IL-35降低与不良妊娠有关，并且二者间的表达存在负相关。

本研究可为诊断MA提供辅助性参考指标，为提早预测MA提供一定的理论依据，进而预防可能发生的不良妊娠结局。基于细胞的治疗已成为减轻移植后排斥反应的新方法，为加强母婴安全提供了一定理论依据。