鸡肉组织中四环素类兽药残留检测研究与分析

封红瑞　田欣欣　李松涛　王孜轩　李双江

摘要：为更详细了解山东省德州市临邑县鸡肉组织中四环素类兽药残留情况，本文对国家标准GB/T6682-2008采用的高效液相色谱一串联质谱的测定方法进行了研究改良。采用固相萃取法对鸡肉组织中的土霉素、四环素、强力霉素残留同时进行提取、净化、富集、检测。

关键词：鸡肉;兽药残量;高效液相色谱法;检测研究

四环素类抗生素是由放线菌产生的一类广谱性抗生素，对大多数革兰氏阳性菌和阴性菌可起到抑制杀菌的作用，因而被广泛的用于治疗各种感染性疾病，微量添加在饲料或动物饮水中则用于预防疾病，提高饲料的利用率，促进动物生长等。久用四环素类抗生素可引起畜禽等动物机体的正常菌群减少，导致动物体内维生素缺乏，后经食物链循环间接对人体健康造成潜在损害。因此，检测鸡肉组织中四环素类残留量对保障人体健康有很重要的意义。本文根据四环素类抗生素的特性，采用HLB小柱作为固相萃取柱，用Mcllvaine-Na2EDTA缓冲溶液对鸡肉组织进行低温提取，并对GB/T6682-2008采用的高效液相色谱法进行研究改良，运用于鸡肉组织的检测，建立了一种加标回收率高、灵敏度更高、检测结果更准确的检测方法。

1.材料与方法

1.1样品来源

本次研究于从临邑县不同地区市场随机购买12只肉鸡，每只肉鸡体重为2.0～2. 5kg，屠宰后取肌肉组织置于封口袋内，逐一标记，并保存在3℃的恒温保温箱里待检测。 1.2仪器设备 高效液相色谱仪、旋涡振荡器、移液枪、固相萃取柱、0. 45 um微孔滤膜等。

1.3试剂

盐酸土霉素、盐酸强力霉素、盐酸四环素、甲醇、乙二胺四乙酸二钠、柠檬酸、磷酸氢二钠氢氧化钠等。

1.4限量标准

2.实验方法

2.1 Mcllvaine-Na2EDTA缓冲溶液的配置

分别称取1. 29g柠檬酸，1.09g磷酸氢二钠，3.72g乙二胺四乙酸二钠于烧杯中，用90mL去离子水溶解，并用氢氧化钠调节pH=4.O±0.5，转移至lOOmL容量瓶中，并定容至lOOmL，摇匀待用。

2.2标准溶液的配置

准确称取50.Omg三种四环素类抗生素于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配置成1.O mg/mL的标准储备液，然后梯度稀释为lOOppm、lOppm后冷冻保存待用。

2.3流动相的配置

称取7. 2g磷酸二氢钠于烧杯，加入600mL蒸馏水，精密过滤，并用氢氧化钠调节pH=2.5，超声20min。

2.4样品提取

取2.Og鸡肉样，置于50mL离心管中，加入8mL McllvaineNa2EDTA缓冲溶液，涡旋混匀4min，离心机转速8000r/min离心lOmin，取上清液于另一离心管内。

2.5净化

在HLB固相萃取柱中加入滤膜，后称取0.5g HLB于固相萃取柱，依次用3mL甲醇、3mL水活化，加入上清液过柱，用3mL水淋洗、减压抽干3min，后用3mL草酸甲醇溶液洗脱，将样品洗到离心管中，用氮气将离心管中溶液吹干，用移液枪移取甲醇补至1mL，后用高效液相色谱仪检测鸡肉组织中四环素类残留量。

3.检测与分析

图3 2是加1 mL lOppm的四环素类的加标回收测的色谱图，根據色谱可以计算出四环素的回收率。土霉素、四环素、强力霉素峰面积分别为4. 4867mAU.min、4.0267mAU.min、1. 4884mAU.min，测出量分别为9.72ppm、9.46ppm、8.29ppm，理论量都是10.OOppm，加标回收率分别为97. 2%、94. 6%、82. 9%，说明改良后的检测方法可完全适用于鸡肉组织中四环素类兽药检测。

4.结论

测定结果显示，土霉素、四环素、强力霉素加标回收率分别为97. 2%、94. 6%、82. 9%，即结果说明抽检的临邑县鸡肉未检测出四环素类兽药残留。恰印证前期调研结果：养殖场在不同品种鸡的养殖过程中只使用中药。综上，随着国家对兽药的监管力度越来越大，养殖人员素质越来越高，鸡肉超标事件愈来愈少，人们的食品健康安全也能够得到更充分的保障。

5、方法的总结分析

本文采用HLB小柱为固相萃取柱，通过对提取液的选择、色谱条件的优化建立了一种加标回收率高、准确度高的鸡肉中3种四环素类抗生素的检测分析方法，该方法相对于现有国标方法具有基质干扰少、适用性强、结果准确，重现性好等特点。

四环素类抗生素种类繁多，具有不稳定、流动性强等特点，目前，虽然经改良的高效液相色谱法检测方法己能够实现对四环素类抗生素的精准检测，且选择性强、分辨率高、假阳性低，但其样品前处理较复杂，不适合现场实时筛查。相信随着检测分析技术的不断发展，未来将有更多检测手段使其不断的完善，能够更加快捷、高效的检测出鸡肉组织中的四环素类药物残留。

参考文献

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