通关藤注射液UPLC测定绿原酸含量方法学研究

胡茂玉 高丹丹 郑岳

摘要：UPLC测定绿原酸的方法与传统的HPLC相比，UPLC的速度、灵敏度及分离度均较HPLC更高，它缩短了分析时间，同时减少了溶剂用量降低了分析成本。为测定通关藤注射液绿原酸含量提供了新的检查方法。

关键词：绿原酸；含量；通关藤注射液

绿原酸具有保护心血管、降糖、降脂、抗菌、抗病毒、抗白血病、抗诱变、抗癌等药理作用[1]，但在体内能被蛋白质灭活。与咖啡酸相似，口服或腹腔注射时，可提高大鼠的中枢兴奋性。可增加大鼠及小鼠的小肠蠕动和大鼠子宫的张力。有利胆作用，能增进大鼠的胆汁分泌。对人有致敏作用，吸入含有本品的植物尘埃后，可发生气喘、皮炎等[2]。

1实验材料：

1.1仪器设备：超高效液相色谱仪（沃特世科技（上海）有限公司）、电子天平（梅特勒多利多）。

1.2試剂：甲醇、磷酸、高纯水、乙腈

2绿原酸含量UPLC测定方法学研究

2.1色谱条件

色谱条件：流动相比例乙腈：0.05%磷酸溶液=7：93；流速：0.50mL/min；柱温：30℃；进样量：3.0uL。

2.2方法学验证

2.2.1专属性。

检测方法：精密称取绿原酸对照品适量，配制成80μg/ml的绿原酸对照品溶液。再分别精密移取空白溶剂50%甲醇溶液、绿原酸对照品溶液和通关藤注射液3μl注入液相色谱仪，按照“2.1色谱条件”项下的条件进样。

合格标准：溶剂无干扰，绿原酸峰与相邻峰的分离度不得低于1.5

检测结果：空白溶剂在主峰位置无干扰，绿原酸峰与相邻峰的分离度为1.54，专属性符合要求。

2.2.2重复性

检测方法：取同一批通关藤注射液成品6份，分别按“2.1色谱条件”项下的条件进样，记录峰面积，计算RSD。

合格标准：重复性RSD小于等于2.0%。

检测结果：重复性RSD为1.0%，在接受标准范围内，说明重复性符合规定。

2.2.3线性

检测方法：取绿原酸对照品分别配制成20.54μg/ml、61.26μg/ml、82.16μg/ml、102.70μg/ml、143.78μg/ml、205.40μg/ml、287.56μg/ml的系列溶液，按“2.1色谱条件”项下的条件进样，记录峰面积。以进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，并绘制标准曲线，计算线性回归方程及相关系数。

合格标准：线性相关系数r≥0.999

检测结果：从上述可以得出相关系数为0.9998，大于目标值0.999，说明样品在20.54～287.56ug/mL范围内相关系数r为0.9997，在接受标准范围内，说明线性关系符合规定在配制的浓度20.54ug/mL-287.56ug/mL范围内呈现良好地线性。

2.2.4中间精密度

检测方法：精密称取绿原酸对照品适量，配制成79.3、79.4μg/ml和78.5、81.2μg/ml的绿原酸对照品溶液。由两名分析人员按“2.1色谱条件”项下的条件，分别测定同一批通关藤注射液6份平行样，计算出绿原酸含量及RSD%。

合格标准：中间精密度RSD≤2.0%

检测结果：中间精密度RSD为0.7%，在接受标准范围内，说明中间精密度符合规定。

2.2.5加样回收率

检测方法：精密称取绿原酸对照品适量，配制成79.4、79.3μg/ml的绿原酸对照品溶液。再精密称取绿原酸对照品20.54mg至50ml棕色容量瓶中，加50%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得绿原酸对照品储备液。

合格标准：加样回收率均在98%-102%范围内，且结果的RSD≤2.0%。

检测结果：加样回收率99.7%，RSD%=1.4%在接受标准范围内，说明回收率符合规定

2.2.6溶液稳定性

检测方法：取通关藤注射液，分别于0、1、2、4、8、12、18、24h时，按“2.1色谱条件”项下的条件进样，记录峰面积，计算RSD%。

合格标准：RSD%≤2.0%

检测结果如表1所示：

由上表可以看出其结果的RSD为0.7%，小于目标值2.0%，因此溶液在24h内稳定。

2.2.7耐用性

检测方法：以流动相比例、流速、柱温为本试验的试验因素，分别记作A、B、C，进行三因素正交试验，各因素均取三个水平。

合格标准：每批RSD%≤2.0%

检测结果：3批通关藤注射液绿原酸含量的RSD分别为0.5%、1.0%、0.8%，均小于目标值2.0%，因此耐用性符合规定。

2.2.8方法对比

检测方法：精密称取绿原酸对照品适量，配制成79.4μg/ml、79.3μg/ml的绿原酸对照品溶液。取6批已知绿原酸含量的通关藤注射液，按按“2.1色谱条件”项下的条件进样，记录峰面积，计算绿原酸含量与HPLC法测定的结果比较。

合格标准：F检验≤7.15，T检验≤2.228

检验结果：用1表示UPLC法测定结果，并以1测定数据为准，2表示HPLC法测定结果，结果评定：UPLC法与HPLC法测定数据无显著性差异。

3结论

本次方法学研究建立了UPLC测定绿原酸的方法。超高效液相色谱仪的仪器管路比HPLC更细，更易堵塞，因此检验中用的试剂为默克得甲醇和默克的乙腈，水为屈臣氏的蒸馏水。对照品溶液以及供试品溶液均用0.22um的滤头过滤后进样。

参考文献：

[1]严永旺，肖兰，周旭，等。绿原酸的药理作用及药用研发对策[J].中国药房，2017，（19）：143-146

[2]李恒华，罗超利，等。绿原酸的致敏作用研究[J].中国药房，2015，（13）：1766-1769.

（作者单位：南京圣和药业股份有限公司1

南京正大天晴制药有限公司2）

作者简介：

胡茂玉（1990—），女，江苏南京人，助理工程师，专业领域：药品检验与质量控制。

高丹丹（1988—），女，江苏南京人，助理工程师，专业领域：药品检验与质量控制。

郑岳（1992—），女，宁夏石嘴山人，助理工程师，专业领域：药品检验与质量控制。