拟南芥细胞周期基因AtCDC5的功能研究及抗体制备

徐金龙 梁爽 郁飞

摘要：MYB相关CDC5（Cell division cycle 5）蛋白对于细胞周期G2期的正常进行是必须的，但是在植物中对这种蛋白质的研究还较少涉及。本试验测量比较野生型拟南芥（Col-0生态型）和AtCDC5 T-DNA插入缺失突变体（GK_278809）的主根生长速度和长度，利用瞬时表达AtCDCS-GFP研究AtCDC5在拟南芥叶片叶肉细胞中的定位，同时利用AtCDC5N端144个氨基酸在大肠杆菌中进行原核表达和纯化，免疫家兔获得针对AtCDC5的多克隆特异性抗体，从表型、细胞和蛋白质水平研究AtCDC5基因的功能。结果表明，GK_278809的主根因发育受到抑制而生长速度缓慢;AtCDC5-GFP融合蛋白主要定位于细胞核中：经过分离得到的AtCDC5蛋白抗血清能够有效地检测出10ng原核表达的AtCDC51_144抗原，并在原生质体AtCDC5过表达体系中检测出1条分子量约为120 000的条带，此条带与AtCDC5-GFP大小相近。本研究成功制备出AtCDC5蛋白的多克隆抗体，为进一步研究AtCDC5蛋白影响细胞周期从而影响植物生长发育提供了研究基础。

关键词：细胞周期基因CDC5;亚细胞定位;原核表达;抗体制备;

中图分类号：Q786 文献标识码：A 文章编号：1000-4440（2019）01-0026-07

细胞周期作为细胞生命活动的基本过程，在生物体生长发育进程中发挥着极其重要的功能。目前已发现与细胞周期调控有关的分子主要包括三大类：期蛋白、细胞周期蛋白依赖性激酶（cDK）以及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂（CKI）。这三类因子相互作用，共同维护细胞周期的顺利进行。在拟南芥中，AtCDC5属于一种细胞周期蛋白，它是生物体进行正常生命活动的根本保证。AtCDC5表达主要在具有较高分裂活性的组织中，并且贯穿于整个胚胎形成过程。AtCDC5对于拟南芥G2/M期的转换至关重要，AtCDC5功能缺失突變体表现为胚胎致死，该致死表型也限制了对AtCDC5功能的研究。