苍耳子标准汤剂质量研究

耿彦梅 高晗 孙福仁 李雪利 张肖建 田方 董璐萌 曾永祯 李军山

摘要：为了更好地评价不同产地苍耳子标准汤剂的出膏率、绿原酸含量及含量转移率，对苍耳子标准汤剂的质量进行了研究。采用日本ShimadzuLC-20A型高效液相色谱仪，AgilentZorbaxEclipseC18色谱柱（2.1mm×250mm，5.0μm），以乙腈-磷酸为流动相，柱温为28℃，流速为1mL/min，检测波长为327nm，建立了苍耳子标准汤剂中绿原酸含量的测定方法。结果表明：15批苍耳子标准汤剂出膏率的均值为4.30%，均值±3SD为3.28%～5.32%;绿原酸含量均值为3.44mg/g，均值±3SD为0～7.16mg/g;绿原酸含量转移率均值为36.54%，均值±3SD为0.66～72.42%;不同产地苍耳子的出膏率较为稳定，但绿原酸含量及含量转移率差异较大。经方法学考察，苍耳子标准汤剂中绿原酸含量测定方法稳定，具有较高的重复性、稳定性及可信度，可用于苍耳子标准汤剂的质量评价，为苍耳子配方颗粒后续研究及大规模生产提供数据支持。

关键词：医药工程;苍耳子;标准汤剂;含量测定;绿原酸

中图分类号：R917文献标志码：A

文章编号：1008-1534（2019）02-0122-06

苍耳子为菊科植物苍耳XanthiumsibiricumPatr.的干燥成熟带总苞的果实，秋季果实成熟时采收，经干燥、去除梗和叶等杂质而得[1]。苍耳子始载于《神农本草经》，原名葈耳实，列为中品。《本草纲目》记载，呆耳，亦名胡耳，苍耳等。《本草品汇精要》记载苍耳子“有毒”。苍耳子所含化学成分复杂多样，主要包括黄酮类、倍半萜类、噻嗪类、水溶性苷类、甾醇类、酚酸及其衍生物、蒽醌类、挥发油类等化学成分[2-11]。研究表明，苍耳子中各成分含量无明显差异，但其中主要成分绿原酸的含量地域差异性较大[12-13]。现代研究表明，苍耳子具有抗炎、镇痛、抗过敏、抗菌、抗肿瘤、降血糖、提高免疫力等功效[14-18]。

目前，人们对苍耳子饮片化学成分及特征图谱的研究相对比較透彻，但针对苍耳子标准汤剂的研究寥寥无几。笔者通过对15批苍耳子标准汤剂的制备及其主成分含量测定进行研究，探讨苍耳子煎液的生产工艺及质量评价，为苍耳子配方颗粒后续研究及大生产提供数据支持。

1主要仪器与材料

1.1仪器

日本ShimadzuLC-20A型高效液相色谱仪，AgilentZorbaxEclipseC18色谱柱（2.1mm×250mm，5.0μm），分析天平（赛多利斯），JM-A5002电子天平（余姚市纪铭称重校验设备有限公司提供，十万分之一），水循环真空泵（上海申生科技有限公司提供），DHG-9140A热风循环鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司、太仓精宏仪器设备有限公司提供），KH3200E型超声波清洗器（江苏昆山禾创超声仪器有限公司提供）。

1.2材料

绿原酸对照品，批号为110749-201718，纯度为99.3%，中国食品药品检定研究院提供;甲醇，分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司提供;乙腈，天津市科密欧化学试剂有限公司提供;磷酸，HPLC级，美国ACS公司（上海）提供。

1.3饮片

15批苍耳子饮片经河北省药品检验研究院孙宝惠主任鉴定为菊科植物苍耳XanthiumsibiricumPatr.的干燥成熟带总苞的果实。样品详细信息见表1。

2实验部分

2.1标准汤剂的制备

2.1.1制备方法

取苍耳子药材，压扁，称取100g，转移至圆底烧瓶中，第1次加8倍量纯化水，浸泡30min，加热煎煮20min，将药液趁热过50μm（300目）滤布;第2次加6倍纯化水，煎煮15min，将药液趁热过50μm（300目）滤布。合并2次煎液。将提取液放入冰浴中快速冷却，将冷却后的提取液倒入旋转蒸发仪中，于真空低温浓缩（温度不超过60℃），浓缩至生药量与药液体积之比约为1∶3，将浓缩液冷冻干燥，即得苍耳子标准汤剂。

2.1.2制备条件

称取苍耳子饮片100g若干份，分别考察破碎、不同提取溶剂对苍耳子标准汤剂出膏率、绿原酸含量及含量转移率3个参数的影响。结果见表2和表3。

从表2和表3可以看出，破碎、提取溶剂均对苍耳子标准汤剂的出膏率、绿原酸含量及含量转移率有影响。其中，苍耳子压扁后，有助于苍耳子中成分的溶出，相关指标明显高于未压扁组。纯化水为提取溶媒时，干膏得率基本接近，而苍耳子标准汤剂中绿原酸含量、含量转移率明显高于饮用水组。

结合《中药配方颗粒质量控制与标准技术要求》（征求意见稿）中关于标准汤剂制备的指导原则，苍耳子为辛凉解表药，属清热类药物，煎煮时间不宜过长，2次煎煮以20min和15min为宜;同时，当加入8倍量水时，即可完全浸泡苍耳子饮片，所以2次加水量分别为8倍和6倍。

2.1.315批汤剂的制备

按2.1.1项所述方法，制备15批不同产地、不同批号的苍耳子药材，得到15批苍耳子标准汤剂。

2.2色谱条件

采用AgilentZorbaxEclipseC18色谱柱（2.1mm×250mm，5.0μm），流动相为乙腈-0.4%（体积分数，下同）磷酸溶液（二者体积比为10∶90），等度洗脱，流速为1mL/min，检测波长为327nm，柱温为28℃，进样量为10μL。

2.2.1对照品溶液的制备

取绿原酸对照品适量，精密称定，置于棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1mL含50μg的溶液，即得对照品溶液（于10℃以下保存）。

2.2.2供试品溶液的制备

将苍耳子标准汤剂膏粉研细，取0.1g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入含5%甲酸的50%甲醇25mL，称定质量，超声20min，放冷，再称定质量，用含5%甲酸的50%甲醇补足减失的质量，摇匀，过0.45μm滤膜，即得。

2.2.3方法学考察

1）专属性考察

使用空白溶剂作为阴性对照，通过对照品溶液指认苍耳子标准汤剂样品中的绿原酸峰，进行专属性试验，见图1。在绿原酸出峰位置处，阴性样品未见有明显干扰，说明本方法的专属性良好。

2）线性考察

精密称定绿原酸对照品0.072531g，置于50mL棕色量瓶中，加入50%甲醇稀释至刻度，摇匀，备用。分别吸取上述储备液1，2，4，6，8，10mL于20mL容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，备用。分别吸取以上各对照品溶液2μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以绿原酸质量浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，如图2所示，回归方程为y=3×106x-128.41，R2=0.9999，表明绿原酸质量浓度为0.073～1.451mg/mL时线性关系良好。

3）精密度考察

取苍耳子饮片，按2.2.2项所述方法制备供试品1份，重复测定6次。结果显示，苍耳子标准汤剂中绿原酸平均含量为4.10mg/g，RSD值为0.95%，说明仪器符合精密度要求。

4）重复性考察

取苍耳子饮片，按2.2.2项所述方法制备供试品，平行制备6份样品，测得苍耳子标准汤剂中绿原酸的平均含量为4.09mg，RSD值为0.09%，符合《中华人民共和国药典》中的相关规定（≤1.5%）。

5）稳定性考察

取2.2.2项下供试品，分别在0，3，6，9，12h测定绿原酸含量。结果表明，苍耳子标准汤剂膏粉供试品在12h内绿原酸的平均含量为3.89mg/g，RSD值为0.57%，表明供试品在12h内较为稳定。

6）准确度考察

精密称取苍耳子（含量为4.09mg/g）标准汤剂膏粉6份，每份0.05g。分别精密吸取绿原酸对照品溶液（质量浓度为0.03984mg/mL）5mL，按供试品溶液的制备方法，再分别精密加入含5%甲酸的50%甲醇溶液20mL，制成6份供试品溶液。加样回收率的范围为100.96%～102.69%，平均回收率为101.62%，RSD值为0.77%，符合《中华人民共和国药典》中的相关要求（回收率限度为95%～102%）。

7）检测限与定量限

检测限：按照《中华人民共和国药典》第四部附录9101药品质量标准分析方法验证指导原则进行测定，将已知低浓度供试品测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，信噪比为3∶1，绿原酸最低质量浓度为1.28×10-1μg/mL。

定量限：按照《中华人民共和国药典》第四部附录9101药品质量标准分析方法验证指导原则进行测定，将已知低浓度供试品测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，信噪比为10∶1，能被定量测定的绿原酸的最低质量浓度为5.54×10-1μg/mL。

3结果及分析

3.115批苍耳子标准汤剂绿原酸含量测定

取15批苍耳子标准汤剂膏粉，分别按2.2.2项所述方法制备供试品溶液，测定结果如表4和表5所示。

3.2绿原酸含量及含量转移率结果分析

15批苍耳子标准汤剂出膏率均值为4.30%，均值±3SD为3.28%～5.32%;绿原酸含量均值为3.44mg/g，均值±3SD范围为0～7.16mg/g;绿原酸含量转移率均值为36.54%，均值±3SD为0.66～72.42%。15批标准汤剂出膏率、绿原酸含量及含量转移率均在此范围内。

结果表明，不同产地的苍耳子标准汤剂的出膏率差异较小，绿原酸含量及含量转移率差异较大，存在地域性差异。总体来看，内蒙古地区的苍耳子饮片含量及标准汤剂中绿原酸的含量及含量转移率都较黑龙江、吉林地区高。

4讨论

4.1提取溶剂及提取方式考察

通过对含5%甲酸的10%甲醇、含5%甲酸的30%甲醇、含5%甲酸的50%甲醇、含5%甲酸的70%甲醇、100%甲醇进行比较可知，含5%甲酸的50%甲醇对苍耳子标准汤剂中绿原酸的提取效率最高，故选择含5%甲酸的50%甲醇作为提取溶剂。经对比不同超声时间（10，20，30，40min），发现超声时间对苍耳子标准汤剂绿原酸的提取效率影响不大，考虑超声时间过长会导致溶液过热，故将超声时间定为20min。

4.2色谱条件考察

分别考察了乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸、乙腈-0.2%磷酸、甲醇-水4个流动相体系。结果表明，乙腈-0.1%磷酸对绿原酸的分离效果最佳，且各峰峰形相对较好。

4.3检测波长选择

分别选择310，327，340nm作为检测波长进行试验，发现不同检测波长下绿原酸的峰面积有较大差异，以327nm下测定的绿原酸色谱峰面积最大，且分离度较好，故选择327nm作为检测波长。

5结语

为规范中药配方颗粒质量与标准的相关研究，《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求》（征求意见稿）指出，中药配方颗粒需要建立的标准主要包括初始原料的中药材标准、提取用原料饮片标准、中间体标准以及成品标准。为了更好地建立各中药配方颗粒的相关标准，建立相关含量的测定方法显得尤为重要。药材及饮片中各含量的测定方法在《中华人民共和国药典》中已有相应的规定，建立配方颗粒中间体及成品的标准是一项迫在眉睫的任务。

本次研究建立了苍耳子标准汤剂中绿原酸含量的测定方法，此方法具有较高的稳定性，可用于苍耳子标准汤剂的质量研究。通过选取具有代表性产地的15批苍耳子标准汤剂进行制备，确定了苍耳子标准汤剂的出膏率范围、绿原酸含量及含量转移率范围，为苍耳子配方颗粒的后续研究及大生产提供了数据支持。

《中华人民共和国药典》中规定苍耳子羧基苍术苷的含量不得超过0.35%。通过实验发现，由于苍耳子标准汤剂中羧基苍术苷的含量大大降低，因而常规方法不能更准确地测定羧基苍术苷的含量。為更好地反映苍耳子标准汤剂的质量标准，后续工作应继续完善苍耳子中羧基苍术苷含量的测定研究。

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