HPLC法同时测定小儿感冒颗粒中表告依春、绿原酸、毛蕊花糖苷的含量

王志轩 包冬雪

【摘要】目的： 建立高效液相色谱法同时测定小儿感冒颗粒中表告依春、绿原酸、毛蕊花糖苷含量的方法。方法：采用C18色谱柱;乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱;流速1.0ml/min;检测波长245nm。结果：表告依春、绿原酸、毛蕊花糖苷分别在21.12～2112.00ng，20.09～2009.83ng，19.32～1932.32ng范围内线性关系良好;平均加样回收率分别为95.2%、95.1%、96.6%。结论：建立的方法简便、准确、重复性好，可用于小儿感冒颗粒的质量控制。

【关键词】小儿感冒颗粒;表告依春;绿原酸;毛蕊花糖苷;HPLC

【中图分类号】R821.4+2      【文献标识码】A     【文章编号】2095-6851（2019）08-101-01

小儿感冒颗粒是由菊花、板蓝根、地黄等10味药组成，收载于《中国药典》2015年版一部，具有疏风解表，清热解毒的功效，用于小儿风热感冒，症见发热重，头胀痛、咳嗽痰粘、咽喉肿痛;流感见上述证候者。目前，已有文献报道测定其中绿原酸[1]、靛蓝与靛玉红[2]、薄荷脑[3]等的含量。表告依春是板蓝根的有效成分之一，具有抗病毒的功效[4-5]。绿原酸是菊花的有效成分之一，具有抗菌、抗病毒等作用功效[6-7]。毛蕊花糖苷是地黄有效成分之一，具有抗炎，提高免疫力的功效[8-9]。本实验采用高效液相色谱法同时测定小儿感冒颗粒中表告依春、绿原酸、毛蕊花糖苷三种成分的含量，可以用来控制其质量。

1 仪器与试药

1.1 儀器 Agilent 1260 高效液相色谱仪;电子分析天平（METTLER TOLEDO XPE26DR）

1.2 试药和材料 对照品：表告依春（批号111753-201706 含量100.0%）、绿原酸（批号110753-201716 含量99.3%）、毛蕊花糖苷（批号111530-201309 含量92.9%），均购自中国食品药品检定研究院，供含量测定用;小儿感冒颗粒，共3批（生产单位：承德新爱民制药有限公司，批号：181104，181106，181108），处方中各药材均由承德新爱民药业有限公司提供;乙腈（色谱纯，Fisher Scientific，美国）;甲醇（分析纯，天津市康科德科技有限公司）;磷酸（分析纯，天津佳兴化工玻璃仪器工贸有限公司）;水为娃哈哈纯净水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱采用SHISEIDO CAPCELL PAK C18（4.6mm×250mm，5μm），流动相：乙腈为A，0.1%磷酸为B，梯度洗脱（0～10min，7%A;10～25min，7%→13%A;25～40min， 13%A;40～60min， 13%→20%A;60～75min， 20%A;75～80min， 7%A），流速1.0ml/min，检测波长为245nm，进样量为10μl。

2.2 溶液的配制

2.2.1 对照品溶液的制备 分别精密称取表告依春对照品10.56mg、绿原酸对照品10.12mg、毛蕊花糖苷10.40 mg对照品置50ml容量瓶中，定容，摇匀，再分别吸取上述三种溶液各3ml置同一25ml容量瓶中，配制成表告依春浓度25.34 μg/mL，绿原酸浓度为24.28 μg/mL，毛蕊花糖苷浓度为24.96 μg/mL的混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取供试品适量，研细，精密称取5g，放于锥形瓶内，精密加入70%甲醇10mL，称定重量，加热回流30min，用70%甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液用0.22μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。

2.3 系统适应性试验 分别取对照品溶液和供试品溶液，按2.1项下色谱条件试验，结果见图1，在此色谱条件下，表告依春、绿原酸、毛蕊花糖苷三种成分可以得到很好的分离，理论板数按表告依春、绿原酸、毛蕊花糖苷峰计算，均不低于5000。

2.4 线性关系考察 分别精密量取三种对照品浓溶液1.0，2.0，3.0，5.0，7.0，10.0mL，放到100mL容量瓶内，加甲醇定容至刻度，摇匀，得到系列浓度的三种对照品溶液，按2.1项下色谱条件进行测定，以峰面积为纵坐标，以进样量为横坐标，计算三种对照品的线性回归方程如下。

表告依春Y =763831725.7X -73912.16，r=0.9998，n=6

绿原酸Y=174631919.4 X -36860.67，r=0.9999，n=6

毛蕊花糖苷Y =123761238.4X -9398.40，r=0.9998，n=6

结果表明，表告依春、绿原酸、毛蕊花糖苷分别在21.12～2112.00，20.09～2009.83ng，19.32～1932.32ng范围内线性关系良好。

3 讨论

3.1 流动相选择

小儿感冒颗粒中化学成分较复杂，为达到较好的分离效果，实验中参考不同文献[10-11]曾选择过不同比例的甲醇（或乙腈）与0.1%磷酸（或冰醋酸溶液）作为流动相，其中以乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱分离效果最为良好，故选择该流动相体系。

3.2 提取方法选择

在供试品制备时分别考察了不同提取溶剂，结果发现70%甲醇提取效果较好，又考察了超声提取、回流提取，结果发现回流提取可提取完全;同时对回流处理的时间进行了考察，发现回流处理30分钟即可提取完全。

3.3 检测波长选择

精密称取表告依春、毛蕊花糖苷、绿原酸对照品，用甲醇配制成适宜的浓度，在200～400nm进行光谱扫描。结果表明表告依春在245nm波长处有最大吸收，毛蕊花糖苷在332nm波长处有最大吸收，绿原酸在326nm波长处有最大吸收。综合考虑样品各吸收峰情况及杂质干扰选择245nm作为测定波长。

参考文献：

[1] 吴平平，李桂龙，靳文仙，等.小儿感冒颗粒中绿原酸测定方法的改进[J].中草药，2011，42（6）：1135-1137.

[2] 彭文进，赵士冶，冯秀珍，等.高效液相色谱法测定小儿感冒颗粒中靛蓝与靛玉红含量[J].中国现代药物应用，2009，3（6）：1-2.

[3] 宦正丹，倪慧艳.气相色谱法测定小儿感冒颗粒中薄荷脑的含量[J].抗感染药学，2018，19（5）：1483-1486.