酸碱度对秀珍菇新品种福秀5669菌丝体形态及锁状个数的影响

黄敏敏 张闽春 黄晓丽 刘 洋 李 巍 傅建炜* 姚清华*

（1福建省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，福建福州350003；2福建省武夷山市食用菌站，福建武夷山354300；3福建省南平市农业局，福建南平353000）

秀珍菇（Pleurotus geesteranus）中文名称为紫孢侧耳，别名姬菇、黄白平菇、美味侧耳等，属于真菌门，担子菌纲，伞菌目，侧耳科，侧耳属，是近年来栽培面积最广的珍稀食用菌之一。该菇富含鲜味氨基酸、甜味氨基酸、支链氨基酸、多种不饱和脂肪酸、蛋白多糖及维生素和铁、钙、磷、锌等微量元素。尤为值得一提的是，秀珍菇的蛋白质含量高于双孢蘑菇、香菇、草菇等食用菌，有“菇中极品”之称。扫描电镜广泛应用于番茄、水稻、甘蓝、烤烟等农作物[1-6]和野兔、扁蛾、嗜尸性蝇等动物[7-9]及多种细菌和真菌[10-16]的亚微机构和超微结构研究。食用菌菌种制作、培养过程中，培养基是关键性因素，其酸碱度（pH）对食用菌菌种的生长尤为重要，关系到菌种制作的成败[17]，并且对食用菌的产量和品质也有一定的影响。但应用扫描电子显微镜观察不同酸碱度的液体培养基对福秀5669菌丝体大小、锁状个数和表面结构等的影响尚未见报道。笔者观察不同酸碱度液体培养基培养福秀5669（图1）菌丝体，探讨pH对其菌丝直径、锁状个数和表面结构的影响，以期为福秀5669生产等提供科学参考。

图1 福秀5669

1 材料与方法

1.1 供试材料

福秀5669号，由福建省农业科学院土壤肥料研究所环保研究室食用菌育种课题组提供。

培养基配方：土豆200%，白糖20%，加水1000 mL。试验用的盐酸和氢氧化钠，购于国药集团化学试剂有限公司。

1.2 试验方法

首先将配制好的液体培养基用盐酸和氢氧化钠制成 pH5（C1）、pH6（C2）、pH7（C3）、pH8（C4）、pH9（C5）、pH10（C6）6个梯度（6个处理），装入三角瓶，每个三角瓶装量为50 mL，高压灭菌。每处理3个重复，每重复1瓶，待液体培养基温度冷却至26℃左右接种。接种后置于26℃生化培养箱培养，菌丝培养18 d取样作电镜观测材料。

1.3 电镜观察方法

切取不同处理的新鲜福秀5669菌丝体，迅速投入浓度为5%的戊二醛固定液中固定，并在4℃冰箱中存放4 h，用0.2 mol/L磷酸缓冲液漂洗3次，15 min/次，再用浓度1%锇酸对样品进行第二次固定，放在4℃冰箱存放2 h。将双固定好的样品先用0.2 mol/L磷酸缓冲液冲洗3次，每次10～15 min，再用乙醇进行梯度脱水：50%，70%，80%，90%，各脱水10～15 min，100%乙醇脱水3次，每次10 min，用环氧丙烷溶液置换2次。最后将样品置于日立HCP-2临界点干燥仪中干燥。干燥后的样品用铜台粘好后放入EIKO IB-5型离子镀膜仪上喷镀黄金，再用日本电子JSM-6380 Lv型扫描电子显微镜进行观察拍照。

1.4 测定方法

采用直接测定方法计算不同处理菌丝直径和菌丝锁状联合个数。每个样品的每个项目均分别观察了3个视野，据此统计菌丝锁状联合数、测量菌丝直径，按放大倍率换算成实际长度；采用了DPS7.05软件进行差异显著性检验。

2 结果与分析

2.1 不同酸碱度对福秀5669菌丝直径的影响

2.1.1 不同酸碱度对福秀5669菌丝最大直径的影响

由图1可知，C5（pH9）处理的福秀5669菌丝最大直径比C1（pH5）、C2（pH6）、C3（pH7）、C4（pH8）和C6（pH10）处理的福秀5669菌丝分别增加92.80%、31.69%、31.69%、28.53%和22.75%，差异达显著或极显著水平（P＜0.05和P＜0.01）。

图1 酸碱度对福秀5669菌丝最大直径的影响

2.1.2 不同酸碱度对福秀5669菌丝最小直径的影响

由图2可知，福秀5669菌丝最小直径C2与C3处理之间差异不显著（P＞0.05）。但C6、C5、C4和C1处理的福秀5669菌丝最小直径比C3处理的福秀5669菌丝分别小20.17%、57.95%、64.18%和67.47%，差异达显著和极显著水平（P＜0.05和P＜0.01）。

图2 酸碱度对福秀5669菌丝最小直径的影响

2.2 不同酸碱度下福秀5669菌丝体中锁状个数的影响

由图3可知，C5处理的福秀5669菌丝锁状个数比 C1、C2、C3、C4和 C6处理的福秀 5669 锁状个数多，且差异达极显著水平（P＜0.01）。

图3 酸碱度对福秀5669菌丝体中锁状个数的影响

2.3 不同酸碱度对福秀5669菌丝体表面结构的影响

由图4可知，C1处理（pH5）的福秀5669菌丝上有纹饰，大小较均匀，呈圆形，未见锁状联合。C2处理（pH6），菌丝呈圆形，表面有较浅纹饰，大小有的较均匀，有的锁状变形带有纹饰，有的表面光滑。C3处理（pH7）的菌丝大小较均匀，表面有大小不均匀的纹饰，有的菌丝皱缩，有的锁状干瘪。C4处理（pH8），菌丝部分断裂，有的纹饰大小不一，锁状大小不均匀，形态有变化。C5处理（pH9），菌丝大小不均匀，纹饰变化大，菌丝表面纹饰模糊，有的呈扁条状，有的菌丝断裂，锁状个数多且表面纹饰较模糊。C6处理（pH10），菌丝大小不均匀，表面光滑没有纹饰，有的呈扁条状，锁状表面也无纹饰。

图4 酸碱度对福秀5669菌丝体表面结构的影响

3 小结与讨论

目前pH对食用菌生长影响的研究，多集中在菌丝生长、产量和品质等方面，关于pH对食用菌形态特征影响的研究未见报道。宫志远等[18]试验表明，阿魏蘑、杏鲍菇、真姬菇、酒红球盖菇和杨树菇菌丝生长的最适pH分别为6.0、5.4、6.0、5.4和6.8；而pH8～10蓖草料栽培阿魏菇菌丝生长健壮，污染率低，比常规料栽培阿魏菇pH高1.5～2.5[19]；墨汁鬼伞菌丝体生长适宜pH9，菌丝浓密，生长速度最快[20]；巨大口蘑菌丝适宜生长pH7.0，菌丝生长快，菌丝粗壮、浓白、致密[21]；pH6.21培养基能提高姬松茸菌丝生长速度等[22]；陈志松[23]试验表明，金针菇适宜pH为5.5～6.2，pH低于5.0菌丝生长速度明显变慢，菌种块形成一个浓的白毛团。刘叶高等[24]试验表明，培养料pH6.5～7.5茶薪菇菌丝满袋最快为44 d，生物转化率最高为47%，而pH6.5～7.5，杏鲍菇菌丝满袋最快为34 d，生物转化率为46%，pH6.5～7.5阿魏菇菌丝满袋最快为38 d，生物转化率最高为42%。江枝和等[25]试验结果，pH为8.5的培养料栽培的虎奶菇菌核的蛋白质氨基酸评分和营养指数居试验处理的第一位，化学评分、必需氨基酸指数和生物价，均居第二位，氨基酸比值系数分，居第3位，综合评价最高。由此可见，适宜酸碱度不仅能够促进食用菌菌丝生长、提高食用菌产量，而且具有改善食用菌品质的作用。

笔者研究结果表明：pH 9培养基培养的福秀5669菌丝最大直径比他处理有显著增加，差异达显著或极显著水平（P＜0.05和P＜0.01），而菌丝锁状个数差异达极显著水平（P＜0.01）。说明适宜的pH对福秀5669菌丝直径及锁状个数显著或极显著的促进作用，反之则具有抑制作用。电镜观察结果，不同pH培养基培养福秀5669菌丝体表面形态明显不同，有的菌丝表面无纹饰、模糊，又有的呈扁条状，还有的菌丝断裂及大小不均匀，锁状联合表面有的无纹饰光滑或纹饰大小不均匀、模糊及干瘪。今后应在分子水平探讨pH对食（药）用菌的作用机理。