宫颈癌浸润侵袭性与血管内皮生长因子表达水平的相关性▲

刘宁宁 冯 蓓 段 伟 李红霞

(延安大学附属医院1肿瘤科，2妇科，陕西省延安市 716000，电子邮箱：283132024@qq.com)

宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其发病率居女性生殖道恶性肿瘤的首位，且我国宫颈癌的发病率不断上升，并呈低龄化，对女性健康造成严重影响[1-2]。目前宫颈癌的治疗方式主要有化疗、放疗、手术等，但中晚期宫颈癌患者的肿瘤浸润侵袭以及预后不良问题仍无法有效解决[3]。有学者认为宫颈癌的浸润侵袭性是患者治疗失败及死亡的主要原因[4-5]，而我国宫颈癌患者的早期诊断率落后于发达国家，患者确诊时大多数已为中晚期，多伴有浸润侵袭性，预后较差[6-7]。近年来，随着分子生物学技术的不断发展，通过检测肿瘤细胞特异抗原等进行宫颈癌早期诊断已成为可能[8]。研究表明，肿瘤的形成是肿瘤细胞异常增殖的结果，其发生发展涉及多中心、多环节、多通路[9]。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)可以促进体内血管内皮细胞分化，产生金属蛋白酶、内皮细胞间质胶原酶，增强血管通透性，促进肿瘤侵袭与转移[10]。本文分析宫颈癌浸润侵袭性与癌组织中VEGF表达水平的相关性，探讨宫颈癌浸润侵袭的机制。

1 资料与方法

1.1 研究对象 回顾性分析2013年8月至2017年2月在我院就诊的120例宫颈癌患者(观察组)的临床资料。纳入标准：临床与病理资料完整；病理诊断为宫颈癌；非其他部位转移或复发的宫颈癌病例。排除标准：精神疾病患者；未行手术或活检病例；组织病理学不明确的病例；妊娠孕妇与哺乳期妇女。年龄35～83(54.21±4.22)岁；体质指数(22.44±1.48)kg/m2；临床分期：Ⅱ期48例，Ⅲ期40例，Ⅳ期32例；分化程度：高分化60例，中分化40例，低分化20例；浸润侵袭：有60例，无60例。抽取我院同期收治的无宫颈疾病的妇科就诊患者120例作为对照组，纳入标准：因良性病变行子宫切除术的、具有正常宫颈组织的患者；排除标准同观察组。年龄32～81(53.42±3.42)岁；体质指数(23.92±1.48)kg/m2。两组患者的年龄、体质指数等一般资料比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)。本研究获得本院伦理委员会批准，患者均在自愿条件下签署知情同意书。

1.2 方法 取得两组患者的宫颈标本后立即用10%甲醛固定、石蜡包埋，给予免疫组化分析，VEGF抗体(批号：201245933)由Abcam公司提供，工作浓度为1 ∶500。以磷酸缓冲盐溶液代替一抗作为阴性对照。分别由两名有经验的病理科医生在双盲情况下根据切片的阳性细胞数比例和染色深度进行判定。染色结果判断：组织切片中胞质染为淡黄色至棕褐色者为阳性细胞。标本结果判断标准参照文献[2]，4分：阳性细胞>60%；3分：30%<阳性细胞≤60%；2分： 5%<阳性细胞≤30%：1分：阳性细胞0%<阳性细胞≤5%；0分：阴性。≥3分为VEGF表达阳性。对宫颈癌患者随访至2018年8月，记录复发与死亡情况。比较观察组和对照组患者的宫颈组织VEGF表达阳性率，并分析观察组患者宫颈癌VEGF表达情况与肿瘤浸润侵袭性的相关性，以及影响宫颈癌患者宫颈组织VEGF表达的因素。

1.3 统计学分析 采用SPSS 21.0软件进行统计分析。对符合正态分布的计量资料以(x±s)表示，比较采用t检验；计数资料以例数和百分比表示，比较采用χ2检验；相关性分析采用Spearman等级相关分析；影响因素分析采用Logistic回归分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组患者宫颈组织VEGF表达阳性率比较 观察组宫颈组织VEGF表达阳性90例，阳性率为75.0%；对照组宫颈组织VEGF表达阳性4例，阳性率为3.3%。观察组宫颈组织VEGF表达阳性率高于对照组(χ2=129.338，P<0.001)。

2.2 有无浸润侵袭宫颈癌患者宫颈组织VEGF表达情况比较 60例有浸润侵袭性患者中，宫颈组织VEGF表达阳性59例，阳性率为98.3%；60例无浸润侵袭性宫颈癌患者中，宫颈组织VEGF表达阳性31例，阳性率为51.7%。有浸润侵袭性宫颈癌患者的宫颈组织VEGF表达阳性率高于无浸润侵袭患者(χ2=13.938，P<0.001)。

2.3 影响宫颈癌患者宫颈组织VEGF表达水平的多因素Logistic回归分析 以宫颈癌患者宫颈组织VEGF的表达情况作为因变量(VEGF表达阳性=1；VEGF表达阴性=0)，以浸润侵袭情况、临床分期、分化程度作为自变量(变量赋值：浸润侵袭=1，非浸润侵袭=0；临床分期：Ⅳ期=1，Ⅱ期+Ⅲ期=0；分化程度：低分化=1，中分化+高分化=0)，进行多因素Logistic回归分析。结果显示，浸润侵袭、临床分期为Ⅳ期、低分化为影响宫颈癌患者宫颈组织VEGF阳性表达的独立危险因素(均P<0.05)。见表1。

表1 影响宫颈癌患者宫颈组织VEGF阳性表达的多因素Logistic回归分析(n=120)

2.4 宫颈癌患者预后与宫颈组织VEGF表达阳性细胞数的相关性 所有观察组患者平均随访时间为(32.10±3.50)个月，其中复发25例，复发率为20.8%；死亡12例，死亡率为10.0%；相关分析显示宫颈癌患者的复发率和死亡率均与宫颈组织VEGF阳性细胞数均存在正相关性(rs=0.543，P=0.007；rs=0.459，P=0.013)。

3 讨 论

调查显示，宫颈癌5年生存率约70%，其中无浸润侵袭者5年生存率达80%～90%，而局部晚期或浸润侵袭者5年生存率均在50%以下，因此，宫颈癌的浸润侵袭性是影响宫颈癌预后的重要因素[11]。目前该病的发病机理尚未完全明确，但可归因于基因—环境的相互作用[12]。肿瘤的浸润侵袭性与相关基因的异常表达有关，VEGF是特异性的促淋巴管内皮生成因子，其可诱导内皮细胞使其钙浓度在短时间内升高，还可提升基底膜的降解速度，影响内皮细胞的基因表达，并促进血管生成[13]。此外，VEGF还能够提升血管通透性，并为内皮细胞的迁移提供网架，导致血浆蛋白外渗，同时也为肿瘤浸润侵袭提供基质。本研究结果显示，观察组的宫颈组织VEGF表达阳性率高于对照组(P<0.05)，这可能与VEGF可与血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)相结合而促进淋巴管内皮的生长[14]，还可通过抑制促血管生长因子与其在内皮细胞表面的受体结合而间接抑制血管新生有关[15]。

在人体正常组织当中VEGF呈微量表达，而在肿瘤组织中，VEGF呈高表达[16]。VEGF与VEGFR结合后可诱导淋巴管生成，促进肿瘤淋巴转移[17]。本研究结果显示，在120例观察组患者中，有浸润侵袭性的宫颈癌患者宫颈组织中VEGF表达阳性率高于无浸润侵袭者(P<0.05)，这提示宫颈癌组织的浸润侵袭多伴有VEGF的阳性表达。在各种高危因素的基础上，致癌因子利用不同途径导致细胞增生及凋亡失调而促进宫颈癌的发生发展[18]。肿瘤浸润侵袭的过程非常复杂，包含多个步骤和因素，且与宿主和肿瘤细胞的复杂作用密切相关[19]。本研究结果显示，浸润侵袭、临床分期为Ⅳ期、低分化程度为影响宫颈癌VEGF阳性表达的独立危险因素(均P<0.05)。VEGF作为分泌型糖蛋白，随着其自身的逐步水解，其对于VEGFR的亲和力逐步升高，而在VEGF的诱导下，内皮细胞大量增殖，导致人体的血管出现分支，对肿瘤的发展及转移具有促进作用，使肿瘤朝着肌层深部方向发展[20]。

宫颈癌复发是一个多因素多步骤的复杂病理过程。有研究显示，宫颈癌患者治疗后的5年生存率为75%左右，其主要死因是术后复发，因此预测复发对宫颈癌预后判断具有重要意义[21]。相关研究表明，VEGF与VEGFR高表达是肿瘤增殖与转移的主要影响因素，VEGF在具有高转移潜能的宫颈癌细胞系中高表达，且转移程度越高表达越强[22]。本研究结果显示，观察组患者的复发率为20.8%，死亡率为10.0%；宫颈癌患者的复发和死亡均与宫颈组织VEGF阳性表达数存在正相关性(均P<0.05)，与上述研究结果相似，但由于本研究中的样本数有限，后续研究仍需进一步搜集病例，增大样本量，以进一步验证该结论。

综上所述，宫颈癌患者宫颈组织VEGF表达上调发展，其与宫颈癌组织浸润侵袭相关，或可预测患者的复发与死亡情况。