高效液相色谱法测定猪肉中喹乙醇残留量

张 昕 张慧利 成林林 屈俊成

（焦作市畜产品质量安全监测中心，河南焦作 454003）

喹乙醇为广谱抗菌药物，是一种化学合成的生长促进剂而不是抗生素药物，可促进机体蛋白质合成代谢，提高饲料能量利用率，加快了生长发育。喹乙醇最初用于防治仔猪腹泻，1976年欧共体批准用于畜禽饲料添加剂，20世纪80年代初，喹乙醇作为饲料添加剂在我国开始推广使用，已成为我国养殖生产中最主要的促生长剂之一。但该药物毒性随动物种属不同存在较大差异，特别对禽和鱼类有中度至明显蓄积毒性和一定遗传毒性。《中华人民共和国兽药典》明确规定：喹乙醇作为促生长剂，仅限用于35kg以下猪的促生长，以及防治仔猪黄痢、白痢，猪沙门氏菌感染，休药期35天；禁用于体重超过35kg以上的猪和禽、鱼类等动物。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

高效液相色谱仪（Waters e26952998 PDA Detector检测器）；电子天平（感量0.01g）；涡旋混合器；离心机；氮吹仪。

1.2 试剂

喹乙醇标准品（德国Dr公司，浓度97.8%）；乙腈（色谱纯）；正己烷；超纯水。

标准储备液：

精密称取喹乙醇标准品约0.0100g，用少量甲醇溶解，转移到100ml棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度。制成浓度为100μg/mL的标准储备液。

2 检测方法

2.1 样品的提取

准确称取混合均匀的样品2.00g（±0.02g）于50ml离心管中，加入10ml乙腈提取，涡旋混匀，震荡10min，5000r/min离心8min，将上清液转入另一离心管中，残渣用10ml乙腈重复提取一次，合并两次上清液；向合并的上清液中加入15ml正己烷，涡旋混匀，震荡5min，8000r/min离心5min，转移乙腈层至玻璃离心管中，60℃水浴氮气吹干；用1ml 20%的乙腈水复溶，涡匀，经0.22μm微孔滤膜过滤后供测定。

2.2 添加回收样的制作

称取空白样品2.00g（±0.02g）于50ml离心管中，准确吸取标准储备液50μL添加到空白样中，制成添加量为2.5mg/kg的样品。然后按2.1方法进行前处理和上机。

2.3 标准工作曲线

取适量的标准储备液，用甲醇分别稀释为浓度为1.0μg/ml，2.0μg/ml，2.5μg/ml，5μg/ml，10μg/ml的标准曲线工作液。

2.4 色谱条件

色谱柱：Symmetry®C18柱（4.6×250mm，5μm）；流动相：10%乙腈水；柱温：35℃；进样量：10μL。

3 结果分析与讨论

3.1 样品分析与讨论

样品的前处理方法对喹乙醇的检测至关重要。如果用80%的乙腈作为提取液进行提取，在对样品进行浓缩时会花费更长时间，而且不易浓缩；并且会存在更多干扰物质，降低响应值和回收率，影响对喹乙醇的检测。按照本实验方法对猪肉样品进行分析，节省了试剂和前处理时间，能更好的消除杂质对喹乙醇的干扰，保证所检验样品的响应值与回收率。本方法中喹乙醇的保留时间为5.270min，图1为添加2.5μg/g喹乙醇猪肉样品色谱图，试剂和杂质峰均能和喹乙醇很好的分开，说明上述前处理方法和色谱条件是可行的。

图1 添加2.5µg/g喹乙醇猪肉样品色谱图

3.2 标准曲线结果

实验表明，在1～10μg/ml浓度范围内，线性关系良好，回归方程及相关系数见图2。

图2 喹乙醇标准曲线图

3.3 加标回收率及精密度

空白样品经测定，不含喹乙醇，加标量在2.5μg/g浓度下，回收率在80.7～85.5之间，相对标准偏差小于10%，表明该方法回收率和精密度满足兽药残留检测需要。

3.4 检验过程注意事项

喹乙醇见光易分解，整个实验过程要严格注意避光；特别是氮吹过程尤其注意避光，所有溶液尽量用棕色瓶保存。另外，氮吹吹干与吹尽干对回收率影响不大，但不能干的时间过长，会降低添加回收率。

4 结论

本实验方法操作简单，准确率高，回收率高，重现性好，结果令人满意，适用于猪肉中喹乙醇的批量检测。