狍血液生理生化指标的测定及应激活动与生化指标的关系

韩志强 王艳阳 李志鹏 宋兴超 赵全民 赵家平 邢秀梅 徐 超*

(1.中国农业科学院特产研究所，农业部特种经济动物遗传育种与繁殖重点实验室，吉林省特种经济动物分子生物学省部共建国家重点实验室，长春，130112；2.吉林农业大学，长春，130118；3.运达动物诊所，长春，130042)

狍(Capreolusgray)，草食反刍动物，偶蹄目(Artiodactyla)鹿科(Cervidae)空齿鹿亚科(Odocoileiniae)狍属[1]，中国脊椎动物红色名录(2016)评估级别为近危(NT)。狍分为东方狍(西伯利亚狍C.pygargus)和西方狍(欧洲狍C.capreolus)两种，东方狍分布于西伯利亚、蒙古外、朝鲜半岛、中国东北等地区。狍具有重要的经济、科学研究价值，并且是东北虎(Pantheratigrisaltaica)和东北豹(Pantherapardusorientalis)的主要猎物之一[2-3]。随着狍个人和动物园养殖数量的增加，建立狍血液生理生化指标对识别和诊断养殖狍的健康和疾病问题起着至关重要的作用，并且及时发现和处理非健康动物对狍种群繁殖、饲养人员健康及其濒危捕食者保护具有重要意义[4]。狍作为重要的经济动物，但关于狍的血液学和血清化学的公开报告不完整并且罕见。本实验利用宠物上血液生理生化分析仪器对5只狍的血液生理生化参数进行检测，旨在能为狍血液成分范围的确定提供数据支持，对识别和诊断养殖狍的健康和疾病问题起着重要作用，并能够为狍的饲养管理和科学研究提供了基础理论数据。

1 材料与方法

1.1 动物来源

实验中所测5只狍均来自吉林省舒兰市某养殖场。

1.2 实验条件

对养殖场的5只狍进行血液生理、生化参数测定，其中2雄(P2、P5)和3雌(P1、P3、P4)，均为2岁以上成年个体。所有狍均为圈养(四代1岁)，具有内外活动场。饲喂的饲料分为精粗两种饲料，精饲料主要由玉米面和豆粕等组成的混合饲料，粗饲料为祚树叶，每天早晚两顿饲喂。5只狍的外部检查均无异常，活动正常，精神状态良好，临床表现健康。

1.3 样本采集

实验于2018年9月28日9：00开始采血。由于狍生性活泼，善于奔跑跳跃，较难捕获，遂采用陆眠宁(盐酸赛拉嗪注射液，吉林省华牧动物保健品有限公司)麻醉，待动物麻醉后进行采血操作。一次性采血针选择颈静脉无菌采血，分别收集于分离胶促凝采血管和EDTA抗凝采血管中，每管采集3—4 mL。血液采集后统一测定。

1.4 测定参数

血液生理参数严格遵照优利特全自动血细胞分析仪(URIT-2900 plus)操作规程操作，使用前对仪器常规保养、维护和校准。全自动检测，排除人工误差，结果准确可靠。经典电阻抗法，自动浮标功能，分类准确。工作原理：白细胞电阻抗原理，红细胞全自动检测，排除人工误差，结果准确可靠。经典电阻抗法，自动浮标功能，分类准确。血小板电阻抗原理结合先进扫流技术，血红蛋白流动比色法(无氰化物)。仪器主要试剂稀释液、溶血剂、多酶清洗液和清洗液。测定前将保存的血液上下颠倒混匀，取适量于无菌离心管中待测定，机器测定所需血液为10 μL左右。实验测定血液中白细胞、淋巴细胞总数、淋巴细胞比率、中性粒细胞数、中性粒细胞比率、中间细胞(白细胞按三分群分类的一个细胞群，主要是单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞)、中间细胞比率、血红蛋白、平均血红蛋白含量、平均血红蛋白浓度、红细胞总数、红细胞平均体积、红细胞压积、红细胞分布宽度SD、红细胞分布宽度CV、血小板、血小板压积、平均血小板体积和血小板分布宽度等生理参数。血液生化参数严格遵照微纳芯生化仪操作规程操作，血清使用量为100 μL。血清在收集后2 h于4 000 rmp离心30 min，分离后直接上机检测白蛋白、总蛋白、球蛋白、钙离子、葡萄糖、尿素氮、淀粉酶、胆固醇、谷丙转氨酶、总胆红素、碱性磷酸酶、肌酐、肌酸激酶等生化参数。

1.5 统计分析

记录各项测定数据，并录入Excel 2010表中，对数据进行统计分析。

2 结果分析

结果显示本次测得5只狍所得各项血液生理生化参数范围与Küker等[4]所测得指标范围进行比较，由于所测项目单位不完全相同，遂仅将相同项(参考范围数值均换算成与本次检测单位一致所对应数值)进行对比，其中生理指标中生化指标中葡萄糖、肌酐、肌酸激酶和碱性磷酸酶等值出现升高。

2.1 生理参数检测结果

5只狍的生理参数检测结果(表1)，详细给出各值，并统计出范围值。

2.2 生化参数检测结果

5只狍的生化参数检测结果(表2)，详细给出各值，并统计出范围值。

表1 狍生理参数检测Tab.1 Detection of roe deer physiological parameters

表2 狍生化参数检测Tab.2 Detection of roe deer biochemical parameters

续表2

3 讨论

血液学调查已成为监测野生动物健康状况的重要工具。由于现有文献中缺乏数据，酶活性的个体差异、捕获方法的差异、饲养方式的差异及捕获季节差异等，使得所获得的狍血液成分数据难以与其他鹿类研究的数据进行精确比较。对于狍的生理生化参数报道很少，只有部分资料对生化参数进行叙述。本实验采用现代宠物血液生理生化检测仪器对5只狍的血液生理生化参数进行测定。运用宠物上成熟的仪器与检测条件能更精确、快速测定血液生理生化常规指标，对许多野生动物血液中未知生理生化参数的测定及血液生理生化指标的建立具有十分重要的作用。本实验测定狍的数量较少，对于确定参数的范围值来说较难。并且狍上已测定的项目及参数较少，可选的参照范围更是十分困难，但所测数据对日后狍血液成分范围值确实有一定的意义。

狍血液指标中的项目检测值对动物个体健康评估及疾病监测、生理状态评定具有十分重要的作用。红细胞增多症可能由于液体流失导致的血浆体积减少和血液浓缩(即与严重脱水有关)或疾病感染有关[5]。常规使用的实验室检测贫血参数包括红细胞压积，红细胞总数和血红蛋白浓度。红细胞压积、红细胞总数或血红蛋白浓度是相似的与红细胞质量的减少成正比，并且类似地反映动物贫血的严重程度。红细胞增多症是指外周红细胞总数、血红蛋白浓度以及血细胞高于既定参考区间的增加。细菌、病毒、立克次氏体和支原体感染则可以直接或间接导致贫血[6]。反刍动物白细胞数可能会受到年龄、品种、怀孕、分娩等个体因素或环境因素的影响。中性粒细胞增多常见于轻度或中度炎症，在慢性炎症中，中性粒细胞计数可能是正常或增多。据报道，牛、山羊和绵羊等反刍动物在细菌、病毒、真菌、原生动物和寄生虫感染中存在炎性中性粒细胞增多的现象。反刍动物的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)，边界病病毒和蓝舌病毒等病毒感染会引起中性粒细胞减少，但大多数病毒感染只会短暂的引起中性粒细胞减少。一般而言，淋巴细胞增多症在反刍动物中并不常见，但动物患有慢性病毒感染、慢性锥虫病、慢性炎症以及肾上腺素释放和淋巴细胞白血病时会引起淋巴细胞增多。血小板是血液中第二多的循环细胞，对凝血、维持血管完整性和控制止血至关重要。某些血小板参数会受到抗凝血剂、时间或凝血的影响。血小板参数包括血小板计数、平均血小板体积和血小板分布宽度。平均血小板体积用来估计血小板大小，并且与一些物种中的血小板数量成反比。平均血小板体积的增加可能与血小板减少症，某些骨髓增生性疾病和甲状腺功能亢进的反应有关。本研究中部分样本的红细胞总数、血红蛋白、红细胞压积、红细胞体积值有所下降，并平均血红蛋白浓度和血小板升高，这种异常可能与动物贫血或者运输途径引起溶血相关，另有白细胞下降可能与血液病，疾病感染、物理和化学损伤相关，因为狍生理指标中白细胞和血小板相关指标缺乏不能较好地分析异常原因。血液生理指标异常变化可能与动物贫血、运输溶血、捕获方法或品种差异等因素相关。

血清生化主要诊断动物机体的血糖、肝功能、肾功能、离子等指标。肌酐水平可用于评估肾功能。然而，在一些有蹄类动物中，由于肌肉活动导致肌酐浓度增加[7]。肌酸激酶主要存在于心脏和骨骼肌中，是诊断肌肉疾病最敏感的指标。肌细胞通透性增加或细胞损伤增加、受胁迫的野生有蹄类动物和动物患有捕获性肌病等捕获和处理操作都会引起肌酸激酶的增加[8]。对于肌酸激酶指标有报道鹿科动物麂的指标可高达2 444 U/L[9]。鹿科动物中的高葡萄糖水平可能与压力有关，这会激活交感神经系统，从而增加肾上腺素的分泌[10-11]。肌酸激酶、肌酐、葡萄糖水平的增加可能不是疾病造成的，而是由于应激奔跑活动所影响的。有趣的是，5只狍的应激程度大致为P3、P4>P5>P1、P2这与所测的肌酸激酶、肌酐、葡萄糖水平高低水平也十分相似。胆固醇增加可能继发于捕获和身体克制的自然应激反应。碱性磷酸酶存在于所有组织中，然而，它的大多数变化与肝脏和骨骼有关。血清碱性磷酸酶活性升高通常在年轻的生长动物和肝病等情况，其降低常见于营养不良、肝功能受损、寄生虫和肠道类消耗性疾病。由此看来，想得到完整的健康狍的生理生化范围还需进一步的考虑应激等因素对指标的影响[12]。

4 结论

本研究通过血液生理生化仪器检测5只狍的血液中各指标值，并且统计分析了各成分范围值，为狍血液生理生化指标标准范围值建立提供数据支持。分析生化值认为其中肌酸激酶、肌酐、葡萄糖水平等升高可能与应激活动有关，应激活动造成狍的剧烈奔跑，从而影响一些指标发生变化。因此对于狍生理生化指标标准范围的建立应考虑抓捕应激等造成的影响。