鼻咽癌患者Keap1与Nrf2的表达及预后分析

于晓黎 周锋 夏瑜

【摘要】 目的 探讨分析鼻咽癌患者Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1（Keap1）与核因子E2相关因子2（Nrf2）的表达及预后。方法 68例鼻咽癌患者作为研究对象， 切取患者鼻咽癌组织标本以及对应的癌旁组织标本， 行免疫组化检测Keap1、Nrf2， 观察鼻咽癌患者Keap1与Nrf2的表达情况， 并对不同的细胞核Nrf2、Keap1表达水平进行分组， 细胞核Nrf2表达水平低为观察A组， 细胞核Nrf2表达水平高为对照A组;细胞质Keap1表达水平低为观察B组， 细胞质Keap1表达水平高为对照B组。比较不同Nrf2、Keap1表达水平患者预后情况。结果 Nrf2、Keap1在鼻咽癌组织中阳性表达率明显高于癌旁组织， 差异有统计学意义（P<0.05）。68例患者脱落4例， 共有21例患者死亡， 死亡原因为鼻咽癌复发7例（33.33%）， 远处转移14例（66.67%）。其中观察A组31例， 对照A组33例， 观察A组存活率明显高于对照A组， 差异具有统计学意义（P<0.05）。观察B组30例， 对照B组34例， 观察B组存活率明显高于对照B组， 差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 Nrf2、Keap1在鼻咽癌癌变组织中高表达， 且Nrf2、Keap1高表达是不良预后的重要因素， 值得临床重视。

【关键词】 Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1;远处转移;核因子E2相关因子2;鼻咽癌;氧化应激

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.19.017

Nrf2、Keap1基因通路在神经母细胞瘤以及非小细胞肺癌中对代谢酶基因、脱氧核糖核酸（DNA）损伤修复基因等因子的作用已经有诸多研究报道， 但是Nrf2-Keap1基因通路在鼻咽癌中的表达、化疗药物敏感相关性以及与预后相关性的报道较少[1]。基于此， 本次研究中针对鼻咽癌组织中Keap1、Nrf2行免疫组化检测进行分析， 旨在为临床优化结直肠癌细胞治疗方案、预测预后等提供实验参考依据， 现报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选取2010年5月～2015年12月本院收治的68例鼻咽癌患者为研究对象， 均为鼻咽部非角化性鳞状细胞癌患者， 患者均经组织病理学证实。涉及随访调查内容获伦理委员会批准， 所有患者均签署知情协议书。纳入标准：活检标本满足诊断要求者。排除标准：①合并其他恶性病变患者;②纳入本研究行病理学检查时已经过放化疗、生物免疫治疗患者;③入院评估Karnofsky评分≤70分患者。脱落标准：①持续随访期间无法获得联系患者;②移居无法配合研究患者;③意外身故患者。诊断标准：①根据WHO制定的病理學分类Ⅱ（非角化鳞状细胞癌）～Ⅲ型（未分化癌）[2]。

②TNM分期以及临床分期均根据美国癌症联合委员会（AJCC）与国际抗癌联盟（UICC）制定标准。68例患者中男39例， 女29例;TNM分期中T1～T2期患者35例， T3～T4期患者33例;远处转移M0期68例;临床分期Ⅰ～Ⅱ期患者4例， Ⅲ期及以上患者64例;年龄最小42岁， 最大68岁， 平均年龄（53.24±4.92）岁。

1. 2 研究方法 ①选取68例患者切取的鼻咽癌组织标本以及对应的癌旁组织标本， 具体方法为：第一步：鼻咽癌组织标本行福尔马林液脱水固定;第二步：常规石蜡包埋;第三步：切片、免疫组化染色， 采用SP两步法进行免疫组化染色（染色强度评分共3分， 无着色为0分， 低度染色计1分， 3分为重度着色;阳性判定标准以细胞质、细胞核着色即显示为棕色为阳性）。0<肿瘤细胞阳性比例<100%。将其与染色强度评分相乘， 因重度着色为3分， 所以总体得到最大评分为300%[3]。操作者共有两位， 均为有丰富的临床工作经验者， 并且对本次研究不知情， 不了解患者的基线资料， 为单盲法判断。②对不同的细胞核Nrf2表达水平、细胞质Keap1表达水平进行分组， 即细胞核Nrf2表达水平低为观察A组（Nrf2表达水平依据着色评分与肿瘤细胞阳性比例综合评定， 鉴于平均值50%， 总得分<50%则为细胞核Nrf2低表达）， 细胞核Nrf2表达水平高为对照A组（总得分≥50%则为细胞核Nrf2高表达）。细胞质Keap1表达水平低为观察B组（鉴于细胞质Keap1平均值150%， 总得分<150%则为细胞质Keap1低表达）， 细胞质Keap1表达水平高为对照B组（总得分≥150%则为细胞质Keap1高表达）。持续3年， 随访调查鼻咽癌患者预后（预后调查内容为存活率）。

1. 3 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验;计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验或Fisher确切概率法。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 鼻咽癌组织、癌旁组织标本Nrf2、Keap1阳性表达情况比较 Nrf2、Keap1在鼻咽癌组织中阳性表达率明显高于癌旁组织， 差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2. 2 不同Nrf2表达水平患者预后情况比较 68例患者脱落4例， 共有21例患者死亡， 死亡原因为鼻咽癌复发7例（33.33%）， 远处转移14例（66.67%）。其中观察A组31例， 对照A组33例， 观察A组存活率明显高于对照A组， 差异具有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2. 3 不同Keap1表达水平患者预后情况比较 观察B组

30例， 对照B组34例， 观察B组存活率明显高于对照B组， 差异具有统计学意义（P<0.05）。见表3。

3 讨论

Keap1的主要作用为调控细胞氧化应激反应， 其中与器官组织再生相关的干细胞即受到Nrf2-Keap1基因通路调控[4]。与Nrf2-Keap1基因通路调控细胞增殖相关的作用机制导致细胞癌变的观点目前已经得到了临床广泛认同， 但关于鼻咽癌中Nrf2-Keap1基因通路的作用鲜有研究报道[5-7]。

本研究中， 68例鼻咽癌患者切取其鼻咽癌组织标本以及对应的癌旁组织标本， 对其中Nrf2、Keap1进行免疫组化检测， 结果表明Nrf2、Keap1在鼻咽癌病变组织其具有较高的表达， 而癌旁组织阳性率较低。Nrf2主要表达于鼻咽癌肿瘤细胞的细胞核中， 具有一定限制性， 而Keap1主要表达于细胞质中， 表达率高达60.29%。马行凯等[8]研究表明Keap1表达率为58.30%， 这与本次研究结果较为相似， 也警示了Keap1、Nrf2高表达的情况下具有较高风险发生鼻咽癌。本研究结果提示， Nrf2-Keap1基因通路参与了鼻咽癌肿瘤细胞细胞增殖与迁移间的信号传导， 而细胞癌变、鼻咽癌肿瘤细胞增殖涉及到信号转导途径异常， Nrf2-Keap1基因通路发挥加强转录因子的转录活性， 使信号转导途径异常， 进而过度调节鼻咽癌肿瘤细胞的增殖。该作用机制与患者的预后相关， Nrf2-Keap1基因通路可促使鼻咽癌复发与转移， Nrf2、Keap1高表达的患者普遍预后不良， 提示Nrf2、Keap1联合诊断对判断预后具有重要作用。

综上所述， Nrf2、Keap1在鼻咽癌癌变组织中高表达， 且Nrf2、Keap1高表达是不良预后的重要因素， 值得临床重视。

参考文献

[1] 白美玲， 郝秀輕， 李峰， 等. 食管鳞状上皮细胞癌中Keap1、Nrf2和HO-1的表达及临床病理意义. 临床与实验病理学杂志， 2016， 32（8）：914-917.

[3] 魏矿荣， 徐莹， 张文俊， 等. 鼻咽癌的病理组织学分类. 中华病理学杂志， 2011， 40（5）：355-358.

[3] 周平婷， 康敏， 赵婷婷， 等. 基于MRI及IMRT下的鼻咽癌新T分期研究. 中华放射肿瘤学杂志， 2016， 25（10）：1032-1037.

[4] 陈光海， 刘晓平. Keap1-Nrf2信号通路与细胞氧化应激反应相关性研究进展. 医学理论与实践， 2016， 29（15）：2012-2015.

[5] 杨海虹， 郜靓， 张亚雷， 等. NRF2、Keap1基因及蛋白在非小细胞肺癌肿瘤组织中的表达. 山东医药， 2010， 50（13）：57-58.

[6] 王晓昆， 孙正. Nrf2/Keap1通路抗癌作用的研究进展. 北京口腔医学， 2012， 20（1）：56-58.

[7] 倪静， 秦丽娟， 吴拥军， 等. 肺癌组织中Nrf2、Keap1和NQO1蛋白的表达. 郑州大学学报（医学版）， 2012， 47（4）：456-459.

[8] 马行凯， 刘济生. Nrf2和Keap1的表达与鼻咽癌患者预后的关系研究. 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志， 2018， 32（9）：678-682.

[收稿日期：2019-01-25]