慈航丹方药3 种方法提取液镇痛、抗炎的比较研究

于定荣 李超 陈畅 顾雪竹 张方博 王丽芳 麻印莲

原发性痛经在中医学上称为“经行腹痛”，是一种常见的妇科疾病，通常在妇女经期或行经前后的期间发作，而又多见于青年女性，严重危害女性患者的身体以及心理健康。目前，原发性痛经的中药治疗已经有大量的报道。常见的有温经汤[1-2]、少腹逐瘀汤[3]、当归四逆汤[4]、桃红四物汤[5]等方药，对各型的原发性痛经具有较好的临床疗效。慈航丹为其中方剂之一，被收载于《全国中药成药处方集》（抚顺方）[6]，由益母草等4味中药组成，用于活血调经止痛，疗效显著。本实验将慈航丹方药用3种方法进行提取，以分子量≤1 000 Da的半仿生提取液（semi-bionic extract，SBE）、醇提取液（alcohol extract，AE）、水提取液（water extract，WE）对小鼠痛经模型及抗炎作用进行比较研究，本研究旨在评估慈航丹方药对实验性痛经模型小鼠的镇痛作用及抗炎作用，并比较3种方法提取液的作用效果，为半仿生提取法提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验药品

水合氯醛（青岛宇龙海藻有限公司，批号：T20080943，水合氯醛溶液10%），苯甲酸雌二醇注射液 （广州白云山明兴制药有限公司，批号：081006；2 mg/mL）；缩宫素注射液 （西南药业股份有限公司，批号：071113；10单位/mL）；前列地尔注射液（本溪恒康制药有限公司，批号20071126；5 µg/mL）；EDTA（北京吉美生物技术有限公司，批号20070618，分析纯AR 250g）。

益母草、当归、川芎、香附四种中药饮片均来源于山东博康中药饮片有限公司，其中益母草批号：20071213；当归批号：20080441；川芎批号：20080221；香附批号：20080109。

1.2 实验动物

试验动物：雌性ICR小鼠，体质量为18～22 g；Wistar大鼠，体质量为180～220 g，雌雄各半；以上动物来源于山东中医药大学动物室（均为清洁二级），合格证号：SCXK（鲁）20071218。

1.3 样品液的制备

1.3.1 分子量≤1 000 Da提取物的SBE 样品液的制备 将处方比例量益母草、当归、川芎、香附混合粉碎，以水为溶剂，连续提取3次。第一次提取2.0 h，加水量为药重量的10倍，pH用HCl调整为6.0；第二次提取时间为1.0 h，加水量为药重量的8倍，pH值用NaOH调整为7.5；第三次提取时间为1.0 h，加水量为药重量的8倍，pH值用NaOH调整为9.0。分别将3次提取液滤过，高速离心20 min（2 000 r/min），再以中空纤维膜滤过，将滤液浓缩，合并，最后定容至1 000 mL（其质量浓度为174 g/L）[7]。

1.3.2 分子量≤1 000 Da提取物的AE液、WE液的制备 照1.3.1项下方法，将3煎溶剂分别改为80%乙醇和中性水，其余依法操作，即得（其质量浓度均为174 g/L）。

1.4 供试液（分子量≤1 000 Da）的制备

将1.3项下制备的SBE、WE、AE 3种样品液（质量浓度为174 g/L），分别浓缩，制备得SBE、WE、AE 3种供试液，供大鼠测定血清雌二醇（E2）含量测定（质量浓度均为700g/L）。

2 实验方法

2.1 对药物诱发痛经模型的影响

2.1.2 前列腺素PGE1所致小鼠痛经模型试验 取1项下雌性小鼠36只，按2.1.1项下方法分组，以（20 mL/kg）剂量给各组动物灌胃给药，一天1次，连续灌胃给药2周，直至最后给药的第2天和第3天，通过皮下注射苯甲酸雌二醇注射液（1 mL/kg）后再禁食12 h；在末次给药40 min后，通过腹腔注射前列腺素PGE1（1.2 mg/kg），记录其30 min内扭体次数和潜伏期，并由公式Ⅰ计算其镇痛抑制率[9]。根据2.1.1项下方法，比较3种提取液对由前列腺素PGE1引起小鼠痛经样反应的影响。

2.2 抗炎试验

2.3 统计学方法

采用SigmaStat 3.5 统计学软件分析数据，计量资料用表示，采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 对药物诱发痛经模型的影响试验结果

3.1.1 缩宫素所致小鼠痛经反应试验结果 与对照组相比，所有的试验组都有抑制缩宫素所致的小鼠痛经的作用，具有极显著性差异（对照组与SBE组t值=25.177，P＜0.01；对照组与AE组t值=17.765，P＜0.01；对照组与WE组t值=8.408，P＜0.01），且AE组、WE组与SBE组相比，也有极显著性差异（AE组与SBE组t值=7.412，P＜0.01；WE组与SBE组t值=16.769，P＜0.01），各组动物中SBE组扭体次数最少，表明其产生抑制痛经的作用最强。见表1。

3.1.2 前列腺素PGE1所致小鼠痛经模型试验结果 与对照组相比，3组均能极显著地抑制痛经的作用（对照组与SBE组t值=28.640，P＜0.01；对照组与AE组t值=20.421，P＜0.01；对照组与WE组t值=9.460，P＜0.01），此外，AE组、WE组与SBE组相比，也有极显著性差异（AE组与SBE组t值=11.000，P＜0.01；WE组与SBE组t值=19.181，P＜0.01）；3组之中SBE组扭体次数最少，表明其抑制痛经的效果最强。见表2。

3.2 抗炎试验结果

3.2.1 小鼠耳肿胀试验结果 除对照组外，各组均能抑制小鼠的耳廓肿胀，与对照组比较，各组均有极显著性差异（对照组与SBE组t值=15.866，P＜0.01；对照组与AE组t值=12.106，P＜0.01；对照组与WE组t值=5.872，P＜0.01），其中SBE组抑制小鼠的耳廓肿胀效果最为明显；且SBE组、AE组之间也存在着显著性差异（AE组与SBE组t值=3.759，P＜0.05）；SBE组和WE组有极显著性差异（WE组与SBE组t值=9.994，P＜0.01）。见表3。

3.2.2 大鼠棉球肉芽肿试验结果 与对照组相比，SBE组、AE组、WE组均能极显著性地减轻大鼠棉球肉芽肿（t对照组与SBE组=25.613，P＜0.01；对照组与AE组t值=18.139，P＜0.01；对照组与WE组t值=13.840，P＜0.01），其中以SBE组对抗慢性炎症的肉芽组织增生的作用最强；但试验组中，SBE组与AE、WE组也存在着极显著性差异（AE组与SBE组t值=7.474，P＜0.01；WE组与SBE组t值=11.773，P＜0.01）。见表4。

表1 3 种方法提取液对缩宫素所致小鼠痛经模型的影响结果

表2 3 种方法提取液对前列腺素PGE1 所致小鼠痛经模型的影响结果

表3 3 种方法提取液对小鼠的耳肿胀度及抑制作用结果

表4 3 种方法提取液对大鼠棉球肉芽肿的影响

4 讨论

中医认为，痛经是由于患者气血运行不通，宫胞经血流受阻所致；而现代医学认为，原发性痛经发病机制与前列腺素密切相关：前列腺素的异常增加是其重要的致病因素，导致子宫发生异常收缩，从而减少子宫血流量，引起其周围神经的敏感性，从而产生疼痛。目前，原发性痛经的病理机制还没有完全明确，现代医学通过缓解紧张的子宫平滑肌细胞、扩张血管以及加快血液流通速度作为治疗痛经的原则[12]，针对原发性痛经西医主要是采取对症治疗，包括使用非甾体消炎药、激素避孕药、钙通道阻滞剂等，但在临床上产生的不良反应较多[13]。近年来中医治疗原发性痛经方面的临床研究已经有大量报道，但实验性研究较少[14-16]，且以缩宫素和前列腺素为较公认的在体子宫痉挛（类痛经反应）病理模型。本试验以缩宫素和前列腺素PGE1建立小鼠痛经模型，并结合大鼠的抗炎试验比较慈航丹方药3种方法提取液的镇痛、抗炎的作用效果。试验结果表明，慈航丹方药3种方法提取液（分子量≤1 000 Da）对缩宫素、前列腺素PGE1所致小鼠痛经以及对小鼠耳肿胀、大鼠棉球肉芽肿均具有显著的影响，均能显著性地抑制药物诱发所致痛经及具有抗炎作用；其作用效果依次为：SBE组＞AE组＞WE组；其中SBE组抑制痛经和抗炎作用最强。该研究也为中药治疗月经不调在临床上提供了一定的实验依据。

5 小结

慈航丹方药3种方法提取液（分子量≤1 000 Da）对缩宫素、前列腺素PGE1所致小鼠痛经模型均有极显著性的镇痛作用；对小鼠耳肿胀、大鼠棉球肉芽肿均有极显著性的抗炎作用；其中以半仿生提取液（SBE液）的镇痛、抗炎作用最强，表明慈航丹方药水提、醇提以及半仿生提取3种提取方法中，以半仿生提取法的效果最佳。