安徽省合肥市家禽高致病性禽流感血清学调查

程晓峰，凌学士，钱昌银，董先敏，周佰仕，刘 华

（1. 合肥市动物疫病预防控制中心，安徽合肥 230091；2. 肥西县动物疫病预防控制中心，安徽肥西 231200；3. 庐江县动物疫病预防与控制中心，安徽庐江 231500；4. 安徽省动物疫病预防与控制中心，安徽合肥 230091）

禽流感是由正黏病毒科流感病毒属A 型流感病毒引起的传染病[1]。H5、H7 亚型高致病性禽流感不仅对养禽业危害巨大，还能够感染人[2-3]，被我国列为一类动物疫病[4]。2004 年，我国开始对H5 亚型高致病性禽流感实施强制免疫政策[5]，2017 年又对H7 亚型实行强制免疫[6]，在全国推广使用（H5+H7）禽流感二价灭活疫苗。为评价该疫苗的免疫效果，合肥市动物疫病预防控制中心从2017 年10 月开始，对全市家禽H5 和H7 亚型高致病性禽流感抗体进行检测，为科学制定免疫计划，研判禽流感防控形势等提供基础数据。

1 材料与方法

1.1 抽样方法

2017 年10 月—2018 年10 月，按 照2017和2018 年度安徽省动物疫病监测与流行病学调查计划[7-8]，并结合本市实际，在春季和秋季集中强制免疫后，分别开展了3 次集中监测，抽样设计见表1。养殖场内，按照存栏量进行系统抽样，每场抽取35~80 份家禽血清；在交易市场，按照档口或摊位数量，每场抽取15~35 份家禽血清；在自然村散养户，每户抽取15~30 份家禽血清。

表1 集中监测抽样策略和抽样数量

此外，选取22 个固定家禽养殖场（预期群体免疫抗体合格率为94%、可接受误差10%、置信水平95%），在2018 年春季集中免疫前和免疫后开展定点监测。免疫前，调查这些养殖场的免疫程序、饲养管理和高致病性禽流感病史等情况，同时在每个场点采集35 份血清样品（预期个体免疫抗体合格率90%、可接受误差10%、置信水平95%）；免疫后21 d，在这些场内，每场随机采集35 份血清样品。固定场点及样品数量见表2。

1.2 器材与试剂

试验器材包括，单道、8 道移液器（品牌Thermo）；96 孔90 V 型微量反应板、微量振荡器等；检测试剂包括，H5 亚型（Re-8 株）禽流感病毒血凝抑制试验抗原、H7N9 亚型禽流感病毒血凝抑制试验抗原，均为哈尔滨维科生物科技开发公司产品。

1.3 检测方法与判定标准

参照国家标准GB/T 18936 2003[9]，采用血凝和血凝抑制试验，检测H5、H7 亚型禽流感免疫抗体。HI 抗体效价≥24，判定为个体合格；存栏禽群免疫抗体合格率≥70%，判定为群体合格[10]；H5 和H7 亚型群体合格率均≥70%的场点，判为合格场点。

2 结果与分析

2.1 集中监测

从3 次集中监测结果（表3）来看，高致病性禽流感抗体场点合格率从2017 年秋季的48.0%，分别提高到2018 年春季的96.6%和秋季的95.5%，H5、H7 亚型个体合格率也均高于2017 年秋季水平，且差异均有统计学意义（P ＜0.01）。

2018 年春季和秋季的高致病性禽流感抗体场点合格率差异不显著（P ＞0.05），H7 亚型个体合格率差异也不显著（P ＞0.05），但秋季的H5亚型个体合格率较春季继续升高（P ＜0.05）。

2.2 定点监测

2018 年春季集中强制免疫前（4 月）、免疫后21 d（5 月）进行的定点监测结果（表4）显示：免疫后21 d，H5 亚型禽流感抗体个体合格率由92.6%降到58.2%，免疫后60 d，又大幅回升到90.8%，差异极显著（P ＜0.01）；而H7 亚型抗体合格率呈直线上升，个体合格率差异有统计学意义（P ＜0.01）。

表3 合肥市高致病性禽流感抗体集中监测结果

表4 合肥市高致病性禽流感抗体定点监测结果

3 讨论

禽流感（H5+H7）二价灭活疫苗使用初期，H5 亚型抗体合格率较高，但H7 亚型抗体合格率较低。按照《农业部关于切实做好全国高致病性禽流感秋季免疫工作的通知》要求，2017 年秋季全国统一用（H5+H7）二价灭活疫苗替代重组禽流感病毒H5 二价或三价灭活疫苗，对家禽实施免疫[6]。合肥市参考农业农村部推荐的免疫方案，对辖区内家禽进行了免疫。不过，从采样信息的汇总情况看，免疫密度并未达到100%。通过电话回访，分析原因为：一是有的种禽场和蛋禽场仍遵循本场的免疫程序，未及时更换免疫（H5+H7）二价灭活疫苗；其次，部分肉禽场在监测采样开展时仍在免疫有效期内，未再次实施免疫；二是（H5+H7）二价灭活疫苗当时尚未在水禽场中推广使用。种禽场、蛋禽场或水禽场普遍使用过重组禽流感病毒H5 二价或三价灭活疫苗进行程序免疫，导致H5 亚型基础免疫抗体一直维持在较高水平，因而H5 亚型抗体合格率一直较高。肉禽场的H5 亚型抗体合格率较高，也可能与母源抗体较高有关。

生产实践中，一般采用历史对照调查方法，对疫苗进行免疫效果评价[11]。本研究在2018 年春季集中免疫前后，对家禽群体进行抗体水平检测，发现免疫后21 d 的H5 亚型抗体个体合格率明显下降，而H7 亚型抗体合格率却明显升高（P ＜0.01）。从反馈的采样信息看，5 月开展的监测中，有9 个场点采样时间没有达到免疫后21 d 的要求，可能由于采样时间的提前，致使疫苗刺激的免疫效果没有完全展现出来，导致抗体合格率偏低，也可能与不同抗原刺激机体免疫应答的时间不一致有关。随后6 月的跟踪监测发现，H5 和H7 亚型抗体合格率均显著提升。

从2017 年10 月开始，（H5+H7）二价灭活疫苗逐步被广大养殖户使用，使得高致病性禽流感场点合格率增幅较大，个体合格率也均有提升，表明该疫苗的免疫效果较好，这与国内其他省市的临床应用结果一致[12-15]。因此，各地要继续加强免疫、监测，结合“先打后补”政策，对免疫抗体水平不达标和增补栏的养殖场（户）及时补免。

4 结论

研究发现，（H5+H7）二价灭活疫苗能够显著提升H5 和H7 亚型抗体的场点合格率和个体合格率，特别是H7 亚型抗体，最终都达到了95%以上，说明该疫苗对H5 和H7 亚型禽流感具有较好的防护效果，可使禽群达到有效的免疫保护水平。因此，建议各地继续加强（H5+H7）二价灭活疫苗的免疫和监测，根据实际情况及时补免，保证免疫密度。