手足口病检测中应用实时荧光定量PCR的应用效果

王倩 党一兵 李天顺

1 营口市卫生健康事务中心 （辽宁 营口 115000）2 营口海关 （辽宁 营口 115003）

内容提要： 目的：研究采用实时荧光定量PCR方法对于手足口病进行检测所取得的效果。方法：本文选择的研究对象均为2017年5月～2018年9月本市各县区送来的疑似手足口病病例50例作为本文研究对象，对于所有研究对象均选择采用实时荧光定量PCR方法进行检验，同时将检验结果和实验室酶联免疫吸附实验结果进行对比分析，调查实时荧光定量PCR检查方法检验的效率。结果：通过实时荧光定量PCR检验方法最终检验的阳性率为96.00%（48/50），检验结果和实验室检验结果进行比较，P＞0.05，差异不具有统计学意义。根据检验结果也能够得出，本文50例患儿的发病时间主要集中在夏秋季，而且男性患儿的发病率比女性患儿更多，随着患儿年龄增长，手足口病的发病率表现为下降的趋势。结论：对于手足口病在进行检验的过程中，采用实时荧光定量PCR方案进行检查可有效的对于患儿病情进行诊断，是一种良好的辅助检查依据。

手足口病一般是因为肠道病毒导致的一种传染病，病情多发生在小儿群体当中，发病群体的年龄一般不超过五周岁。发病之后患儿临床主要表现为厌食症状，存在有低热和口痛，在患儿的手部和足部以及口腔等部位存在有小溃疡、疱疹情况，严重的会对于患儿的生长发育产生阻碍[1]。临床大部分患儿会在一周之内可自行康复，但是有一少部分患儿会因此而导致出现肺水肿和心肌炎等情况，个别患儿甚至会出现无菌性脑膜炎，并发症严重的对患儿的生活质量和生命安全产生影响，甚至会容易导致患儿死亡。对于这种病情需要进行有效的诊断以便于及早对患儿进行干预性治疗。本文针对于此分析选择采用实时荧光定量PCR方法对手足口病进行检验所取得的效果，并将主要研究情况进行如下的报告。

1. 资料与方法

1.1 一般资料

本文选择的研究对象为本市各个县区所送来的疑似手足口病病例50例作为研究对象，对于所有研究对象的相关情况进行分析，其中有男性患儿38例，女性患儿12例，患儿的年龄区间为1～5岁，平均（2.8±0.5）岁。所有患儿存在不同程度的低热症状，此外还有厌食症38例，在患儿的手部、足部和口腔等部位均存在不同程度的溃疡和疱疹，通过实验室检验以后，本文所有患儿均得到确诊。本研究所有研究对象排除存在严重器质性损伤的患儿，也不存在有基础性病症患儿，本文排除不同意，进行此次研究观察的研究对象，排除存在有精神类病症和意识障碍的患儿。

1.2 方法

选择采用实时荧光定量PCR方法进行检验，检验过程当中对于所有患儿咽拭子进行标准复温，然后利用全自动核酸提取仪进行核酸的提取工作，之后按照试剂盒的相关操作方法进行操作，主要对研究对象进行肠道通用病毒EV、柯萨奇A组16型（CA-16）、肠道病毒71型（EV-71）的进行实时荧光定量PCR检验，选择采用实时荧光PCR仪器ABI7500，试剂为江苏硕世荧光核酸检测试剂盒，按试剂盒说明配制20μl的检测反应体系，以核酸提取液为模板吸取5μl加入反应体系中，反应条件为：逆转录反应30min 50°C，预变性5min 95°C，变性10s 95°C，退火、延伸及FAM通道检测荧光40s 55°C，同时变性和退火延伸需要45个循环。诊断的标准是检测样品的核酸Ct值≤35且曲线呈S型并有明显指数增长为阳性，Ct值＞38或未检出为阴性。

1.3 观察指标

对于荧光定量检验结果和实验室检验结果进行对比分析，评价荧光定量检验方法的准确性。

1.4 统计学分析

本文数据进行统计学分析，采用统计学软件IBM SPSS25.0对于所有研究对象进行检验，本文的计数资料选择采用卡方值（χ2）进行检验，P＜0.05表示差异明显，存在统计学意义。

2. 结果

通过实时荧光定量PCR检验方法最终检验的阳性率为96.00%（48/50），检验结果和实验室检验结果进行比较，P＞0.05，差异不具有统计学意义。根据检验结果也能够得出，本文的50例患儿的发病时间主要集中在夏秋季，而且男性患儿的发病率比女性患儿更多，随着患儿年龄增长，手足口病的发病率表现为下降的趋势。见表1。

表1. 实时荧光定量PCR检验方法和实验室检验方法的比较

3. 讨论

临床有研究认为肠道病毒当中的EV71病毒感染的患儿均存在有严重的神经系统并发症，而且会在一定程度上对于患儿产生危害，容易导致患儿病死。然而由CA16病毒感染而导致患儿出现手足口病，预后效果相对较好，出现死亡的现象相对较低。手足口病一般多发生在儿童群体当中患儿年龄通常不超过5周岁。本文针对于此简单分析手足口病在检验过程中选择实时荧光定量PCR检验方法检验的效果。

肠道病毒感染会导致手足口病存在一定的潜伏期，大约为一周左右。患儿在出现感染症状后存在有病毒的免疫能力，不同类型的病毒感染之后，其抗体不存在交叉的保护作用。手足口病的分布相对广泛，一年当中最为多见的季节为夏秋季节，这种病毒的感染性存在隐匿的特点，所以对患儿进行早期诊断尤为重要，能够避免患儿病情的严重化。选择酶联免疫吸附实验检测手足口病，检测的阳性率相对较低，灵敏度也相对较差，所以检验过程中存在有一定的局限性[2]。选择实时荧光定量PCR检验方法进行检验，主要是因为整个检验过程通过PCR仪器完成，检验不需要进行紫外灯和电泳观察，能够减少相关的复杂操作的过程，加速了检验的进程，提升了检验的可靠性，可在完全封闭的情况之下进行逆转录和扩增反应，在一定程度上避免了PCR产生气溶胶污染的状况。实时荧光定量PCR检验方法检验过程当中，检验时间相对较短，全程一般只需要3～5个小时，可以将肠道病毒检验时间大大缩短，这样就能够对于手足口病的诊断提供充足的实验室依据，对于患儿的治疗提供可行的帮助。

实时荧光定量PCR方法通过对肠道通用病毒EV，CA16病毒和EV71病毒的分析，可以得出因为这两种病毒感染而导致得手足口病的患儿在临床症状表现方面，存在着一定的差异，CA16病毒导致患儿出现手足口病的病情表现相对较轻，而由EV71病毒感染而导致手足口病的患儿，病症表现相对较为严重，很容易导致患儿出现神经源性肺水肿和脑干脑炎等相关并发症，因此对于患儿的生命安全产生严重的威胁。而本文的这一结果和相关临床报道具有一致性，也能起到相互验证的作用。同时也提示我们在通过实时荧光定量PCR检验的时候，对患儿病情诊断和治疗都起到积极的作用。本文的相关数据也能提示我们，采用实时荧光定量PCR检验方法对手足口病患儿进行检验具有较高的阳性率，因此在临床应用予以重视。

综上所述，对于手足口病在进行检验的过程中采用实时荧光定量PCR方法进行检测可有效的对于患儿病情进行诊断，是一种良好的辅助检查依据。