冷凝集干扰输血相容性实验的诊断及处理

冯立岗，见晓明，卢伟伟，田艳波

(1.长春博迅生物技术有限责任公司，吉林 长春130012；2.吉林大学第一医院 输血科，吉林 长春130021；3.赤峰市阿鲁科尔沁旗医院，内蒙古 赤峰025550)

输血前相容性实验检测的目的是选择与患者血型配合的各种血液成分，使之在患者体内有效地存活，无不良反应[1]。但临床上某些疾病患者如支原体肺炎、传染性单核细胞增多症、恶性淋巴瘤、病毒感染后以及自身免疫性疾病等极易产生高效价冷凝集素[2],从而可能对临床输血相容性实验的ABO正反定型、交叉配血等造成干扰，导致误判。对此类产生冷凝集素患者的血型定型和配血实验，宜采取试管法、卡式法、吸收放散等多种实验验证和判断，以避免血型鉴定和配血结果的错误。现将1例产生了冷凝集素的待输血患者的输血相容性实验检测过程报告如下。

1 材料与方法

1.1 临床资料

患者，男，35岁，2018年2月入院，临床诊断为“上消化道出血、肝硬化、失血性休克”，因重度贫血，查Hb 41.2 g/L，申请悬浮红细胞2U。患者有输血史，查询患者临床资料发现2016年该患者在本院住院和输血时检测血型均为A型Rh(D)阳性，对患者血型进行卡式法检测，发现本次正定型为AB型Rh(D)阳性，反定型为A型，正反定型不一致，需进一步结合不规则抗体筛查、冷凝集素吸收试验等血清学试验进行鉴定。

1.2 试剂与仪器

ABO、RhD血型定型检测卡(单克隆抗体)(12人份/盒，批号20190102)，抗人球蛋白检测卡(12卡/盒，批号20190102)，ABO血型反定型试剂盒(人血红细胞)(0.8%，批号2018120201)，不规则抗体检测试剂(人血红细胞)(4%，5 ml/瓶，批号20181203)，低离子强度盐溶液(批号20180301)，以上均由长春博迅生物技术有限责任公司生产；抗A、抗B血型定型试剂(单克隆抗体)(10 ml/支，批号20170714)，由上海血液生物医药有限责任公司生产；凝聚胺试剂盒(250测试/盒，批号20181025)，由中山生科公司生产。以上所有试剂均在效期内使用。TD-3A型离心机、FYQ型免疫微柱孵育器由长春博研科学仪器有限责任公司生产；低速自动平衡离心机由北京雷勃尔离心机有限公司生产；电热恒温水浴箱由上海实贝仪器设备厂生产。

1.3 方法

样本ABO血型鉴定，采用微柱凝胶卡式法及试管法。卡式法按厂家说明书操作，试管法分别在不同温度条件下检测，按文献[1]中方法操作；不规则抗体筛查分别采用卡式法、盐水法、聚凝胺法，试验均按试剂说明书及文献[1]中方法操作；冷凝集素吸收试验按文献[2]操作。根据确定的血型结果，取ABO同型献血员进行交叉配血，配血采用卡式法按试剂说明书操作。

2 结果

2.1 患者血型及不规则抗体筛查卡式法检测结果

患者血型经微柱凝胶卡式法检测，ABO、Rh血型显示为正定型AB型Rh(D)阳性，反定型为A型，不规则抗体筛查阴性。反应强度及格局见表1。

表1 患者血型及不规则抗体筛查检测结果 (卡式法)

注：+代表凝集，0代表阴性

2.2 患者血型试管法及不规则抗体筛查盐水法、凝聚胺法检测结果

患者ABO血型经试管法分别在不同温度(4℃、室温、37℃)条件下检测，结果4℃条件下检测正定AB型，反定O型，反定型O细胞阳性，自身细胞对照阳性；室温条件下检测，正定型AB型，反定型A型，自身细胞对照阳性；37℃条件下检测正反定型一致为A型，反定型O细胞、自身细胞对照均阴性。反应强度及格局见表2。不规则抗体筛查盐水法、凝聚胺法均阳性，自身细胞对照均阳性。反应强度及格局见表3。

2.3 患者冷凝集素吸收试验

将患者红细胞用37℃生理盐水洗涤3遍后，在4℃冰箱与其自身血清混合吸收1 h(一次吸收不完全，用同样的方法反复吸收数次)，用患者吸收后的血清和洗涤后配成悬液的红细胞做血型鉴定，结果血型正反定型一致均为A型。

表2 患者ABO血型检测结果(试管法)

注：+代表凝集，0代表阴性

表3 患者不规则抗体筛查检测结果 (盐水法、凝聚胺法)

注：+代表凝集，0代表阴性

2.4 患者交叉配血结果及输血策略

查询患者临床资料发现其以往住院和输血时均为A型Rh(D)阳性，并根据以上试验结果分析为自身冷凝集素或37℃不反应的无临床意义同种抗体影响血型鉴定，对该患者血样采用抗人球蛋白卡式法进行交叉配血，取A型Rh(D)阳性献血员配血，主次侧均无凝集反应、无溶血，配血相合。根据上述结果选择交叉配血相合的A型Rh(D)阳性悬浮红细胞2U发给临床。临床输注时血液制品使用输血加温器，37℃预热待输血液，使其恢复到人体正常温度或接近正常温度后进行缓慢匀速输注[3]。患者输注后无不良反应发生，Hb由41.2 g/L上升到59.2 g/L，贫血症状得到改善。

3 讨论

冷凝集是指在室温或更低温度下，对所有红细胞(包括自身红细胞)发生的凝集现象称为冷凝集反应，冷凝集反应源于体内冷凝集素过高而导致血液在体外、低温条件下产生的红细胞自凝，冷反应性自身凝集素通常是IgM，在外周循环的较低温度下与红细胞结合，使补体成分附着在红细胞上[4]。冷凝集素能在低于37℃条件下凝集细菌、红细胞等颗粒抗原，引起凝集反应的温度一般小于30℃，其最高滴度在4℃时出现，温度上升到37℃时凝集现象可消失。一般健康人血清中含有少量冷凝集素，但效价很低，且20℃以上不发生凝集反应，只有在温度较低的情况下才会出现自身凝集。但在某些病理情况下，如支原体肺炎、自身性免疫性溶血性贫血、肝硬化等患者的血清中可出现高效价的冷凝集素，且反应温度提高，可与自己及各型人的红细胞发生凝集，导致临床工作中定型和配血困难[5]。

本病例中，对患者血型进行卡式法检测，发现本次正定型为AB型Rh(D)阳性，反定型为A型，正反定型不一致，在排除包括血标本错误、血液标本受药物干扰、实验试管不清洁、红细胞血液配制浓度过高或过低、试验结果记录错误与溶血结果误判、试剂漏加、失效或污染、离心过度或不足等人为因素后，按规程重新检测卡式法ABO正反定型，并增加37℃等温度下试管法红细胞血型鉴定和试管法不规则抗体(盐水法及凝聚胺法)，结果显示卡式法仍为正定型AB型、反定型A型，而试管法4℃条件下检测正定AB型，反定O型，但37℃条件下检测正反定型一致均为A型。通过不同温度下的血型检测并结合不同方法(不同温度)的抗体筛查试验，说明导致正反不符因素可能为自身冷凝集素。

尽管大多数自身冷凝集素在血清学检查中不会引起问题，但一些自身冷凝集素可能掩盖具有临床意义的同种抗体的存在。在这些情况下，自体红细胞冷吸附自身血清可以去除自身抗体，从而检测潜在的同种抗体[4]。在大多数非病理性冷自身凝集素存在的情况下，用自体红细胞简单快速地吸附病人血清能去除大部分冷凝集素。本例将患者红细胞用37℃生理盐水洗涤后吸收其自身血清，用吸收后的血清和红细胞做血型鉴定，结果正反定型一致均为A型，进一步说明了本例导致血型鉴定困难的因素为自身冷凝集素。且对患者样本进行的卡式法(37℃反应)不规则抗体筛查试验结果阴性，说明样本血液中并不存在37℃有反应性的临床有意义抗体，可验证本例输血相容性试验异常为冷凝集素影响这一诊断。

在临床输血工作中，冷凝集现象常有遇到，一般正常人血清中含有少量冷凝集素，但效价低，且低于4℃时才有活性，冷凝集素在37℃水浴后其作用常消失，对输血相容性实验无明显影响[6]。但在某些病患者血清中，常含有高效价的病理性自身冷凝集素，如系统性红斑狼疮、自身免疫性溶血性贫血、支原体肺炎、阵发性睡眠性血红蛋白尿症、肝硬化及非霍奇金淋巴瘤等肿瘤患者等，常会给输血相容性实验带来一定困难[7]。在冬季或室内温度下降等条件下，也极易导致冷凝集的发生。在临床血型鉴定及配血过程中应注意保温，提高环境温度，避免冷凝集的发生。如仍发生冷凝集现象，可用上述试验等方法解决，报告时要注明有冷凝集现象，同时提示临床保温输血，并且输血要慢，密切观察患者反应，确保输血安全。