重症急性胰腺炎继发脓毒症患者肠道细菌易位特征观察

朱剑,罗祖金,赵娜,刘霁尘,曹志新,陈云凤

急性胰腺炎是由多种病因导致胰酶在胰腺内激活并导致胰腺组织自身出现水肿、出血及坏死的炎症反应，临床常见有恶心、呕吐、血胰酶增高等症状[1-3]。其中重症急性胰腺炎起病急，易因胰腺坏死、感染继，发脓毒症，发病后病死率高，严重危及患者生命[4-5]。而肠道细菌易位则是肠道细菌或其产物从肠腔移位至肠系膜或其它肠外器官的过程，也是胰腺重复感染、坏死、继发脓毒症的主要原因，但其作用机制尚未明确[6-8]。本次研究对重症急性胰腺炎继发脓毒症与肠道细菌易位的关系进行分析，旨在探讨肠道细菌易位在重症急性胰腺炎继发脓毒症过程中发挥的作用，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 基础资料

选取我院2016年2月至2017年2月收治的62例重症急性胰腺炎继发脓毒症患者纳入研究对象，设为A组(脓毒症组)，另外选取同期收治的58例重症急性胰腺炎患者纳入研究对象，设为B组(非脓毒症组)。两组基础资料性别、年龄等对比差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。具有可比性。本次研究经我院伦理委员会批准后实施。

表1 两组一般资料比较

1.2 纳入及排除标准

1.2.1 纳入标准

①A 组符合《重症急性胰腺炎诊治指南》[9]中重症急性胰腺炎相关诊断标准及《脓毒症的定义、诊断标准、中医证候诊断要点及说明(草案)》[10]脓毒症相关诊断标准，B组符合重症急性胰腺炎相关诊断标准；②18～65岁；③患者及家属对本次研究知情同意，并签署知情同意书。

1.2.2 排除标准

①严重心肝肾功能不全、免疫紊乱、恶性肿瘤患者；②语言障碍无法正常交流者；③近6个月内有重大外科手术史及手术感染史；④近3个月有激素或免疫抑制剂使用史；⑤妊娠或哺乳期妇女。

1.3 方法

1.3.1 细菌培养

两组患者治疗前在B超引导下以细针穿刺法取得胰腺周围渗液，并进行常规细菌培养，并使用生物梅里埃公司(法国)生产的VITEK 2 Conmpact全自动细菌鉴定系统进行检测。

1.3.2 炎症指标检测

两组患者入院后抽取空腹静脉血5 mL，经离心后送检，IL-6使用西安凯普机电公司生产的Fm-200/10型γ计数器以放射免疫法检测，试剂盒购自天津九鼎生物工程公司；CRP使用日本东芝公司生产的TBA-40FR全自动生化分析仪以免疫比浊法检测，试剂盒购自上海科华生物工程公司；PCT使用罗氏公司提供的Cobas型全自动免疫分析仪及原装试剂以单克隆抗体检测法进行检测，IL-2、IL-1β使用ELISA法检测，试剂盒由深圳晶美生物工程有限公司生产；血清检测均参照试剂盒操作说明书进行。

1.3.3 Fas检测

取100 μL乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝静脉血，加入抗Fas(CD95)抗体，孵育30 min后加入20 μL荧光二抗IgG(H+L)PE避光孵育30 min，加1×溶血素1 mL裂红细胞，离心后弃上清，最后加入500 μL PBS重悬细胞上机检测，使用FACSDiva Software进行数据分析；抗Fas(CD95)抗体由Abcam公司(英国)生产，荧光二抗IgG(H+L)PE由MultiSciences公司生产(杭州)，FACSDiva Software由BD公司(美国)生产。

1.3.4 sFas检测

抽取2 mL空腹静脉血，经离心后送检，sFas使用VIDAS(德国)酶标仪以ELISA法检测，试剂盒由Genzyme公司(美国)生产。

1.3.5 淋巴细胞凋亡检测

使用Annexin V-FITC/PI荧光双染流氏细胞术检测，100 μL淋巴混悬液加入Annexin-V FITC(各5 mL)避光孵育15 min后再加入1×buffer 400 μL，最后使用BD公司(美国)生产的FACS Canto Ⅱ流式细胞分析仪检测，检测结果使用BD FACSDiva Software行数据分析

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 两组细菌培养结果分析

A组共计培养出细菌126株，革兰阴性菌82.54%(104/126)，革兰阳性菌17.46%(22/126)，B组共计培养出细菌108株，其中革兰阴性菌80.56%(87/108)，革兰阳性菌19.44%(21/108)，具体结果见表2。

2.2 两组炎症指标检查结果对比

A组PCT、CRP、IL-2、IL-6、IL-1β水平显著高于B组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

2.3 两组Fas、sFas、淋巴细胞凋亡检查结果对比

A组Fas、sFas、淋巴细胞凋亡分别为(37.52±5.17)%、(8.20±3.41)ng/mL、(11.45±5.73)%各项指标显著高于B组(29.41±3.26)%、(6.13±2.04)ng/mL、(6.55±1.97)%，差异有统计学意义(t=10.198、4.001、6.179，P均=0.000)。见图1-2。

表2 两组细菌培养结果(n)

表3 两组炎症指标检查结果对比

图1 两组Fas、淋巴细胞凋亡比较

图2 两组sFas水平比较

3 讨论

急性胰腺炎致病因素与过量饮酒、胆道感染、胆结石等有关[11-12]，该疾病多发于胆道疾病、高血脂症人群[13-14]，发病时病情凶险且并发症多，死亡率高达10%～20%[15]。同时胰腺坏死、感染可继发脓毒症，随着疾病进展可发展为脓毒性休克及多器官功能衰竭综合征，且患者死亡率也会随之升高[16]。而肠道细菌易位则是胰腺重复感染、坏死、继发脓毒症的主要原因之一，但临床上对其作用机制尚未完全明确，肠道细菌过度繁殖、肠黏膜损坏以及消化运动功能失调可能是重症急性胰腺炎继发脓毒症感染异位细菌的主要机制[17]。故本次研究对重症急性胰腺炎患者及重症急性胰腺炎继发脓毒症患者PCT、CRP、IL-2、IL-6、IL-1β、Fas、sFas、淋巴细胞凋亡各项指标进行分析，探讨肠道细菌易位在重症急性胰腺炎继发脓毒症过程中发挥的作用。

本次研究中A、B两组患者胰腺周围渗液细菌培养结果显示革兰阴性菌占比分别为82.54%、80.56%，提示这些细菌多来自于肠道，且革兰阴性菌占多数。有研究指出重症急性胰腺炎状态下微循环血供受到损伤，肠道血氧供应减少，导致肠壁紧密连接、绒毛上皮细胞结构破坏，可引发肠道细菌群紊乱，大肠杆菌及肠道需氧菌等致病菌数量会增加，乳杆菌、双岐菌等有益菌的生长会受到抑制，是引发肠源性感染的重要原因，与本次研究结果基本相符[18-19]。本次研究中两组患者胰腺周围渗液细菌培养均检查出肠源性细菌，表明两组患者可能存在肠屏障功能障碍，而肠道细菌易位发生时肠内细菌越过肠屏障进入肠外，故胰腺周围渗液细菌培养检查出肠源性细菌与肠道细菌易位可能存在一定关系。

A组PCT、CRP、IL-2、IL-6、IL-1β水平显著高于B组，提示重症急性胰腺炎继发脓毒症患者体内PCT、CRP、IL-2、IL-6、IL-1β水平显著高于重症急性胰腺炎患者。重症急性胰腺炎发病后患者体内已存在炎症反应，而PCT、CRP、IL-2、IL-6、IL-1β均为炎症反应过程中的常见及关键指标[20]，各指标间相互作用、相互诱导，导致机体出现炎症损伤，炎症因子的过度表达也会加重患者肠粘膜损伤，促使肠道细菌易位形成，并加重体内炎症反应，损伤胰腺周围组织，引发脓毒症。与薛庆亮[21]、单亮[22]等研究结果基本相符。

A组Fas、sFas、淋巴细胞凋亡各项指标显著高于B组，表明重症急性胰腺炎继发脓毒症患者Fas、sFas、淋巴细胞凋亡各项指标显著高于重症急性胰腺炎患者。有学者指出Fas是控制细胞凋亡的重要信号传导通路，与免疫抑制、感染、炎症、器官细胞坏死有关[23]。胰腺炎发病后机体会出现炎症反应，引起Fas、sFas上升，此时淋巴细胞则会发挥抗炎作用，但过度的抗炎反应会引起免疫抑制[24]，而免疫抑制会导致机体对病原体的敏感性增高，降低清除能力，患者更容易出现脓毒症。王浦[25]指出免疫系统受损后会促使肠道细菌易位形成，并导致坏死的胰腺发生感染。故重症急性胰腺炎患者因免疫抑制出现肠道细菌易位后容易继发脓毒症。

综上，重症急性胰腺炎患者炎症因子高表达、免疫抑制、肠屏障功能障碍会促使肠道细菌易位形成，进而继发脓毒症。