气相色谱法同时测定磷酸特地唑胺原料药中4种有机溶剂的残留量

周庆凯

天津红日药业股份有限公司 天津 301700

磷酸泰地唑胺是美国Cubist制药公司开发的一种恶唑烷酮类抗生素。用于治疗金黄色葡萄球菌（包括耐甲氧西林菌株和甲氧西林敏感菌株）、各种链球菌及肠球菌等革兰阳性细菌引起的成人急性细菌性皮肤和皮肤组织感染。

1 材料

1.1 仪器

Aglient7890A型全自动气相色谱仪、AglientG1888顶空全自动进样器、氢火焰离子化检测器，ChemStation在线色谱工作站；6%氰丙基苯、94%二甲基硅氧烷聚硅氧烷毛细管色谱柱色谱柱，KQ-100B型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)；SartoriusBP211D型天平(赛多利斯公司)[1]。

1.2 药品与试剂

磷酸特地唑胺原料药(四川大学华西药学院自制）；色谱纯甲醇对照品、色谱纯二氯甲烷对照品、色谱纯乙酸乙酯对照品、色谱纯N，N-二甲基甲酰胺均购自德国默克公司，分析纯二氧六环对照品购自成都市科龙化工试剂厂，纯度均≥99．8%。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

采用6%氰丙基苯、94%二甲基硅氧烷聚硅氧烷毛细管色谱柱为本方法色谱柱；检测器：氢火焰离子化检测器；进样口温度设置为200℃；火焰氢离子化检测器温度设置为250℃；柱温采取程序升温方式：起始柱温设置为50℃，保持5分钟，然后以每分钟15℃升温至220℃后再保持5分钟；载气使用高纯氮气，其柱流速为每分钟3．0mL；分流比设置为5：1；进样方式为顶空进样；顶空进样体积为1．0uL；顶空瓶装样量为10mL；顶空瓶温度设定为100℃；顶空平衡时间设置为30分钟。

2.2 溶液的配制

空白溶液：精密量取N，N二甲基甲酰胺1mL，置于10mL顶空瓶中密封保存备用。混合对照品溶液：精密称取甲醇150mg、二氯甲烷30mg、乙酸乙酯250mg、二氧六环对照品各19mg，分别用DMF稀释至10mL，作为单个对照溶液，备用；分别精密量取2mL单个对照品溶液于50mL量瓶中，用N，N二甲基甲酰胺稀释至刻度，再摇匀后作为混合对照品储备液；精密量取2．5mL混合对照品储备液于量瓶中，加N，N二甲基甲酰胺稀释至10mL，再摇匀后作为混合对照品溶液。取1mL置于10mL顶空瓶中，加盖密封保存备用。供试品溶液：精密称定本品适量，加N，N二甲基甲酰胺溶解并定容，超声助溶5分钟使之溶解，摇匀，制成每毫升50mg的供试品溶液，备用[2]。精密量取1mL供试品溶液于10mL顶空瓶中，加盖密封即得。

2.3 系统适用性试验

分别精密量取单一对照品溶液1．0mL，对各待测组分进行定位检测。另精密量取空白对照溶液、混合对照品溶液、供试品溶液，同法测定，记录色谱图样报告，所得空白溶剂、混合对照品溶液及供试品溶液气相图谱在本实验的色谱条件下，各待测组分相互无干扰，均能达到良好的分离，峰形良好，分离度＞1．5，理论塔板数均大于50000；甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、二氧六环、N，N二甲基甲酰胺的保留时间分别为 2．975、3．885、4．544、5．715 和 7．224分钟[3]。由此可见，该方法系统适用性符合要求。

2.4 精密度试验

秘密量取混合对照品溶液1mL于顶空瓶中，加盖密封，采用本实验色谱条件同法进行分析，连续重复进样测定6次，计算甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、二氧六环峰面积的RSD分别为0．65%、1．12%、0．73%和1．36%（n=6）。残留有机溶剂组分的 RSD均小于2%，说明本方法精密度良好。

2.5 稳定性试验

制备供试品溶液6份，分别放置室温下0、1、2、4、6和8h时后采用本实验色谱条件同法进行检测分析，记录色谱峰面积。结果本品中二氯甲烷、乙酸乙酯、二氧六环均未检出，只检出甲醇，其峰面积的RSD为1．15%（n=6），表明本溶液在8小时内(室温)稳定。

2.6 线性关系考察

精密量取混合对照品储备液 0．1、0．5、1．0、2．5、5．0 和10mL，分别置于量瓶中，加N，N二甲基甲酰胺稀释至10mL作为系列标准曲线混合对照测试溶液，依次取上述溶液1．0mL于顶空瓶中，加盖密封，再采用本实验色谱条件(“2．1”项下)同法进样测定分析，分别记录各个系列的色谱峰面积[4]。以各个对照品的质量浓度ρ(μg/mL)为横坐标，以与之相对应的峰面积(A)为纵坐标在Excle办公软件中进行线性回归分析，分别得到甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、二氧六环的标准曲线线性回归方程及线性范围，结果见表1。

表1 4种残留溶剂的线性方程和线性范围

3 讨论

顶空平衡温度越高，顶空瓶内的饱和蒸气压越高，挥发气体的浓度越高，灵敏度就相应越高。但是温度过高可能会损坏顶空进样瓶导致瓶口漏气，使得待测成分浓度不准确，以及某些物质可能会产生降解产物影响测定的结果[5]。当平衡时间为30分钟时，本课题组比较了顶空平衡温度60、70、80、90、100、110和120℃下的待测溶剂的峰面积，发现色谱峰面积随着平衡温度的升高而升高，但在100℃以上的色谱峰面积增加不明显，当温度升至110℃时，有少量未知降解杂质出现，考虑到在100℃各待测有机溶剂都能检出且有良好的响应，故本实验的顶空平衡温度设置为100℃。特地唑胺较第一代恶唑烷酮抗生素利奈唑胺相比，主要有两个优势，一个是用法为每天一次共使用六天，比利奈唑胺的每天两次共十天更方便；另外一个是剂型有注射剂和片剂，方便临床切换，减少病人住院时间，从而降低了费用[6]。

本研究首次通过顶空毛细管气相色谱法测定磷酸特地唑胺原料药中的4种残留有机溶剂，并对其进行了方法学验证。结果表明，在本实验设定的色谱条件下，各残留溶剂之间分离效果好，灵敏度高，在浓度范围内线性良好，回收率符合规定[7]。该顶空气相色谱研究方法快速、简便、经济、灵敏，准确、精密度和重现性良好，适合磷酸特地唑胺原料药中甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯和二氧六环等有机溶剂的残留量的同时测定，可以为药物分析工作者对磷酸特地唑胺原料药中残留溶剂的质量控制提供一定的参考。