商洛桔梗根不同部位桔梗皂苷D动态研究

赵志新，潘 苗，王 通

（商洛学院生物医药与食品工程学院，陕西商洛726000）

桔梗（Platycodon grandiflorum（Jacq.）A.DC.）为常用大宗药材，被2015年版《中国药典》收录，主要以根入药，很多地方作为食品使用[1]。桔梗在我国大部分地区均有分布，常见于河南、安徽、吉林、山东、四川、陕西等地，在河南省商洛地区广泛种植，被誉为“五大商药”之一[2]。桔梗具有开宣肺气、祛痰排脓之功效，其主要成分为三萜皂苷类化合物（Triter penoid saponins），目前发现有70余种皂苷类成分，主要以桔梗皂苷为主；桔梗具有镇咳祛痰、抗肿瘤、抗氧化、增强免疫力、抗炎、防治心脑血管疾病等作用[3-5]；除了主要成分三萜皂苷类化合物外，桔梗多糖具有抗衰老、降血糖、抗凝血等保健作用[6-8]。

商洛种植的桔梗种源大多为就地所取，同时桔梗的生长受生境条件（气候、土壤条件及重金属等）影响巨大[9-11]，而目前对商洛种植桔梗特别是根部不同部位中桔梗皂苷积累缺乏相关的研究。

本研究采集5—11月份商洛学院药园基地所种植的桔梗，通过高效液相色谱法（HPLC）测定桔梗主根韧皮部、木质部及须根中桔梗皂苷D的含量，以期对不同生长期及桔梗根不同部位药材品质进行评价，为确定商洛桔梗采收期以及为桔梗质量控制、规范化种植提供借鉴。

1 材料和方法

1.1 材料

桔梗种植于商洛学院GAP中心药材基地，在2018年5—11月每月采集一次2年生的桔梗样品（5，6，7，8，9，10，11 月采集的样品分别编号为 101、102、103、104、105、106、107），以采集时间及部位（须根（A）、木质部（B）和韧皮部（C））分组，即材料101A为5月份所采集的桔梗须根。

1.2 仪器与试剂

液相色谱仪（日本岛津LC-20A型），超声波清洗器（KQ-250型）、粉碎机、电子天平（FA1104）等；桔梗皂苷D对照品（购自中国食品药品检定研究院），色谱级乙腈（购自德国Merck公司），分析纯磷酸、甲醇等（购自天津福晨化学试剂有限公司），超纯水，试验中其他试剂均为分析纯。

1.3 试验方法

1.3.1 色谱条件 检测波长为210 nm；色谱柱使用Hypersil C18ODS（4.6 mm×250 mm，5 μm）柱（大连依利特分析仪器有限公司）；柱温为30℃；流速设置为1.0 mL/min；流动相A为0.05%磷酸水溶液，B为纯色谱乙腈。梯度洗脱程序为：0～20 min，96%～85%A；20～35min，85%～77%A；35～40min，77%～72%A；40～55 min，72%A；55～ 65 min，72%～60%A；65～80 min，60% ～10%A；80 min 以后，10%A，记录时间90 min。

1.3.2 对照品溶液的制备 精密称取桔梗皂苷D对照品，以甲醇为溶剂，制成1 mg/mL质量浓度的标准品溶液，以直径为0.45 μm的微孔滤膜过滤。

1.3.3 供试品溶液的制备 每种桔梗药材样品取2.0 g，粉碎后过0.25 mm筛，加入50 mL50%的甲醇溶解，然后超声提取30 min。提取结束后置于室温，称质量，以甲醇补足损失的量，摇匀，过滤，以直径为0.45 μm的微孔滤膜过滤，取滤液。

1.3.4 测定方法 分别精密吸取对照品及供试品溶液20μL，记录90min的色谱图。对照品溶液显示在54 min出现桔梗皂苷D峰（图l）；供试品107A溶液显示在54 min出现桔梗皂苷D峰（图2）。

1.3.5 标准曲线 取对照品溶液分别稀释至10，100，200，500，800，1 000 μg/mL 的质量浓度，取20 μL进行测定，按上述条件测定峰面积。以进样量X（μg）对峰面积Y进行回归，得回归方程为Y＝45 697X－29 257（R2＝0.983 7），进样量在 10～800 μg/mL范围内有良好的线性关系。

1.4 方法学考察

1.4.1 稳定性考察 取供试品溶液（106C）20 μL，连续进样 5 次，进样时间分别为 0，2，4，6，8 h，按已确定的色谱条件测定，获得桔梗皂苷D峰面积并计算RSD（表1），峰面积RSD为4.481%，小于5%，说明供试品溶液在8 h内比较稳定，符合本试验测定要求。

表1 稳定性试验结果

1.4.2 精密度考察 取标准品溶液20 μL，连续进样5次，检测桔梗皂苷D的色谱峰面积并计算RSD，结果列于表2，峰面积的RSD为0.561%，小于3%，表明仪器精密度符合本试验要求。

表2 精密度试验结果

1.4.3 重复性考察 取待测样品106A溶液5份， 平行操作5次，获得桔梗皂苷D的色谱峰面积并计算RSD（表3），峰面积的RSD为3.344%，小于5%，说明样品制备方法重复性好，符合本试验要求。

表3 重复性试验结果

2 结果与分析

2.1 不同月份桔梗须根中桔梗皂苷D含量分析

从图3可以看出，5月桔梗须根中桔梗皂苷D含量最低（0.190%），6—8月逐渐增长，9月达到最高值 （0.549%），10，11月有所降低 （0.497%和0.479%）。数据显示，须根中桔梗皂苷D含量均较高，均值高达0.410%。

2.2 不同月份桔梗根木质部中桔梗皂苷D含量分析

从图4可以看出，5，6月桔梗根木质部中桔梗皂苷D含量较低（0.016%和0.018%）；之后逐渐增加，11月份达到最高值（0.067%）。研究显示，桔梗根木质部中桔梗皂苷D含量都较低，均值仅为0.039%。

2.3 不同月份桔梗根韧皮部中桔梗皂苷D的含量分析

从图5可以看出，桔梗根韧皮部中桔梗皂苷D含量比较稳定（主要变化范围为0.170%～0.175%），10月份含量最高，为0.217%。根韧皮部中桔梗皂苷D含量高于木质部而低于须根，均值为0.182%。

3 结论与讨论

本试验使用HPLC法，测定商洛地区种植的不同月份（5—11月）的2年生桔梗根不同部位（须根、木质部和韧皮部）中桔梗皂苷D的含量。结果显示，桔梗皂苷D的含量在须根和木质部中稳步增加，二者分别在9月份、11月份达到最大值；而韧皮部中桔梗皂苷D含量除了10月份出现最大值（0.217%）外，其余月份则变化不大。不同部位桔梗皂苷D平均含量由高到低依次为：须根（0.410%）＞韧皮部（0.182%）＞木质部（0.0390%）。申茹等[7]研究表明，山东不同区域桔梗根中桔梗皂苷D的含量范围为0.16%～0.38%，这与本研究测定结果基本一致。说明桔梗药材品质受所种植区域环境影响很大；同时，氮水平和形态对桔梗生长及氮磷吸收有很大影响[13]，而不同播期[14]、产地及生长年限[15]对桔梗品质影响也很大。因此，应加大桔梗的道地性研究。

建议商洛地区所种植桔梗采收期在10—11月，此时主要有效成分积累趋于稳定，同时采收时须根要充分收集，因为须根中桔梗皂苷D含量最高。研究结果可为确定商洛桔梗采收期以及为桔梗质量控制、规范化种植提供借鉴。