饲料中添加4种中草药制剂对大口黑鲈幼鱼生长和抗氧化能力的影响

胡 斌，宋理平，冒树泉，许 鹏



饲料中添加4种中草药制剂对大口黑鲈幼鱼生长和抗氧化能力的影响

胡 斌，宋理平，冒树泉，许 鹏

（1. 山东省淡水渔业研究院// 2. 山东省淡水水产遗传育种重点实验室, 山东 济南 250013）

【目的】研究4种中草药制剂对大口黑鲈幼鱼生长和抗氧化能力的影响。【方法】在基础饲料中分别添加姜黄素(50 mg/kg)、复方中草药Ⅰ(板蓝根、大黄，5 g/kg)、复方中草药Ⅱ(黄芩、黄柏、大黄、大青叶，5 g/kg)、复方中草药Ⅲ(辣蓼、青蒿、苍耳草、赤小豆、苦杏仁，5 g/kg)，连续饲喂初始体质量(19.53±5) g大口黑鲈幼鱼60 d，表观饱食投喂，每天投喂2次。【结果】饲料中添加4种中草药制剂对大口黑鲈幼鱼成活率、特定生长率、饲料系数的影响不显著(＞0.05)；饲料中添加复方中草药Ⅱ显著提高血浆SOD活性(＜0.05)，复方中草药Ⅲ显著增高肝脏中脂肪含量(＜0.05)。【结论】饲料中添加适量的4种中草药制剂对大口黑鲈幼鱼生长不造成不利影响，复方中草药Ⅱ可提高机体抗氧化能力，但复方中草药Ⅲ会加大幼鱼肝脏病变风险。

大口黑鲈幼鱼; 中草药; 生长; 抗氧化能力

水产养殖中通常被用来治疗水产动物传染性疾病的抗生素可能导致在动物体内残留超标、病原菌耐药性和可在养殖环境中传播，对生态和公众健康造成不利影响[1-3]。因此，使用既能促进水产养殖动物生长、提高其机体免疫力，又绿色环保的饲料添加剂更加符合市场需求，这有利于水产养殖业的绿色发展。中草药具有毒副作用小、不易产生耐药性和药物残留、效果显著、资源可再生等优点，是功能性饲料添加剂的重要研究方向之一。姜黄提取物—姜黄素(Curcumin)[4-9]、板蓝根()和大黄()[10-11]、黄芩()和黄柏()等[12-14]、辣蓼()和青蒿()等[15]单一或复方中草药制剂对水产动物具有促进生长、提高免疫能力、治疗水产疫病等作用，其效果已在大黄鱼()[16]、黄颡鱼()[17]、鲤()[18-20]、草鱼()[21]、斑点叉尾鮰()[22]、丁鱥()[23]的养殖实践中得到验证。

大口黑鲈()又称加州鲈，属硬骨鱼纲(Osteichthyes)、鲈形目(Perciformes)、鲈亚目(Porcoidei)、太阳鱼科(Cehtrachidae)、黑鲈属()，分为北方亚种和佛罗里达亚种，原产美国加利福尼亚州密西西比河水系[24]，其肉质鲜美、生长迅速、适温性广，现已成为我国重要的淡水名优养殖品种。大口黑鲈为肉食性鱼类，摄食凶猛，可驯化食用配合饲料，但配合饲料喂养后期易出现生长停滞、肝脏病变和疾病频发的状况，严重限制了大口黑鲈养殖业的可持续健康发展。现阶段大口黑鲈人工配合饲料的研制主要集中在饲料蛋白质[25]、脂肪[25-26]、淀粉[27-28]、维生素和矿物质等的营养需求[29-30]及适宜饲料源的筛选[31-33]等方面，有关中草药制剂对大口黑鲈生长和抗氧化功能等方面作用尚未见报道。本研究通过生长实验，评估4种中草药制剂对大口黑鲈幼鱼的生长性能、饲料效率以及抗氧化能力的影响，以期为中草药制剂在大口黑鲈幼鱼养殖中的应用提供理论基础，为绿色高效大口黑鲈配合饲料研制提供参考。

1 材料与方法

1.1 实验设计

本研究分为5组，空白对照组以基础饲料投喂；实验组饲喂实验饲料，分别添加姜黄素(50 mg/kg)、复方中草药Ⅰ(板蓝根、大黄，5 g/kg)、复方中草药Ⅱ[黄芩、黄柏、大黄、大青叶()，5 g/kg]、复方中草药Ⅲ[辣蓼、青蒿、苍耳草()、赤小豆()、苦杏仁()，5 g/kg]。将各种中草药超微粉碎(150 μm)后，按照不同组方配比，姜黄素添加量参考实验室前期研究基础（大口黑鲈幼鱼姜黄素添加量不宜超过80 mg/kg），复方中草药制剂添加量参考国家兽药“鱼肝宝散”、“三黄散”的标准使用剂量。姜黄素(纯度>95%)由西安飞达生物技术有限公司提供；中草药饮片购自山东省药材公司，药品符合国家兽药标准要求。

1.2 实验饲料

实验饲料为山东省淡水渔业研究院营养与加工研究室自制，将饲料原料粉碎并过380 μm筛，采用逐级混匀的方法使用搅拌机将原料充分混匀，加水后用小型软颗粒机(SLP-45，购自中国水产科学研究院渔业机械研究所)制成直径为2.5 mm的颗粒饲料风干备用。基础饲料组成及营养水平见表1。

1.3 实验鱼与养殖管理

大口黑鲈幼鱼由山东省淡水渔业研究院良种场提供。实验开始前，先用基础饲料暂养7 d，挑选大小、规格、体质基本一致的幼鱼375尾，初始体质量(19.53±5) g，随机分为5个组，每组3个平行，每个平行25尾鱼，分别放入15个循环系统箱(60 cm×80 cm×70 cm)中。

每组实验所用水箱在空间位置上随机分散排布，减少实验组之间因光线、循环水质等因素造成的误差。养殖周期60 d。每天投喂2次(分别于8:30和16:30)，表观饱食投喂，每次投喂持续30 min以上。每天吸污换水(换水量不超过水体1/3)确保水质，24 h连续充气增氧。整个养殖实验期间水质条件为: 水温24.5~30.5℃、溶解氧在6 mg/L以上、氨氮在0.1 mg/L以下、亚硝酸盐在0.1 mg/L以下、pH 6.8~7.5。

表1 实验饲料配方与营养水平

注: 上标字母a：每kg维生素预混料包含以下维生素(IU or mg/kg): VA, 900 000IU; VD,200 000IU; VE, 4 500 mg; VK3, 220 mg; VB1,320 mg; VB2, 1 090 mg; 烟酸 2 800 mg; VB5, 2 000 mg; VB6, 500 mg; VB12, 1.6 mg; VC, 5 000 mg; 泛酸, 1 000 mg; 叶酸, 165 mg; 胆碱, 60 000 mg。上标字母b：每kg矿物质预混料包含以下矿物质(g/kg): FeSO4·7H2O, 25 g; CuSO4·5H2O, 2.0 g; ZnSO4·7H2O, 22 g; Na2SeO3, 0.04 g; KI, 0.026 g; MnSO4·4H2O, 7 g; CoCl2·6H2O, 0.1 g。

Note: a：Vitamin premix supplied the following vitamins (IU or mg/kg): Vitamin A, 900 000IU; Vitamin D,200 000IU; Vitamin E, 4 500 mg; Vitamin K3, 220 mg; Vitamin B1,320 mg; Vitamin B2, 1 090 mg; Niacin, 2 800 mg; Vitamin B5, 2 000 mg; Vitamin B6, 500 mg; Vitamin B12, 1.6 mg; Vitamin C, 5 000 mg; Pantothenate, 1 000 mg; Folic acid, 165 mg; Choline, 60 000 mg.b：Mineral premix supplied the following minerals (g/kg): FeSO4·7H2O, 25 g; CuSO4·5H2O, 2.0 g; ZnSO4·7H2O, 22 g; Na2SeO3, 0.04 g; KI, 0.026 g; MnSO4·4H2O, 7 g; CoCl2·6H2O, 0.1 g.

1.4 采样与处理

养殖实验结束禁食24 h采样，称取每箱大口黑鲈幼鱼的总体质量，计数尾数；每箱随机取6尾鱼，MS-222(100 mg/L)快速深度麻醉，测定体质量、体长；尾静脉采血，将血样收集在EDTA-K2抗凝管中，3 000 r/min冷冻离心(4 ℃)10 min取上清血浆；迅速分离内脏、肝脏，并称取；将取得的血浆、肝脏样本-80 ℃冻存备用。

1.4.1 生长与形体指标 根据获得数据，计算增重率、特定生长率、饲料系数、肥满度、内脏比、肝体比。鱼体生长及饲料利用率等指标的计算方法如下：

增重率(Weight gain, WG) = (W-0) ÷0，

特定生长率(Specific growth rate,SGR) =(lnW−ln0) ÷，

饵料系数(Feed conversion ratio, FCR) =÷ (W-0)，

脏体比(Viserosomatic index, VSI) =W÷W，

肝体比(Hepatosomatic index, HSI) =W÷W，

肥满度(Condition factor, CF) =W÷3。

式中0为实验开始时鱼的体质量(g)；W为实验结束时鱼的体质量(g)；为实验结束时鱼的体长(cm)；为鱼的养殖时间(d)；为摄食的饲料量(g)；W为实验结束时鱼的内脏质量(g)；W为实验结束时鱼的肝脏质量(g)。

1.4.2 肝脏水分、脂肪测定 取部分-80 ℃冻存备用的肝脏，4 ℃冰箱解冻，检测水分、粗脂肪含量。

水分：105℃烘箱干燥法[34]；粗脂肪：索氏抽提法[35]。

1.4.3 血浆生化指标测定 取-80 ℃冻存备用的血浆，4 ℃冰箱解冻。检测血糖(GLU)、超氧化物歧化酶(SOD)活性。

GLU：葡萄糖氧化酶法；SOD：WST法。试剂盒购自南京建成生物工程研究所科技有限公司。

1.4.4 肝脏生化指标测定 采样所取得的肝脏，4 ℃冰箱解冻，滤纸吸干表层血液和水分，以生理盐水为匀浆介质按照1∶9的比例制成组织匀浆液，3 000 r/min冷冻离心(4 ℃)10 min，取上清液用于总抗氧化能力(T-AOC)、SOD和丙二醛(MDA)的测定。

T-AOC：ABST法；MDA：TBA法。试剂盒购自南京建成生物工程研究所科技有限公司。

1.5 数据统计与分析 实验数据采用SPSS 17.0软件进行单因素方差分析，数据差异显著时，采用Duncan’s检验法进行多重比较，差异水平定为<0.05。实验数据以Mean±SD表示。

2 结果与分析

2.1 中草药制剂对大口黑鲈幼鱼生长性能和形体指标的影响

中草药制剂对大口黑鲈幼鱼生长性能和形体指标的影响见表2。饲料中添加中草药对鱼体的成活率、特定生长率和饲料系数影响不显著(＞0.05)；与基础组相比，饲料中添加中草药对鱼体的增重率影响不显著(＞0.05)，但复方中草药Ⅲ组较增重率最高的复方中草药Ⅱ组显著降低(＜0.05)；复方中草药Ⅰ显著降低了幼鱼的脏体比(＜0.05)，但与姜黄素组相比差异不显著(＞0.05)；姜黄素显著降低了幼鱼的肝体比(＜0.05)，但与复方中草药Ⅰ、Ⅲ组间差异不显著(＞0.05)；饲料中添加姜黄素和复方中草药Ⅰ、Ⅲ能够显著降低幼鱼的肥满度(＜0.05)。

表2 中草药对大口黑鲈幼鱼生长性能和形体指标的影响

注: 同行数据肩标不含相同字母的两组平均值之间差异显著(<0.05)。= 6，Mean ± SD。

Note: Means in the same line with different superscripts are significantly different (0.05).= 6，Mean ± SD.

2.2 中草药制剂对大口黑鲈幼鱼肝脏、血液生化指标的影响

如表3所示，4种中草药制剂对大口黑鲈幼鱼肝脏中水分含量的影响不显著(＞0.0)；与基础组比较，复方中草药Ⅲ显著提高了幼鱼肝脏脂肪含量(＜0.05)，姜黄素和复方中草药Ⅰ、Ⅱ对幼鱼肝脏脂肪含量的影响不显著(＞0.05)。与基础组相比，饲料中添加姜黄素和复方中草药Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ对幼鱼肝脏中T-AOC和MDA活性影响不显著(＞0.05)；实验组间比较，复方中草药Ⅲ组的幼鱼肝脏T-AOC显著低于复方中草药Ⅰ组(＜0.05)，MDA显著高于复方中草药Ⅱ组(＜0.05)。与基础组相比，姜黄素和复方中草药Ⅰ、Ⅱ对幼鱼肝脏中SOD活性的影响不显著(＞0.05)，复方中草药Ⅲ显著降低了幼鱼肝脏SOD活性(＜0.05)，但实验组间差异不显著(＞0.05)。

与基础组比较(表3)，饲料中添加4种中草药制剂对大口黑鲈幼鱼血液GLU的影响不显著(＞0.05)，但复方中草药Ⅰ较复方中草药Ⅱ显著降低了幼鱼血糖含量(＜0.05)。

复方中草药Ⅱ组较基础组和复方中草药Ⅰ、Ⅲ组显著提高幼鱼血浆超氧化物歧化酶活性 (＜0.05)，但与姜黄素组差异不显著(＞0.05)。与基础组比较，姜黄素和复方中草药Ⅰ、Ⅲ对幼鱼血浆SOD的影响不显著(＞0.05)。

表3 中草药对大口黑鲈幼鱼血液、肝脏生化指标的影响

注: 同行数据肩标不含相同字母的两组平均值之间差异显著(<0.05)。=6，±SD。

Note: Means in the same line with different superscripts are significantly different (0.05).=6，±SD.

3 讨论

姜黄素是从姜科姜黄属植物姜黄根茎中提取的一种脂溶性酚类物质[36]。对水产动物的研究发现，饲料中添加适量的姜黄素能促进草鱼、大黄鱼、黄颡鱼等的生长[4-8]，但对大菱鲆()幼鱼[9]特定生长率没有显著影响。在本研究中，饲料中添加50 mg/kg姜黄素对大口黑鲈幼鱼的存活率、特定生长率和饵料系数没有显著影响，与饲料中添加400 mg/kg和600 mg/kg大菱鲆幼鱼的研究结果[9]相同；本实验室前期研究中，饲料中姜黄素添加量＜80 mg/kg时，大口黑鲈生长性能差异不显著，添加量≥80 mg/kg后大口黑鲈生长受到抑制，表明姜黄素在饲料中适宜剂量的差异可能与鱼类种类、食性、养殖环境、饲料原料组成等有关。本研究中，50mg/kg姜黄素显著降低了大口黑鲈幼鱼的肝体比，表明适量姜黄素对大口黑鲈幼鱼肝肿大具有一定抑制作用。板蓝根、大黄按比例配伍的“鱼肝宝散”和黄芩、黄柏、大黄、大青叶按比例配伍的“三黄散”作为国标兽药已被广泛应用于鱼类病害防治中，主要用来防治水产动物细菌性疾病[17-21]，参考这2种兽药标准剂量，在饲料中分别添加5 g/kg的复方中草药Ⅰ(板蓝根、大黄复方制剂)、复方中草药Ⅱ(黄芩、黄柏等复方制剂)和复方中草药Ⅲ(辣蓼、青蒿等复方制剂)对大口黑鲈的存活率、特定生长率和饵料系数没有显著影响，复方中草药Ⅰ显著降低了大口黑鲈的脏体比，这与在鲤鱼[15]中的研究结果一致。实验结果表明，饲料中适量中草药制剂(姜黄素和复方中草药Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)的添加不会对大口黑鲈的生长造成不利影响。

大口黑鲈为典型淡水肉食性鱼类，饲料中碳水化合物含量超过20%时就会导致肝脏细胞中糖类物质的大量积累，并出现高血糖症，严重时会导致肝脏功能异常、生长缓慢甚至死亡率也会随之上升[37-38]。以12%、24%、36%这3种碳水化合物水平的饲料喂养大口黑鲈8周，其血糖含量分别为10.30、17.77、25.64 mmol/L[39]。本研究中大口黑鲈幼鱼血糖含量为7.26～9.31 mmol/L，未出现高血糖症状，且4种中草药制剂的添加对大口黑鲈幼鱼血糖含量影响不显著，这可能是因为基础饲料主要采用鱼粉为蛋白源，植物性原料添加较少。

T-AOC是机体内抗氧化能力的总体体现，是酶促(超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽硫转移酶等)和非酶促(维生素、氨基酸和金属蛋白等)两方面因子抗氧化能力的总和[40]，更加综合反映了机体抗氧化酶系统和非酶促系统对外来刺激的代偿能力。脂质过氧化能产生众多有毒的活性氧簇(ROS)，如超氧阴离子(O2－·)、H2O2和臭氧等。SOD是机体中唯一以O2－为底物的酶，能催化O2－歧化为H2O2和O2，从而减少O2－在生物体内的积聚并阻断其转化为羟基自由基OH·，维持细胞内氧自由基处于低量无害状态[41]。MDA是氧自由基攻击生物膜中的 PUFA 引发脂质过氧化作用形成的最终分解产物，其含量可间接反映机体的氧自由基和脂质的过氧化水平，从而间接反映出细胞受损伤的程度[41]。本研究中姜黄素和复方中草药Ⅰ对大口黑鲈肝脏中脂肪含量、T-AOC、SOD、MDA和血浆中SOD影响不显著，复方中草药Ⅱ显著提高了大口黑鲈血浆中SOD活性。这可能是因为黄芩抗氧化活性强于姜黄[42]，且黄柏主要活性物质小檗碱具有较高抗氧化增强作用[43]。复方中草药Ⅲ的药理配伍以健脾和胃消食调中为目的，在本实验室前期研究中可显著提升鲤鱼、大口黑鲈的肌肉品质，但本研究中显著降低了肝脏SOD活性，显著提高了幼鱼肝脏中脂肪含量，肝脏MDA含量有升高趋势，降低了幼鱼抗氧化能力。

4 结论

饲料中添加姜黄素(50 mg/kg)会显著降低大口黑鲈幼鱼肝体比和肥满度；饲料中添加复方中草药Ⅰ(板蓝根、大黄，5 g/kg)会显著降低脏体比和肥满度；饲料中添加复方中草药Ⅱ(黄芩、黄柏、大黄、大青叶，5 g/kg) 显著提高血浆SOD活性，可增强机体抗氧化能力；饲料中添加复方中草药Ⅲ(辣蓼、青蒿、苍耳草、赤小豆、苦杏仁，5 g/kg)显著降低肥满度，显著降低肝脏SOD活性，提高肝脏中脂肪含量，肝脏MDA含量有升高趋势，加大了肝脏病变风险。

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Effects of Four Chinese Herbal Preparations on Growth Performance and Antioxidant Activity in Juvenile

HU Bin1,2, SONG Li-ping1,2, MAO Shu-quan1, XU Peng1

（1.//2,250013,）

【Objective】A 60-d feeding trial was conducted to evaluate the effects of dietary four Chinese herbal preparations on growth performance and antioxidant activity in juvenile[initial body weight (19.53±5) g]. 【Method】A basal diet (control) was supplemented with curcumin (50 mg/kg), Chinese herbal preparations Ⅰ(,, 5 g/kg), Chinese herbal preparationsⅡ(,,,, 5 g/kg), Chinese herbal preparations Ⅲ(,,,,, 5 g/kg) to formulate five experimental diets. The fish were fed twice daily to apparent satiation. 【Result】The survival rate, specific growth rate, feed conversion ratio ofwere not significantly affected by the dietary four Chinese herbal preparations (＞0.05).The activity of plasma SOD significantly increased by the dietary Chinese herbal preparationsⅡ(＜0.05). The liver lipid content significantly increased by the dietary Chinese herbal preparations Ⅲ(＜0.05).【Conclusion】The results from the present study indicated that there were no significant adversely affect on growth performance of juvenileamong all treatments. Antioxidant activity significantly increased by the dietary Chinese herbal preparationsⅡ, but the dietary Chinese herbal preparations Ⅲ would increase the risk of liver disease.

juvenile; Chinese herbal preparations; growth performance; antioxidant activity

S968.22

A

1673-9159（2019）04-0101-07

10.3969/j.issn.1673-9159.2019.04.015

2019-04-09

山东省2017年度农业重大应用技术创新项目

胡斌（1980－）, 男, 硕士, 助理研究员, 主要从事水产动物营养与饲料加工研究。E-mail: b-hu@163.com

宋理平（1974－）, 男, 博士, 研究员, 主要从事水产动物营养与饲料加工研究。E-mail: lpsyang1974@126.com

胡斌，宋理平，冒树泉，等. 饲料中添加4种中草药制剂对大口黑鲈幼鱼生长和抗氧化能力的影响[J].广东海洋大学学报，2019，39（4）：101-107.

（责任编辑：刘岭）