四川某奶牛场粪样中寄生虫的调查研究

2019-07-15沈青义张传师罗正中雍康何清王一曹随忠

中国奶牛 2019年6期

沈青义，张传师，罗正中，雍康，何清，王一，曹随忠

（1.甘肃农业大学应用技术学院，临洮 730500；2.重庆三峡职业学院动物科技系，重庆 404155；3.四川农业大学动物医学院，成都 611130）

寄生虫病是奶牛养殖中常见的疾病。寄生虫在侵入、移行和定居过程中，以各种方式对奶牛机体造成危害，包括夺取奶牛的营养；对奶牛造成机械性损伤；寄生虫排出的代谢产物、排泄物和分泌物等可引起奶牛应激反应，造成免疫抑制[1]；奶牛的抗病能力下降，给其他微生物的侵入创造了条件。长期如此，寄生虫病可引起奶牛生长发育受阻[2]、产奶量降低[3]和饲料报酬下降。在临床上，寄生虫病可以造成产奶量下降、乳脂率降低、产奶高峰期缩短、流产、不孕等，严重时可导致奶牛死亡[4]。据报道，在美国，胃肠道线虫每年给养牛业造成的经济损失超过20亿美元[5]。在我国，奶牛寄生虫感染普遍存在[6～13]。

奶牛常见消化道寄生虫病病原种类较多[13,14]，常见的线虫有捻转血矛线虫、细颈线虫、牛弓首蛔虫、牛仰口线虫和毛首线虫等；常见的绦虫有莫尼茨绦虫；常见的吸虫有肝片吸虫、前后盘吸虫、矛形双腔吸虫和胰阔盘吸虫等；常见的原虫有艾美耳球虫、微小隐孢子虫、安氏隐孢子虫、蓝氏贾第鞭毛虫等。通过检测奶牛粪便中的寄生虫虫卵或卵囊可以了解奶牛寄生虫的感染情况，检查方法经济、简单、易操作，而且对奶牛造成的应激小[15,16]。本试验通过粪便检测，调查奶牛寄生虫感染情况，为该奶牛场防治寄生虫病提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 粪样

2018年1月20日，在四川崇州市某奶牛养殖场（存栏犊牛80头、育成牛46头、泌乳牛147头），随机采集新鲜奶牛粪样90份，其中犊牛15份、育成牛25份、泌乳牛50份，每份150～200g，采集过程中严格避免用具相互交叉污染。每份粪样保鲜袋分装，逐一编号登记，4℃冷藏保存，带回实验室进行粪样寄生虫检查。

1.1.2 试剂及仪器

0.1mol/L NaOH溶液、饱和食盐水。光学显微镜（CX21FS1、OLYMPUS）、普通离心机（TD-4Z台式低速离心机、四川蜀科仪器有限公司）、天平（恒佳牌JYT-2架盘天平、常熟市佳衡天平仪器有限公司）等。

1.2 方法

1.2.1 饱和盐水漂浮法

称取新鲜粪便2g置于烧杯中，加入10倍量的饱和盐水，用镊子搅拌均匀，用纱布过滤到平底管中，使管内粪汁平于管口并稍隆起，用盖片盖于管口上，静置15min，将盖片置于载片上，显微镜下观察粪便中虫卵或卵囊形态结构、大小等特征，根据相关资料[4,15～17]进行初步鉴定。

1.2.2 离心沉淀法

称取新鲜粪便5g，置于烧杯中，加入25mL清水，搅拌均匀。用纱布过滤到离心管中，离心3min，以转速500r/min离心，倾去上层液体，加入清水混匀，再次离心，如此反复3次。最后倾去上层清液，留约沉淀物1/2体积的液体量，使用吸管吹吸均匀，取2滴粪汁置于载片上，加盖片镜检。

1.2.3 斯陶尔氏计数法

斯陶尔氏计数法即虫卵计数法，用于了解奶牛感染寄生虫的强度。方法为：使用100mL的三角锥瓶，先加入0.1mol/L（或4%）NaOH溶液至75mL处，加入8g粪便，用镊子搅拌均匀，使呈细致均匀的粪悬液，用吸管吸0.15mL粪悬液滴于2张载片上。显微镜下将载玻片上所有粪悬液中的虫卵计数后，两张载玻片上的总虫卵数乘以62.5，即每克粪便中虫卵数[18]（egg per gram feces，EPG）和每克粪便中的卵囊数（oocysts per gramme，OPG）。寄生虫感染率=（感染阳性样本数/总检测样本数）×100%；寄生虫感染强度=0.15mL粪悬液中总虫卵数×62.5。

2 结果

2.1 奶牛寄生虫感染情况

如表1所示，本试验共采样90份，其中寄生虫虫卵/卵囊阳性54份，总感染率为60%（54/90）。犊牛寄生虫感染率为73.33%（11/15），育成牛寄生虫感染率为40.00%（10/25），泌乳牛寄生虫感染率为66.00%（33/50）。结果表明，不同年龄阶段的寄生虫感染率不同，其中犊牛感染率最高，育成牛感染率最低。

表1 奶牛粪样中虫卵、卵囊检出情况

2.2 奶牛线虫、吸虫、绦虫感染情况

采用漂浮法和沉淀法处理粪样，根据相关资料[4,15～17]鉴定虫卵并进行数据统计。如表2所示，90份粪样中，线虫感染率为57.78%（52/90），检测出的线虫卵主要是圆线虫卵、细颈线虫卵、牛弓首蛔虫卵、毛首线虫卵；吸虫感染率为6.67%（6/90），检测出的吸虫卵主要是前后盘吸虫卵和肝片吸虫卵；绦虫感染率为1.11%（1/90），检测出的绦虫卵是扩展莫尼茨绦虫卵、贝氏莫尼茨绦虫卵。不同年龄阶段的感染种类和感染率不同，在犊牛与育成牛的蠕虫检查中，主要感染的是线虫，犊牛与育成牛的感染率分别为60%（9/15）、40%（10/25），未检测出绦虫卵与吸虫卵。泌乳牛也主要感染线虫，感染率为66%（33/50），但从粪样中也检测出吸虫卵与绦虫卵，感染率分别为12%（6/50）、2%（1/50）。图1为检出的部分虫卵。

表2 奶牛粪样中蠕虫卵检出情况

图1 奶牛粪便中检出的部分虫卵（×400）

2.3 奶牛球虫感染情况

如表3所示，90份粪样中，只检测出艾美耳球虫卵囊，未检测到隐孢子虫卵囊、贾第鞭毛虫卵囊等。球虫卵囊阳性粪样13份，总感染率为14.44%（13/90）。检出的球虫卵囊有邱氏艾美耳、牛艾美耳和椭圆艾美耳球虫卵囊（图1F）。犊牛对艾美耳球虫更易感，犊牛感染率最高，为60.00%（9/15）。育成牛及泌乳牛的感染率较低，分别是8%（2/25）和4%（2/50）。

表3 奶牛粪样中球虫卵囊检出情况

2.4 奶牛线虫卵、吸虫卵和球虫卵囊感染强度

如表4所示，犊牛、育成牛、泌乳牛的线虫卵感染强度均较低，EPG范围在0～375；吸虫卵只从泌乳牛粪样中检出，EPG范围为125～250；球虫卵囊各年龄阶段均有所感染，但感染强度不高，其中犊牛的感染强度最高，OPG范围为0～562.5。

表4 线虫卵、吸虫卵和球虫卵囊感染强度

2.5 奶牛寄生虫混合感染情况

奶牛寄生虫感染多为数种寄生虫感染，如表5和图2所示，该奶牛场的犊牛、育成牛、泌乳牛均存在混合感染现象，混合感染率为33.33%。犊牛线虫与球虫混合感染现象尤为严重，混合感染率达到63.64%（7/11）。

图2 奶牛寄生虫混合感染情况

表5 奶牛寄生虫混合感染情况

3 讨论

3.1 奶牛线虫感染情况

根据调查结果显示，该奶牛场寄生虫感染普遍，总阳性率达到60%（54/90）。主要感染线虫，其次为球虫和吸虫。牛线虫病原种类较多，初步鉴定有圆线虫、细颈线虫、牛弓首蛔虫和毛首线虫。本调查结果与王正荣和薄新文[11]调查的石河子地区奶牛寄生虫感染结果基本一致。该奶牛场在过去一年未进行驱虫，且饲养管理环境较差，这可能是导致线虫感染普遍的原因。

3.2 奶牛吸虫感染情况

犊牛和育成牛粪样中未检测出吸虫卵，只从泌乳牛粪样中检测出吸虫卵，为片形吸虫卵和前后盘吸虫卵。泌乳牛吸虫感染率为12%（6/50），感染强度EPG范围为125～250。与之相对，王汝代等[8]调查发现，云南省散养荷斯坦牛肠道寄生虫吸虫卵检出率为87.8%，吸虫虫卵检出率高，王华东和廖党金[18]调查西南地区奶牛前后盘吸虫感染率也高达86%，吸虫感染率均比该奶牛场高。根据吸虫的流行病学，吸虫需要淡水螺作为中间宿主，而淡水螺栖息的地方多在水边的青草处，奶牛饲料中添加的青草或者散养管理则成为吸虫感染的主要原因。本次调查的奶牛场是集约化养殖场，其采用的集约化养殖和饲喂干草饲料的管理方式可能是该奶牛场吸虫感染率低的原因。而北京地区[6,7]奶牛寄生虫检测未检出吸虫，原因也是奶牛场主要以圈养方式为主，主要饲喂干草和青贮料，切断了吸虫的传播途径，有效防止了吸虫病的传播。据报道，奶牛片形吸虫病可造成奶牛的产奶量降低10%～20%，犊牛体重下降5%～15%，Howell等[19]研究发现肝片吸虫阳性奶牛的产奶量比未感染牛低15%。

3.3 奶牛球虫感染情况

球虫检查只检测出艾美耳球虫卵囊，未检测到隐孢子虫卵囊、贾第鞭毛虫卵囊等。球虫卵囊阳性粪样13份，感染率14.44%（13/90）。主要感染种类有邱氏艾美耳、牛艾美耳和椭圆艾美耳球虫。本调查结果与王正荣和薄新文[11]调查的石河子地区奶牛寄生虫感染结果差异不大。在本次检查中，犊牛寄生虫感染率最高，为60.00%（9/15），明显高于育成牛及泌乳牛，且感染强度（犊牛OPG范围为0～562.5）也明显高于育成牛与泌乳牛（OPG范围为0～62.5），由于犊牛对球虫的免疫力低，更易感染和发病。5%的犊牛感染球虫后有临床表现，95%的呈亚临床经过。球虫病是引起犊牛腹泻的一个重要原因，严重者可导致犊牛死亡。年龄大的牛一般为无症状带虫者，带虫者可通过粪便不断向环境排出卵囊，犊牛通过接触卵囊而感染。犊牛感染后会损害肠绒毛，导致犊牛的生长发育不良[20]，因此应该重视奶牛球虫病防治。潮湿、卫生状况较差的牛舍中的牛易感染球虫[21]。本奶牛场球虫感染普遍，主要是因为该牛场未定期驱虫，粪便清理不及时导致环境卫生状况较差。

3.4 奶牛混合感染情况

该奶牛场寄生虫感染种类较多，混合感染率达33.33%（18/54），混合感染情况普遍。混合感染率的高低也反映了牛场的管理和卫生状况的好坏[22]，该奶牛场为牛舍内散养式饲养，粪便堆积，清扫不及时，导致卫生状况较差，粪水潴留也会造成寄生虫反复感染，导致混合感染普遍。经调查了解，该奶牛场过去一年未进行寄生虫防治，这也可能是导致寄生虫感染率较高的原因。因此，应该重视寄生虫防治，加强奶牛饲养管理，提高环境卫生水平。由于场内寄生虫多为混合感染，驱虫药应选择广谱驱虫药，驱虫程序可参考沈俊乐等[20]的研究调查结果。