渝西地区兔球虫病流行情况调查及虫种鉴定

谭 纯，贾红菓，梅四鹏，王冰楠，孙 雪，罗 珊，周荣琼,2

（1.西南大学动物医学院，重庆 402460；2.西南大学医学研究院，重庆 402460）

【研究意义】兔球虫病是由艾美耳属（Eimeria）球虫寄生于兔肝胆管或肠上皮细胞内而引起的一种寄生性原虫病，在临床上以腹泻、生长缓慢、消瘦为主要特征［1-2］。该病一年四季均可发生与流行，尤其是在温暖、潮湿的春夏多雨季节，常呈地方性流行［3］。不同品种、年龄的家兔均可感染［4］。根据球虫不同的寄生部位，可将该病分为肠型、肝型和混合型，临床上最为多见的是混合型［5］。目前已确定感染兔的球虫有11 种，其中以侵害肝脏的斯氏艾美耳球虫致病力最强，30 日龄以下的幼兔极易感，且感染率达90%以上，死亡率高达30%以上［6］，对养兔业可造成巨大的经济损失。目前，防治兔球虫病多以药物为主，将抗球虫药物添加进饲料或水中是防治兔球虫病的常见方法［7-8］。由于抗球虫药物种类繁多且致病虫株复杂多变，加上长期不合理使用药物，兔球虫不断产生耐药性。此外，抗球虫药物容易残留于兔肉中，影响消费者健康［9］。因此，掌握渝西地区兔球虫病流行情况和优势虫种十分必要，有利于科学防治该地区的兔球虫病。

【前人研究进展】近年来，一些国内外学者对兔球虫病流行情况进行了调查。据Dusynski等［10］报道，全球兔球虫感染率为64%～100%。Jing 等［11］在对我国14 个省的调查中发现，兔球虫的总体感染率为41.9%，其中流行率最高（70%）的是西北地区。兔球虫感染过程中容易受到机体自身免疫程度和外界环境的影响，且兔球虫种类多，不同地区流行虫种有差异。白鑫等［12］报道斯氏艾美耳球虫是致病力最强的兔球虫虫种，在我国感染范围广，主要分布在西南、中南、西北等地区。任永军等［13］发现四川兔球虫病的感染强度为中、轻度感染，其感染虫种高达11 种，而致病虫种为斯氏艾美尔球虫、黄艾美尔球虫和肠艾美尔球虫。陈红等［14］发现甘肃兔艾美耳球虫的总体感染率为50%，其中地区、品种和年龄等因素是影响兔艾美耳球虫感染率的风险因素。【本研究切入点】重庆近10 余年来鲜有兔球虫病流行病学报告，仅见樵星芳等［15］于2009 年6 月对重庆市中药研究院实验兔球虫感染种类的鉴定。为掌握渝西地区兔球虫病的流行情况，本研究对渝西地区兔球虫感染情况进行调查。【拟解决的关键问题】调查渝西地区不同年龄兔和不同规模养殖场的兔球虫病流行情况，分析影响该地区兔球虫病流行的主要因素，通过形态学对兔球虫种类进行鉴定，以期掌握该地区兔球虫的流行情况和优势虫种，从而为兔球虫病的防治提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

2019 年9 月至2020 年8 月期间，采集渝西8 个区14 个不同规模及生产管理水平养殖场的兔粪便样本1 273 份，其中荣昌区148 份、永川区121 份、大足区166 份、璧山区196 份、江津区142 份、铜梁区161 份、潼南区140 份、合川区199 份。将各粪便样本置于无菌的塑料袋内，编号并记录场址、日龄、粪便外观、养殖模式及用药情况等，置于4 ℃冰箱中保存，待检。

1.2 试验方法

1.2.1 样本处理 采用饱和盐水漂浮法对采集的粪样逐一镜检。经鉴定的阳性样本通过麦克马斯特氏法测定克粪便卵囊数（Oocysts Per Gram，OPG）［16］。

1.2.2 卵囊收集 将阳性样本用研钵磨碎，加适量清水，充分混匀，先后使用孔径为100、280 μm 的网筛过滤2 次；将滤液2 500 r/min 离心10 min；弃上清，往沉淀中加入饱和食盐水溶液，混匀，1 500 r/min 离心10 min；弃上清，往沉淀中加入清水，混匀，2 500 r/min 离心10 min；弃上清，往沉淀中加入适量的1%氯胺T 溶液，置于26～28 ℃恒温培养箱中培养72 h，直至95%以上的球虫卵囊孢子化时停止培养，收集卵囊液，置于4 ℃冰箱中保存。

1.2.3 兔球虫种类鉴定 参照文献［15］进行兔球虫种类鉴定。分别观察各地区球虫孢子化卵囊，从卵囊壁颜色、原生质层颜色、有无残体和卵膜孔等特征进行形态学鉴定。

采用Excel 2010 软件对试验数据进行整理，SPSS 22.0 统计软件进行方差分析。

2 结果与分析

2.1 渝西地区兔球虫感染情况

2.1.1 不同地区兔球虫感染情况 对渝西地区1 273 份粪样进行检测，结果（表1）显示，各地区均存在兔球虫感染，平均感染率为90.65%，平均OPG 值为3.50×104。不同地区之间的感染情况存在不同程度的差异，其中璧山区和江津区的兔球虫感染率最高、达100%，潼南区的感染率最低、为72.14%；大足区的兔球虫OPG 值最高、达到6.56×104，永川的OPG 最低、为9.65×103。

表1 不同地区兔球虫感染情况Table 1 Infection of rabbit coccidia in different regions

2.1.2 不同年龄兔球虫感染情况 对不同年龄兔的粪样进行镜检，结果（表2）显示，2 月龄以下兔的球虫感染率最高、达98.19%，极显著高于2～4 月龄、4～9 月龄及9 月龄以上年龄段兔的感染率。9 月龄以上兔的球虫感染率最低、为62.18%；随月龄增大，兔球虫感染率逐渐降低。此外，2～4 月龄兔球虫OPG 最高、达到6.31×104，9 月龄以上的OPG 最低、为2.47×103。

表2 不同年龄兔球虫感染情况Table 2 Infection of rabbit coccidia at different ages

2.1.3 不同规模养殖场兔球虫感染情况 对来自不同规模养殖场的兔粪样进行镜检，结果（表3）显示，大型养殖场的感染率最高、达到92.90%；小型养殖场的感染率最低、为86.53%，表明兔球虫感染率随着养殖规模的增大呈上升趋势。经统计学分析，小型养殖场的兔球虫感染率极显著低于大型养殖场。中型养殖场的兔球虫感染强度最高，OPG 达到4.96×104，而大型和小型养殖场的兔球虫感染强度较低，OPG 分别为2.71×104和2.69×104。

表3 不同规模养殖场兔球虫感染情况Table 3 Infection of rabbit coccidia in different breeding scales farms

2.1.4 不同用药对兔球虫感染情况的影响 对使用不同药物的兔粪便样本进行镜检，结果（表4）显示，使用盐霉素养殖场的感染率最高，达到92.31%；使用磺胺氯丙嗪钠养殖场的感染率最低，为78.51%。经统计学分析，使用磺胺氯丙嗪钠的养殖场兔球虫感染率极显著低于使用地克珠利、盐霉素的养殖场和未用药养殖场。未用药养殖场的兔球虫感染强度最高，OPG 达到4.42×104，而使用磺胺氯丙嗪钠养殖场的兔球虫感染强度较低，OPG 为1.04×104。

表4 不同用药对兔球虫感染情况的影响Table 4 Effects of different drugs on rabbit coccidia infection

2.2 兔球虫种类鉴定及优势虫种分析

对渝西8 个区14 个养殖场感染的球虫种类进行鉴定，结果（表5、图1）共鉴定出10 种艾美耳球虫，分别是斯氏艾美耳球虫（E.stiedai）、大型艾美耳球虫（E.magna）、中型艾美耳球虫（E.media）、小型艾美耳球虫（E.exigua）、无残艾美耳球虫（E.irresidua）、穿孔艾美耳球虫（E.perforans）、黄艾美耳球虫（E.f lavescens）、盲肠艾美耳球虫（E.coecicola）、肠艾美耳球虫（E.intestinalis）、梨形艾美耳球虫（E.piriformis）。其中，优势虫种为穿孔艾美耳球虫（E.perforans）、大型艾美耳球虫（E.magna）、盲肠艾美耳球虫（E.coecicola）和中型艾美耳球虫（E.media），检出率分别为25.20%、23.38%、11.96%、10.02%；黄艾美耳球虫和梨形艾美耳球虫检出率最低，仅为1.91%和1.40%。

图1 渝西地区10 种兔球虫（×400）Fig.1 Ten kinds of rabbit coccidia in western Chongqing (×400)

表5 渝西地区兔球虫种类Table 5 Species of rabbit coccidia in western Chongqing

2.2.1 不同地区兔球虫种类及优势虫种 渝西8 个地区中检出率最高的兔球虫种类分别为穿孔艾美耳球虫（24.08%～26.27%）、大型艾美耳球虫（21.44%～24.01%）和盲肠艾美耳球虫（10.60%～13.28%）；检出率最低的是黄艾美耳球虫（1.23%～2.66%）和梨形艾美耳球虫（0.99%～2.09%）。8 个区前3 种优势虫种均为穿孔艾美耳球虫、大型艾美耳球虫和盲肠艾美耳球虫，荣昌、合川区中型艾美耳球虫与无残艾美耳球虫检出率相同，为第4 种优势虫种；永川、璧山、江津和铜梁区中型艾美耳球虫为第4 种优势虫种；大足区第4 种优势虫种为无残艾美耳球虫；斯氏艾美耳球虫为潼南区的第4 种优势虫种。

2.2.2 不同年龄兔球虫种类及优势虫种 不同年龄检出率最高的兔球虫分别为穿孔艾美耳球虫（21.77%～24.53%）、大型艾美耳球虫（21.77%～24.53%）、盲肠艾美耳球虫（10.29%～14.29%）和中型艾美耳球虫（9.28%～10.90%）；检出率最低的是黄艾美耳球虫（1.00%～2.54%）和梨形艾美耳球虫（0.83%～2.18%）。2 月龄以下、2～4 月龄和9 月龄以上兔优势虫种依次为穿孔艾美耳球虫、大型艾美耳球虫、盲肠艾美耳球虫、中型艾美耳球虫，4～9 月龄兔优势虫种依次为大型艾美耳球虫、穿孔艾美耳球虫、盲肠艾美耳球虫、中型艾美耳球虫（表6）。

表6 不同年龄兔球虫种类分布情况Table 6 Species of rabbit coccidia at different ages (%)

3 讨论

我国是世界兔肉生产大国，无论是兔肉产量和出口方面均位列世界前茅。目前全世界兔肉总产量210 万t，我国约85 万t，占1/3 以上［17］。由于我国的兔产业具有品种不均匀及密集养殖的特点，因此防控兔球虫病十分困难。据报道，我国不同地区、不同兔场以及不同日龄的兔球虫总感染率为41.9%～87.4%［12-14,18］。Jing 等［11］发现西南地区兔球虫的感染率为62.5%，Yin 等［19］报道四川兔球虫感染率为56.4%。而本研究渝西地区兔球虫的感染比较普遍，感染率达到90.65%，平均OPG 为3.50×104，其中2 月龄以下兔的球虫感染率最高，与上述报道一致。

渝西地区不同规模养殖场兔球虫的感染率随养殖规模的增大呈上升趋势。小型养殖场球虫感染率（86.53%）低于大型养殖场（92.90%）和中型养殖场（90.89%）。而Jing 等［11］对我国14 个省48 个养殖场的兔球虫进行检测，结果发现小型养殖场的兔球虫感染率（61.4%）高于大型（34.2%）和中型（37.1%）养殖场，本研究结果与其存在差异。分析原因可能是渝西地区大、中型养殖场养殖兔数量过多，卫生状况较差；同时因场地有限，各年龄段兔混养现象普遍存在，导致兔球虫感染率及感染强度升高。

目前国际公认的兔球虫有效种有11 种［13］，而不同地区兔球虫种类的优势虫种也存在差异。Maziz-Bettahar 等［20］报道阿尔及利亚北部的优势虫种为大型艾美耳球虫（42.5%）。Ladron等［3］发现墨西哥流行最广的虫种为肠艾美耳球虫（11.3%）。Jing 等 ［11］报道了我国优势虫种为穿孔艾美耳球虫（35.2%）、中型艾美耳球虫（31%）和大型艾美耳球虫（28%）。Yin 等［19］发现四川兔球虫流行种类为穿孔艾美耳球虫（42.7%）、中型艾美耳球虫（35.45%）、无残艾美耳球虫（34.55%）和大型艾美耳球虫（31.82%）。本试验在渝西地区共鉴定出10 种艾美耳球虫，其中 优势虫种为 穿孔艾美耳球虫（25.20%）、大型艾美耳球虫（23.38%）、盲肠艾美耳球虫（11.96%）。本研究鉴定的优势虫种与上述报道相符。穿孔艾美耳球虫和盲肠艾美耳球虫属于轻微致病和无致病性的兔球虫种类，而大型艾美耳球虫和中型艾美耳球虫属于中等致病力的虫种，与家兔肠道炎症病变和腹泻有关。

4 结论

渝西地区兔球虫感染率较高，平均感染率为90.65%，平均OPG 为3.50×104，说明该地区兔球虫感染非常普遍。其中2 月龄以下兔感染率为98.19%，显著高于其他年龄段兔感染率，应加强对2 月龄以下兔球虫病的防治。小型养殖场兔球虫感染率为86.53%，显著低于大型规模化养殖场，表明小型养殖场更易于兔球虫病的控制。使用过磺胺氯丙嗪钠的养殖场兔球虫感染率极显著低于使用地克珠利、盐霉素的养殖场及未用药的养殖场，表明磺胺氯丙嗪钠能更有效地防治兔球虫病。渝西地区兔球虫种类呈现混合感染，不同地区的前3 位优势虫种相同，均为穿孔艾美耳球虫（E.perforans）、大型艾美耳球虫（E.magna）、盲肠艾美耳球虫（E.coecicola），第四优势虫种存在差异，应针对优势虫种选择合适的抗球虫药物进行预防和治疗。