泰山四叶参多糖保健颗粒剂的制备及抗疲劳功效评价*

药学院，山东第一医科大学(山东省医学科学院)，山东 泰安 271016

根据世界卫生组织的一项调查报告，目前世界上处于亚健康状态的人数约占世界人口的75%[1]。亚健康的表现多样，疲劳是最常见的一种，主要表现为身心疲惫且困倦，工作能力与注意力下降，是人体脑力或体力活动到一定阶段时必然出现的一种正常生理现象，涉及多种生理生化因素。因此，提高机体的抗疲劳能力，改善亚健康状态成为保健品的重要开发方向之一。泰山四叶参(CodonopsLanceolataBenth．et.Hook．F．)是泰山“四大名药”之一，为桔梗科党参属植物，又名羊乳、羊奶参、轮叶党参等，为药食兼用的经济植物。近年来有研究表明，泰山四叶参中多糖含量高达10%以上，具有免疫调节、降血糖、体外抗氧化等多种作用[2-6]。但有关四叶参多糖的保健品市场还未得到很好的开发。本实验通过湿法制粒制备泰山四叶参多糖保健颗粒剂，通过设计正交实验，优化制粒处方，为泰山四叶参多糖保健颗粒剂的制备提供技术参数，并通过《中国药典》颗粒剂检测标准及小鼠负重游泳的药效学实验初步评价颗粒剂的性状质量及抗疲劳作用，为进一步开发泰山四叶参多糖保健颗粒剂提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

泰山四叶参(采自山东第一医科大学中药植物园，经中药教研室鉴定为桔梗科党参属泰山四叶参)；昆明种小鼠(北京维通利华)；小鼠恒温游泳池(济南益延科技发展有限公司)；离心机(盐城凯特实验仪器有限公司)；UV-2550型紫外-可见分光光度计(日本岛津)。

1.2 方法

1.2.1泰山四叶参多糖的提取 参照文献，称取干燥四叶参，加2倍量石油醚回流脱脂4次，1 h /次。经石油醚脱脂后，滤渣在50℃下烘干。用1000 mL蒸馏瓶以4倍量蒸馏水装入适量四叶参干燥药材粉末，在沸水浴中回流提取3次，合并滤液，用旋转蒸发仪减压浓缩至150 mL。以每100 mL浓缩液加20 mL氯仿正丁醇(4︰1)液，剧烈振荡30 min，以4000 r/min离心15 min，去除下层氯仿及中层变性蛋白，取上部水层再重复去蛋白操作，至无明显中层为止。收集去蛋白后的上部水层，加无水乙醇，静置过夜，以4000 r/min离心10 min，收集沉淀物，再依次用95%乙醇、无水乙醇、乙醚、丙酮洗涤各2次，得多糖粗品。再以水-乙醇重结晶纯化2次，50℃烘干，得白色末状泰山四叶参多糖。

1.2.2多糖的含量测定 通过苯酚-硫酸法，利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物，再以比色法测定所提取药物粉末中泰山四叶参中多糖含量[7]。测定所提取药物粉末中泰山四叶参多糖含量为62.8%。

1.2.3泰山四叶参多糖保健颗粒辅料的筛选及颗粒剂制备 选取辅料种类、物料比例、润湿剂乙醇浓度3个因素进行正交实验(表1)。以多糖颗粒剂的成型率(成型率=过筛后颗粒质量/过筛前颗粒质量×100%)及外观为评价指标，采用L9(34)正交实验，确定泰山四叶参多糖保健颗粒制粒处方。

表1 因素与水平表

1.2.4泰山四叶参保健颗粒抗疲劳效果评价 取正常小鼠24只，雌雄各半，平均分为3组。分别为泰山四叶参多糖提取物组(多糖含量为400 mg/kg)，泰山四叶参保健颗粒剂组(多糖含量为400 mg/kg)，空白对照组(给予等量生理盐水)。每日1次，连续给药21 d[6]。末次给予小鼠受试物30 min后，置于恒温游泳池中游泳，水深为35 cm，水温为(25±0.5)℃，鼠尾根部负荷5%体重的夹子。负重游泳力竭时间指小鼠开始游泳至头沉入水下20 s的时间[8-9]。

1.3 统计学处理

2 结 果

2.1 泰山四叶参多糖保健颗粒辅料筛选结果

影响四叶参多糖颗粒剂制备的因素依次是辅料种类、乙醇浓度和物料比例；获得的最佳组合为A1B2C2，即选择可用性淀粉作为辅料，物料比采用1∶3，润湿剂用80%的乙醇制粒。具体见表2。

表2 正交实验结果

2.2 保健颗粒的质量检查结果

2.2.1粒度 取5 g按正交实验筛选的最优处方制备的四叶参颗粒剂，置药筛内过筛，过筛时，目筛保持水平状态，左右水平摇晃1 min，称量不能通过一号筛和能通过五号筛的颗粒及粉末的总重量。不能通过一号筛和能通过五号筛的颗粒和粉末总重为0.1 g，故符合质量标准。

2.2.2溶化性 取5 g按正交实验筛选的最优处方制备的四叶参颗粒剂，加热水(50℃)100 mL，搅拌5 min，颗粒剂完全溶化，故符合质量标准。

2.3 泰山四叶参保健颗粒抗疲劳效应评价结果

小鼠负重游泳实验结果显示，在多糖含量相同的情况下，四叶参多糖保健颗粒剂和四叶参多糖提取物均能明显延长小鼠的负重游泳时间，二者比较差异无统计学意义，结果见表3。

表3 四叶参多糖抗疲劳实验

注：与空白对照组相比，*P<0.05。

3 讨 论

本研究设计L9(34)正交实验，考察了辅料种类、乙醇浓度和物料比例3个因素，优化制粒处方，通过湿法制粒制备泰山四叶参多糖保健颗粒剂，进一步观察各水平下多糖颗粒剂的成型率及外观是否符合要求。结果确定了最佳辅料及物料比例，即以可溶性淀粉作为辅料，物料比采用1︰3，80%的乙醇为润湿剂，同时以该条件制得的四叶参多糖颗粒剂符合《中国药典》对颗粒剂粒度及溶化性的质量标准。最后通过小鼠负重游泳实验，进一步评价泰山四叶参多糖保健颗粒剂抗疲劳的保健作用。实验结果显示：实验方法制备的泰山四叶参多糖颗粒剂(400 mg/kg)与相同药量的泰山四叶参多糖提取物均可提高小鼠的抗疲劳能力，而二者之间无明显差异，颗粒剂的辅料对于四叶参多糖提取物的抗疲劳作用无影响。该研究结果可为泰山四叶参多糖颗粒剂作为抗疲劳保健品开发提供依据。