胃必康颗粒的水提醇沉工艺研究

康亚平

（江苏省如东县中医院药剂科，江苏 如东 226400）

胃必康颗粒为本院的医院制剂，由陈皮、蒲公英、延胡索、制香附等中药组成，具疏肝和胃、理气止痛之功效，用于急慢性胃炎、消化不良和消化性溃疡。本实验根据主要有效成分的理化性质，临床用药基础，以橙皮苷量和干膏得率［1-2］为综合指标，优选水提、醇沉最佳制备工艺，为制定制剂标准操作规程。

1 材料与方法

1.1 仪器 液相色谱仪：LC-20AD，日本岛津；电子分析天平：AUX220，日本岛津；医用超声波清洗器：KQ-1000E，昆山超声仪器公司；电热鼓风干燥箱：HN101-1A，南通沪南科学仪器有限公司；数显型恒温水浴锅：XMTF3000，巩义市予华仪器有限责任公司。

1.2 试剂 橙皮苷对照品：批号110721-201115，购自中国药品生物制品检定所；甲醇、醋酸：色谱纯，水：超纯水，乙醇：分析纯。广陈皮、甘松、蒲公英等饮片由华润南通医药有限公司配送，按照《中国药典》2015年版一部鉴定均符合规定。

1.3 方法

1.3.1 橙皮苷含量测定

1.3.1.1 色谱条件 色谱柱：Amethyst C18-H柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）； 流动相：甲醇 -0.6%醋酸溶液（33∶67）；检测波长283 nm；柱温30℃；流速：1.0 mL·min-1；进样量 5 μL［3］。

1.3.1.2 对照品溶液的制备 精密称取橙皮苷对照品15.08 mg，置于棕色容量瓶中，加甲醇溶解稀释后使每1 mL含橙皮苷603.2 μg的溶液。

1.3.1.3 供试液、阴性供试液的制备 精密吸取提取液1 mL，置于10 mL棕色容量瓶中，加甲醇，超声20 min，放冷后用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，滤液另器保存，备用。阴性供试液同法制得。

1.3.1.4 系统适应性试验 取橙皮苷对照品溶液、供试液和阴性供试液各5 μL，分别注入高效液相色谱仪中，按“1.3.1.1”条件测定。供试液同对照品溶液在相应的位置有吸收，阴性供试液未见干扰。橙皮苷峰分离度＞1.5。

1.3.1.5 线性关系考察 取“1.3.1.2”对照品溶液，加甲醇，稀释至 301.6、150.8、75.4、37.7、18.85、9.425 μg·mL-1。按“1.3.1.1”色谱条件进样，橙皮苷的回归方程y=1790.2x+18.45，r=0.9999。橙皮苷进样量在 0.0471～3.016 μg时，与峰面积建立了良好的线性关系。

1.3.1.6 精密度试验 精密吸取橙皮苷对照品溶液，按照色谱条件连续进样6次，测定峰面积RSD值为0.83%，表明仪器精密度良好。

1.3.1.7 重复性试验 精密吸取1 mL同一样品，共6份，按“1.3.1.3”制备供试液，以橙皮苷量计算，RSD为1.21% （n=6）。

1.3.1.8 稳定性试验 取供试液，注入高效液相色谱仪中按“1.3.1.1”色谱条件，在0，2，4，6，8，12 h时分别进样，记录峰面积RSD为1.15%（n=6）。表明供试液12 h内稳定。

1.3.1.9 回收率试验 取6份已知含量的同一样品，加入橙皮苷对照品，同“1.3.1.3”方法制备供试液，测定，计算橙皮苷含量，平均回收率97.56%，峰面积RSD值为1.31%，表明此方法可行的。

2 水提工艺的研究

2.1 因素水平的确定 根据文献和预试验，影响水提的主要因素：提取时间（A）；提取次数（B）；加水量（C）为因素［4］。用L9（34）进行试验，因素水平见表1。

表1 因素水平表

2.2 水提干膏得率 精密吸取1 mL提取液，置水浴锅上蒸干，再放置烘箱中，恒温105℃3 h，干燥器中冷却30 min，称重。

2.3 水提正交试验结果取100 g处方量饮片，根据L9（34）试验，测定橙皮苷含量和干膏率。主要指标为橙皮苷量，权重系数0.7；次要指标为干膏得率，权重系数0.3。综合评分=（橙皮苷量/最大的橙皮苷量）×100×0.7+（干膏得率/最大干膏的得率）×100×0.3，以综合评分为筛选指标。试验结果见表 2～3。

表2 正交试验结果表

表3 方差分析表

从表 2～3可以看出，因素B对结果有显著的影响，而因素A、C均没有显著的影响，三个因素影响次序：B＞A＞C。各因素不同水平的影响次序为 A2＞A3＞A1，B3＞B2＞B1，C3＞C2＞C1，因此最佳提取工艺为 A2B3C3，即饮片加水12倍，加热煎煮3次，每次1 h。

2.4 验证试验 取100 g处方量饮片，共3份，按优选水提工艺提取。见表4。

表4 验证试验结果

结果表明优选的工艺稳定、可行。

2.5 醇沉工艺的研究

2.5.1 因素水平的确定 根据预试，以醇沉的主要影响因素：醇沉的浓度（A）、浓缩液的相对密度（B）、醇沉的时间（C）作为因素［5］。用L9（34）进行试验，因素水平见表5。

表5 因素水平表

2.5.2 正交试验结果 取100g处方量饮片，按优选的水提工艺制备水提液。按L9（34）正交表试验，并计算综合评分，以此为筛选指标。试验结果见表6～7。

表6 正交试验结果表

表7 方差分析表

由表6～7可以看出，因素A、B、C均对结果没有显著影响。各因素影响次序B＞C＞A；各因素不同水平的影响次序为 A1＞A2＞A3，B1＞B2＞B3，C3＞C1＞C2，最佳醇沉工艺A1B1C3，即水提液浓缩至相对密度1.10（60℃），醇沉浓度60%，放置48 h。

2.5.3 验证试验 取100 g处方量饮片，共3份，按优选的工艺试验。见表8。

表8 验证试验结果

结果表明所优选的醇沉工艺稳定且可行。

3 讨论

（1）为保持原方的疗效和服用方便，用水提醇沉工艺提取胃必康颗粒。用L9（34）正交试验，研究对象为橙皮苷量和干膏得率，作为优选工艺综合评分指标。（2）中药水提液由于含蛋白质、淀粉、多糖等杂质较多。目前常用的去除杂质方法有：乙醇沉淀法、吸附澄清方法、板框压滤法、离心法等［6-10］实际大生产中，因药液量较大，用高速离心法除杂，能耗大。用吸附澄清方法去除胶体不稳定成分，如蛋白质、淀粉等，但不影响氨基酸、维生素、多糖等，且此法工序多，而致成本高。乙醇沉淀法为中药口服制剂精制常用方法，利用有效成分溶于乙醇，而杂质不溶于乙醇，沉淀出来的方法［11］除杂效果较好。（3）流动相的选择：参考《药典》［3］以甲醇-醋酸-水（35∶4∶61）为流动相，橙皮苷分离不好，以甲醇-0.6% 醋酸溶液（33∶67）为流动相时，分离较好。

4 结论

本实验结果表明饮片加水12倍，加热煎煮提取3次，每次1 h；水提浓缩液相对密度为1.10（60℃），用乙醇沉淀，乙醇浓度为60%，并将其静置48 h是稳定合理可行的，适合作为本制剂的标准操作规程。