胃腺癌组织中IMP3蛋白的表达及临床意义*

王研，李卫东，魏建平，马毅兵，曹忠良，林黎娟，张锦辉

（1.辽东学院医学院 分子医学研究室，辽宁 丹东 118003；丹东市第一医院 2.麻醉科，3.普外科，辽宁 丹东 118001；丹东市中心医院4.病理科，5.胸外科，辽宁 丹东 118002）

胃腺癌（ gastric adenocarcinoma，GAC）是一种常见的恶性肿瘤，手术切除是目前最有效的治疗方法。临床分期、淋巴结转移状态、病理分级、有无血管及浆膜侵犯是重要的预后因素[1]。虽然有许多相关的分子学研究，但是多种基因的表达方式及其在GAC演进中所起的作用仍不清楚[2-3]。探讨GAC预后和靶向治疗的生物标志物很有必要，IMP3蛋白是胰岛素样生长因子Ⅱ mRNA结合蛋白家族的成员之一，与该家族其他成员，如IMP2、IMP3等，在胚胎早期中的RNA运输及稳定、细胞生长及迁移中起重要调控作用[4]。研究表明，IMP3在结肠癌、肺癌、卵巢癌、胶质瘤及甲状腺癌等恶性肿瘤中呈高表达[5-9]，并与肿瘤细胞迁移、侵袭及淋巴浸润和远处转移等恶性生物学行为密切相关，可帮助临床诊断高风险性病例、指导治疗及评价预后[10]。目前，国内关于IMP3与GAC关系的报道较少，研究IMP3蛋白与GAC发生、发展的规律，对判断GAC预后、早期发现转移灶和提供新的治疗靶点具有重要意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2007年2月—2011年2月在丹东市第一医院行手术切除的92例GAC患者的组织蜡块标本。其中，男性60例，女性32例；年龄22～79岁，平均49.5岁。术后经苏木精-伊红染色法（HE）证实为GAC，其中高分化30例，中等分化46例，低分化16例；肿块≤3 cm 50例，＞3 cm 42例；伴有淋巴结58例，侵及浆膜34例；临床分期Ⅰ、Ⅱ期72例，Ⅲ、Ⅳ期20例。所有患者术前未行放化疗，另将92例癌旁正常胃黏膜组织和16例有转移的淋巴结组织纳入本实验。

1.2 SP法染色

组织芯片脱蜡、水化，柠檬酸盐抗原修复液中修复，磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffer saline，PBS）漂洗，置入30 ml/L过氧化氢H2O2中10 min，正常血清37℃孵育15 min，加入一抗（1∶50稀释，鼠抗人IMP3多克隆抗体和鼠抗人Ki-67单克隆抗体购自美国Santa Cruz公司），空白对照中以PBS代替一抗，4℃冰箱孵育过夜，加入二抗，37℃孵育60 min，DAB显色，HE复染，中性树胶封固[9]。IMP3蛋白为胞浆着色，Ki-67蛋白为细胞核着色。IMP3结果判断标准：无表达为阴性（-）；着色细胞数＜50%或染色较浅为弱阳性（+）；着色细胞数＞50%且染色较深为强阳性（++）。Ki-67结果判断标准：着色细胞数＜5%为阴性；着色细胞数＞5%为阳性表达。

1.3 统计学方法

数据分析采用SPSS 17.0统计软件和Graphpad Prism 6.0绘图软件，计数资料以率（%）表示，比较用χ2检验，IMP3在不同类型胃组织中的表达用校正检验水准法进行进一步的两两比较，检验水准α=0.0125；Kaplan-Meier法绘制生存曲线，比较用Log-rank χ2检验，影响因素分析用Cox回归模型，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 IMP3蛋白阳性表达率与胃组织类型的关系

胃组织中癌旁组织、GAC和转移淋巴结的IMP3蛋白表达阳性率、强阳性率比较，差异有统计学意义（χ2=14.500和4.143，P=0.000和0.001）。GAC、转移淋巴结组织中IMP3蛋白阳性、强阳性表达率高于癌旁组织（P＜0.05）；转移淋巴结组织中IMP3蛋白强阳性表达率高于GAC组织（P＜0.05）。IMP3阳性着色在细胞浆或细胞膜。见表1和图1。

表1 不同组织类型的IMP3蛋白表达阳性率及强阳性率比较

图1 IMP3蛋白在GAC及转移淋巴结组织中的表达 （SP×100）

2.2 IMP3高表达与GAC临床病理特征的关系

GAC组织中IMP3的高表达率与Ki-67表达、临床分期、是否有淋巴结转移及是否有浆膜侵犯有关（P＜0.05）；与性别、年龄、肿瘤大小和组织分化程度无关（P＞0.05）。见表2。

2.3 IMP3蛋白高表达对GAC生存率的影响

IMP3蛋白高表达的GAC患者无瘤生存率及5年生存率均低于低表达的患者（χ2=15.281和17.545，均P=0.000），说明IMP3蛋白对患者的预后有影响。见图2。

2.4 IMP3蛋白高表达与GAC患者预后的关系

利用单因素Cox回归模型分析所有GAC患者的临床参数，结果显示肿瘤大小、是否有淋巴结转移、是否有浆膜侵犯、临床分期及IMP3高表达与患者总生存率相关（P＜0.05）。再将这些参数进行多因素分析得出，浆膜侵犯、临床分期高IMP3蛋白高表达是GAC患者预后不良的独立危险因素（P＜0.05），表明IMP3高表达可以做为GAC潜在的标志物。见表3、4。

表2 不同临床病理特征患者IMP3蛋白高表达率比较

图2 两组患者的无瘤生存率及5年生存率比较

表3 GAC患者预后因素的单因素Cox回归模型参数

表4 GAC患者预后因素的多因素Cox回归模型参数

3 讨论

IMP3基因定位于7p11.5，其高度保守区包括KH区和RRM区。其中C端包括4个KH区，N端包括2个RRM区。IMP3的转录物含有4 158 bp，包括250 bp的5'-非翻译区，1 740个bp的开放读码框架，2 168 bp的3'非翻译区。3'-UTRs的AU富含区包含8个AUUUA和4个AUUUUUA重复序列[4]。AUUUA序列和IMP3转录物的翻转调节有关，该区的转录物不稳定并且会快速降解，会导致其蛋白合成降低[3，6]。

研究显示，IMP3在多种恶性肿瘤中是预测不良结局的分子标志物，如MIZUKAMI等[11]用半定量免疫组织化学方法检测20例20HLA-A2402阳性的食鳞状细胞癌组织中的IMP3表达，结果显示14例呈强表达，6例呈弱表达，且与组织病理分级相关；同时由酶联斑点实验检测到该20例患者中有8例肿瘤浸润的淋巴细胞存在T细胞介导的IMP3特异性抗原，IMP3可能是潜在的免疫治疗靶点。YUAN等[12]用免疫组织化学方法检测186例原发单灶的结直肠癌中IMP3的表达，约1/3出现IMP3高表达，高分级和IMP3高表达的患者生存率低于无IMP3高表达的患者，IMP3高表达在肿瘤生长和转移中与其侵袭性相关，是结直肠癌预后的重要标志；多变量分析也显示IMP3高表达与浆膜浸润、临床分期一样是影响预后的独立因素，IMP3是结直肠癌特别是高分级结直肠癌潜在的有效治疗靶点。还有研究利用RNAi干扰HA22T细胞IMP3的表达，导致细胞迁移、侵袭及上皮细胞的移行能力下降，但发现IMP3沉默后并未导致细胞伪足结构的减少，因此并不认同该基因卷入细胞迁移是由于伪足形成[13]。之后的微阵列芯片分析显示[14]，IMP3低表达与导致肿瘤侵犯的80多种基因下调有关联，其中包括47种已知基因，而且大部分是属于同一家族基因（如KLRC、CXCL、表皮生长因子等）。有10种基因参与细胞的迁移和侵袭，IMP3去除后最主要的上调基因是E-cadherin，通过PCR验证与微陈列芯片的结果一致，说明IMP3在肿瘤细胞的黏附、迁移及侵袭中起关键的调控作用，可以用来评估肿瘤患者的预后。

笔者的前期研究结果也表明，IMP3高表达预示非小细胞肺癌和原发肝细胞癌患者预后不良[3，15]。本研究结果显示GAC组织、转移的淋巴结组织中IMP3阳性表达率均高于癌旁组织，而转移的淋巴结组织中表达又高于癌组织；GAC组织中IMP3阳性表达率与Ki-67表达、是否有淋巴转移及是否侵犯浆膜层密切相关；伴有IMP3高表达的GAC患者无瘤生存率和5年生存率高于低表达的患者，且浆膜侵犯、高临床分期IMP3高表达是胃腺癌患者预后不良的独立危险因素。

Ki-67是广泛应用于恶性肿瘤细胞增殖的指标，与生长分数相关。以往研究表明，Ki-67与恶性肿瘤的不良预后有关[13]。本研究中IMP3的表达与Ki-67有关，表明IMP3阳性表达情况与细胞的增殖程度有关，可能两者共同促进GAC进展。

综上所述，笔者认为检测GAC中IMP3蛋白的表达水平可以作为判断临床预后的指标之一，有助于提高对患者临床、病理诊断的准确性，为抑制肿瘤转移提供理论依据。