马齿苋提取物的制备及质量研究

杨春燕，祝晓丽，吴小渊，刘 萍，杨秋男

(安徽新华学院药学院，安徽 合肥 230088)

马齿苋(Portulaca olerace)又名马齿草，马苋，马齿菜，马齿龙芽等，为马齿苋科一年生草本植物，主要成分为生物碱类、黄酮类、多糖类、三萜醇类、有机酸类、儿茶酚胺类，维生素类、微量元素及无机盐类等，具有清热解毒、散血消肿，抗菌消炎，降血糖、降血脂、降血压，抗肿瘤抗氧化，预防冠心病等多种功效。

国内外很多相关学者对马齿苋都有很多的研究，主要从马齿苋的几个方面对其进行研究，包括化学成分、药理作用、开发以及利用和临床应用。叶梅荣[1]等人的实验研究中，目前马齿苋在国内的食用仍处于起步阶段，大多数仍是以野生植物为主要资源，栽培利用比较少。因此可以看出国内大多数人对于马齿苋的了解还是很少，因此我们要充分了解马齿苋，减少资源浪费尤为重要。从冯彦[2]的论述中，马齿苋具有广泛的抗菌作用；预防和控制高脂血症和其他心血管疾病；抗击和抵御细胞组织衰老；保护人体血管。马齿苋不仅营养丰富，而且药用价值颇高。因此，马齿苋具有很好的发展前景。从唐红枫[3]的研究来看，马齿苋在消化系统疾病中、在心血管疾病中都有很大的临床应用价值。但是，目前有实验研究得出，马齿苋的栽培和驯化技术尚不成熟。近几年，有部分研究学者对马齿苋中的有效成分采用不同方法进行提取，郝红英[4]等人采用乙醇-硫酸铵双水相萃取马齿苋总黄酮，总黄酮提取率为7.23。陈国妮[5]分别采用了有机溶剂提取法、超声波法、微波法、酶解法对马齿苋中黄酮进行提取，效果显著，大大提高了马齿苋中黄酮类化合物的提取率。郑智音[6]等人对马齿苋中多糖、生物碱和多酚类组分的制备研究中，用树脂富集马齿苋多糖、生物碱和多酚，优化分离纯化工艺。并采用苯酚-硫酸法测定马齿苋中多糖的含量，采用高效液相色谱法测定生物碱和多酚类物质的含量。结果3类组分均有明显的降血糖活性，并对三个组成部分整体给予降血糖效果更佳，扈本荃等人[7]采用高效液相色谱法测定马齿苋中3种有机酸(柠檬酸、L-苹果酸和琥珀酸)的含量，发现不同地区马齿苋的质量存在差异，有机酸的含量也不同。对马齿苋提取物的制备以及质量研究中，必须对马齿苋中的化学成分进行深入研究。孔莹[8]归纳总结出马齿苋的相关化学成分，它主要包括芬酸类、类黄酮、生物碱、蒽醌等。种类多，含量也不相同。就目前查阅到的文献来看，对于马齿苋的研究不全面，对提取物的制备以及质量的研究不够深入。因此，本实验以马齿苋为研究对象，主要用超声波提取法制备马齿苋中重要的成分以及对提取出的成分进行质量研究，为今后的科研实验提供理论基础和科学依据。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

立式电热鼓风干燥箱、旋转蒸发仪、超声波清洗器、多功能粉碎机、真空泵抽滤机。

1.2 试剂

马齿苋、无水乙醇、氨水溶液、亚硝酸钠溶液、硝酸铝溶液、氢氧化钠溶液。

2 实验方法

2.1 马齿苋黄酮类化合物的提取

称取0.5g粉末状的马齿苋于100mL的锥形瓶中，用20mL的移液管加入15mL95%乙醇，放在室温的环境下浸泡，并轻轻地摇匀。将抽滤后的马齿苋乙醇提取液用旋转蒸发仪进行浓缩操作，得到马齿苋黄铜的浓缩液，最后用保鲜膜进行密封保存。

2.2 黄酮类化合物的鉴定

用玻璃棒蘸取少量马齿苋乙醇提取液于滤纸上，靠近装有氨水的瓶口中，显淡淡的黄色，移开滤纸后，3min后，淡黄色逐渐消失，说明存在黄酮。

2.3 标准溶液的制备

用电子天平称取10mg的标准品芦丁，放入10mL的容量瓶中，用70%乙醇溶液定容，配置成标准溶液。

2.3.1 芦丁对照品的标准曲线

用1mL移液管移取1.0mL的提取液于容量瓶(10mL)中。首先加入0.4mL 5%的亚硝酸钠溶液，静置6min；然后加入等量的10%硝酸铝溶液，同样静置6min；最后加入上述溶液等量的氢氧化钠溶液；加入适量的蒸馏水至刻度处，缓慢摇匀，静置20min左右。把不含黄酮的溶液作为对照溶液，分别依次加入等量的样品溶液，设置波长为510nm，测定其吸光度A。用表格绘制标准曲线时，把吸光度(A)作为纵坐标y，把芦丁标准品溶液的浓度(C)横坐标x。如图1。

图1 芦丁对照品的标准曲线

实验结果得出芦丁的浓度与吸光度的关系如下公式：C=0.0930A+0.0018，相关系数R2=0.8875。

2.3.2 黄酮类化合物提取率的计算

(Y:黄铜的提取率mg/g；C：样品溶液的质量浓度g/L；V：样品溶液的体积mL；m：样品的质量g)计算黄酮类化合物的量。

2.4 超声波提取马齿苋中的黄酮类化合物

准备三个规格一致的100mL的锥形瓶，分别标记a、b、c，用电子天平精确称量1.0g粉末状干燥的马齿苋分别加入到标记好的锥形瓶中，分别在锥形瓶中分别加入75mL、95mL、115mL且不同浓度的乙醇溶液中，分别为70%、75%和80%的乙醇溶液，放在室温的环境中浸泡，并每隔几分钟进行摇匀，a锥形瓶放置15min；b锥形瓶放置30min；c锥形瓶放置45min，浸泡并且缓慢摇匀后，用真空泵进行抽滤，抽滤完以后用旋转蒸发器进行浓缩，并将旋转蒸发器的温度设置为70℃，最后得到黄酮类化合物的浓缩液，放入干净的棕色收集瓶中进行保存，并且用保鲜膜进行密封，如表1。

表1 马齿苋提取黄酮类物质的因素水平表

2.5 实验结果与讨论

表2 正交实验设计方案以及实验结果

由表2分析结果看出，四个因素A、B、C、D中D因素具有显著的差异性，因此从上表正交实验结果分析得出，各因素对超声波法提取马齿苋中黄酮化合物的提取率影响大小为：D(料液比)>C(超声温度)>A(超声功率)=B(超声时间)。因此最合适的方案为A3B1C3D1,即料液比为1∶ 20，超声时间为30min，提取温度为60℃，超声功率为250W，从马齿苋中提取出的黄酮类化合物的提取率最高，为6.78%。