藤茶中二氢杨梅素的提取工艺研究

2019-07-03张红忠罗正江李红敏杜东阳张亚洲

贵州农机化 2019年2期

张红忠，雷林，罗正江，李红敏，杜东阳，张亚洲，吴琴

(贵州理工学院食药学院，贵州贵阳 550003)

0 引言

藤茶学名显齿蛇葡萄，系由葡萄科植物显齿蛇葡Ampelopsis grossedentata (Hand.-Mazz.) W. T. Wang. 的嫩茎叶加工而成，主要分布于长江流域以南，如湖南、广西、贵州、福建等地海拔400-1 300米的山地灌丛中、林中、石上、河边[1]。研究表明藤茶中主要含有二氢杨梅素等二氢查耳酮类成分，最高含量可以高达10-15%左右[2-3]；二氢杨梅素是较为特殊的一种黄酮类化合物，在解除酒精中毒、预防酒精肝、脂肪肝等方面具有特殊功效，在食品添加剂领域有广泛的应用前景[4-5]。本文现通过实验研究，从藤茶中提取二氢杨梅素的工艺进行了初步研究，为藤茶进一步研究和开发利用提供可靠的科学依据。

1 材料

1.1 仪器

Agilent 1200 series; DAD 检测器；色谱柱：Phenomenex(Gemini C18， 5 μm， 250*4.60 mm)；Royalstar全自动煎药壶，型号：ysh3501B。

1.2 药品与试剂

乙腈(HPLC级，成都科龙试剂有限公司)；甲醇(HPLC级，成都科龙试剂有限公司)；食用酒精；磷酸(分析纯，北京化工厂)；水为自制纯净水；二氢杨梅素对照品自制，纯度>98%；藤茶为作者本人购买(二氢杨梅素含量4.38%)。

2 方法与结果[6-7]

2.1 色谱条件与系统适用性试验

经文献检索，藤茶中二氢杨梅素的检测波长确定为254 nm。通过实验对比发现流动相的选择：乙腈：水=(18:82)等度洗脱时色谱分离条件较好。

2.2 标准溶液的制备

精密称取对照品二氢杨梅素21.2 mg至100 ml量瓶中用甲醇溶解得A，用甲醇稀释至刻度。溶液摇匀后，10 μl 注入色谱仪，记录色谱图。如图1所示。

图1 空白甲醇的HPLC色谱图

图2 二氢杨梅素对照品HPLC图

图3 藤茶提取工艺中分析样品的HPLC图

2.3 样品的处理

取藤茶30克，按研究用提取实验进行提取，得到溶液用提取溶剂稀释至1 000 ml，溶液摇匀后，10 μl 注入色谱仪，记录色谱图。如图2所示。

2.4 藤茶提取溶剂的选择

2.4.1 提取液提取过程

分别称取藤茶30 g，用60%、70%、80%的乙醇溶液进行提取2次，加入10、8倍量，提取时间为45、30 min，合并两次提取滤液，用提取溶剂稀释至1 000 ml，摇匀。

2.4.2 收膏率的测定

取上2.4.1中溶液，精密量取其中50 ml溶液至蒸发皿中蒸发至干，再于105烘干后称重，计算得收膏率。

2.4.3 二氢杨梅素含量测定

再精密量取2.4.1溶液5 ml至50 ml量瓶中，用提取溶剂稀释至刻度后，摇匀，10 μl 注入色谱仪，记录色谱图，结果如下图。结果如图3。

采用加权评分法进行评价，二氢杨梅素含量测定和收膏率均为50%系数，以其中最高为100分，其它计算比例换算分数，得总分比较。结果见表1、2、3。

表1 不同浓度乙醇提取后收膏率

表2 不同浓度乙醇提取后二氢杨梅素含量

表3 不同浓度乙醇提取后评价得分

通过不同溶剂对藤茶提取的对比，以二氢杨梅素和收膏率为考察指标，综合评分发现用70%乙醇提取藤茶效果最优。

2.9 藤茶提取的正交实验[8-9]

通过预实验选择70%乙醇作为提取溶剂进行正交提取实验。设制提取溶剂用量、提取次数、提取时间为因素，采用L9(34)正交设计实验，以二氢杨梅素和收膏率权重系数各为50%，以其中最高为100分，其它计算比例换算分数，为综合指标进行分析。结果见表4、5、6、7、8、9。

表4 不同浓度乙醇提取后收膏率

表5 不同浓度乙醇提取后二氢杨梅素含量

表6 藤茶提取正交实验评价得分

表7 藤茶提取正交试验的因素与水平

表8 藤茶提取工艺正交试验的设计及结果

表9 藤茶提取工艺正交试验的方差分析结果

注：F0.05(2，2)=19，F0.01(2，2)=99

方差分析结果表明，提取次数对二氢杨梅素提取结果有显著的影响，而溶剂用量和提取时间均无显著性影响。但是结合直观分析，提取次数对提取影响最大，其次是提取时间，溶剂用量对提取二氢杨梅素影响最小。考虑到药材煎煮过程中便利原则，优选提取工艺条件为A2B3C1，即藤茶药材30 g，加70%乙醇10，7，7倍，煎煮3次，煎煮时间20，10，10 min。