WWOX和P53在子宫内膜癌中的表达及临床分析*

魏 伟 刘湘翠

1.菏泽医学专科学校，山东 菏泽 274000； 2.菏泽市牡丹人民医院，山东 菏泽 274000

子宫内膜癌为绝经期女性常见的恶性肿瘤，近年来该病发病率持续增长且有逐渐年轻化的趋势，对女性的生命健康造成严重的威胁，目前对于子宫内膜癌的发生发展机制尚未完全明确[1]。多项研究证实恶性肿瘤为基因性疾病的一种，原癌基因的激活、抑癌基因功能丧失及部分修饰基因功能的改变均在肿瘤的发生和发展中起着重要的作用[2-3]。研究显示含有氧化还原酶的WW结构域(WW domain containing oxidoreductase，WWOX)基因可通过与p73、Ap2、ErbB4及c-Jun等调节细胞凋亡及信号转导的关键基因相互作用而起到以抑癌的作用，其在肺癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤中均有不同程度的表达缺失[4]。P53基因是上世纪80年代末由美国学者Finlay发现其可明显抑制小鼠成纤维细胞株Ras的致癌作用，在正常情况下P53蛋白表达水平较低，经DNA损伤、原癌基因刺激等外界刺激后P53蛋白表达水平明显升高且稳定性增强，其具有阻滞细胞周期的G1/G0期，使细胞不进入S期以抑制细胞的生长而达到抑癌的作用[5]。但目前对于WWOX及P53在子宫内膜癌表达及临床分析方面的文献报道较少，因此本研究旨在通过分析WWOX及P53在子宫内膜癌表达情况，探讨其在子宫内膜癌的发生、发展的作用机制，及其与临床病理特征的关系，旨在为子宫内膜癌的诊断、治疗、预后预测提供新的思路。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2016年2月至2018年2月在我院接受手术切除的子宫内膜癌标本58例，分别取肿瘤组织、癌旁正常组织(距肿瘤边缘5cm以内)及正常子宫内膜组织进行研究。纳入标准：①所有标本均经病理确诊；②临床资料完整；③治疗前均未进行放、化疗；④术前未行雌激素治疗。排除标准：①非原发性子宫内膜癌患者；②合并其他恶性肿瘤者。患者年龄46～73岁，平均(50.18±7.45)岁；国际妇产科联盟(FIGO)分期：Ⅰ期15例，Ⅱ期17例，Ⅲ期15例，Ⅳ期9例；淋巴结转移32例，无淋巴结转移26例。

1.2 方法

(1)主要试剂：鼠抗人P53单克隆抗体、鼠抗人wwox单克隆抗体、通用型耳部免疫检测试剂盒PV-6000(抗兔)及DAB显色盒均购于赛默飞世尔中国公司，即用型SABC免疫组化试剂盒均由杭州默沙克生物工程有限公司，磷酸盐缓冲液PBS(0.01mol/l，PH7.2～7.4)购于武汉普诺赛生命科技有限公司；(2)主要仪器：包埋机、病理切片机、恒伟水浴箱、显微镜等；(3)以链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶连接法(SP法)进行检测，标本常规固定、包埋、切片，常规脱蜡至水、过氧化氢阻断内源性过氧化物酶，微波抗原修复后加入一抗在4℃下过夜，以DAB显色后苏木素复染，行免疫组织化学SP法染色，具体操作按试剂盒说明书进行。以PBS代替一抗作为阴性对照；(4)收集患者临床病理相关信息，并对不同临床病理情况患者WWOX及P53表达情况进行分析。

1.3 结果判定

WWOX染色在细胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性，P53以细胞核呈黄色颗粒状突变为阳性表达，根据Hercep Test评分标准将结果分为-～+++，具体标准如下：+10%以上的细胞染色，染色间断分布；++：10%以上的细胞呈现弱到中度阳性，染色连续；+++：10%以上细胞呈强阳性，染色连续。-为阴性表达，+～+++为阳性表达。

1.4 统计学方法

采用SPS22.0统计学软件进行数据分析，计数资料采用卡方检验，以Sspeaman进行相关性分析，均以P≤0.05认为差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 WWOX及P53在不同组织类型中表达情况

WWOX在肿瘤组织、癌旁正常组织及正常子宫内膜组织阳性表达率分别为96.55%(56/58)、72.41%(42/58)、53.45%(31/58)(χ2=28.236，P=0.000); P53在肿瘤组织、癌旁正常组织及正常子宫内膜组织阳性表达率分别为91.38%(53/58)、68.97%(40/58)、56.90%(33/58)(χ2=17.780，P=0.000)。

2.2 WWOX表达与子宫内膜癌临床病理特征关系

患者FIGO分期、分化程度、转移情况及子宫浸润深度的不同WWOX阳性率明显不同(P<0.05)。患者年龄、肿瘤直径不同WWOX阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结果见表1。

表1 WWOX表达与子宫内膜癌临床病理特征关系

2.3 P53表达与子宫内膜癌临床病理特征关系

患者分化程度、转移情况的不同P53阳性率差异具有统计学意义(P<0.05)。患者年龄、肿瘤直径、FIGO分期及子宫浸润深度的不同P53表达阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结果见表2。

表2 P53表达与子宫内膜癌临床病理特征关系

2.4 WWOX与P53子宫内膜癌中表达相关性分析

相关性分析结果显示WWOX与P53子宫内膜癌中表达呈显著正相关(r=0.495，P=0.016)。结果见表3。

表3 WWOX与P53子宫内膜癌中表达相关性分析

3 讨 论

我国子宫内膜癌发病率一直较高，在女性恶性肿瘤中该病发病率仅次于宫颈癌，约占女性恶性肿瘤发病率的4%[6]。到目前为止子宫内膜癌的病因及发病机制尚未被完全阐明，有研究者认为其发生可能与原癌基因或抑癌基因突变及绝经期雌激素的异常分泌有关，但该假说仅基于肿瘤的发生发展机制及绝经后妇女患病率明显较高这一特点。为进一步阐明子宫内膜癌的发病机制，提高该病的早期诊断率，对子宫内膜癌发病基因机制方面进行研究具有重要的意义。子宫内膜癌与其他恶性肿瘤的发生发展一样均是由多种因素共同作用的结果，其中抑癌基因的失活、表达下调是重要原因之一。

本研究中WWOX在肿瘤组织、癌旁正常组织及正常子宫内膜组织阳性表达率分别为96.55%、72.41%、53.45%(P<0.05); P53在肿瘤组织、癌旁正常组织及正常子宫内膜组织阳性表达率分别为91.38%、68.97%、56.90%(P<0.05)，与相关研究结果基本一致[7]，提示WWOX及P53均可能为子宫内膜癌的抑癌基因。虽然目前尚未有证实子宫内膜癌与WWOX基因直接相关的报道，但WWOX基因可能通过以下几方面参与子宫内膜癌的发生与发展：①参与性激素调节，研究结果显示在前列腺、卵巢等激素调节组织中WWOX均有较高的表达。另有研究发现早期卵巢癌患者存在明显的WWOX基因改变，随着肿瘤的发展该基因缺失情况更为严重，同时该研究还发现WWOX的表达与孕激素受体呈显著的正相关关系。前文已述子宫内膜癌的发生与激素水平有着密切的关系，因而认为WWOX的表达与子宫内膜癌发生发展相关；②本研究结果显示：患者FIGO分期、分化程度、转移情况及子宫浸润深度的不同WWOX阳性率明显不同(P<0.05)，推测WWOX表达与子宫内膜癌分化、转移及疾病发展均有密切关系，可能与WWOX与P73、Ap2等多种调节细胞凋亡及信号转导的关键记忆相互作用，增强对肿瘤细胞的凋亡作用而达到抑癌的目的。P53为人类最早发现的抑癌基因之一，其在机体内除抑癌作用外科对基因进行修复，可通过下游基因编码蛋白激酶抑制剂以组织细胞周期，使细胞分裂停止同时还可促进恶性肿瘤细胞的凋亡。另外P53对于肿瘤组织周围血管生成也有明显的抑制作用，从而阻断肿瘤组织的营养供应而抑制其生长，因此在不同分化及转移情况患者中P53表达差异具有统计学意义。

综上所述，子宫内膜癌组织中WWOX及P53均呈低表达，WWOX表达与FIGO分期、分化程度、转移情况及子宫浸润深度有关，P53表达与分化程度、转移情况，在子宫内膜癌患者中WWOX与P53的表达呈显著正相关关系。