兽用抗病毒中药复方制剂抗炎机理的研究

李淑焕 薄永恒 （山东农业工程学院食品科学与工程学院 济南 250100 ②山东省兽药质量检验所 山东省畜产品质量安全监测与风险评估重点实验室 济南）

本着绿色环保需求，按照中药严密组方原则和中兽医理、法、方、药中独特的“异病同治”的治疗原则，制备了一种中药复方制剂。本制剂是由板蓝根、大青叶等多味中药组成，主要治疗禽的传染性支气管炎。由于病毒病与炎症的密切联系，前期已对本中药复方进行了靶动物临床实验以及实验室抗炎药理实验，治疗效果显著，为探究其抗炎机理，本实验以小白鼠跖肿胀炎症模型为主，测定了相关炎症因子水平。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要药品与试剂 中药复方制剂(由板蓝根、大青叶等多味中药组成)由中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所研制；三氯乙酸、1%角叉菜胶，正丁醇、硫代巴比妥酸、氢氧化钾、甲醇，均为分析纯。

1.1.2 试验动物 18～22g健康昆明鼠，购于中牧集团动物房。

1.1.3 主要试验仪器 AL204精密电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)、UV-120-02型紫外-可见分光光度计(日本岛津仪器有限公司)、Cary Eclipse荧光分光光度计(美国瓦里安公司)、DNM-9602G型酶标仪(北京普朗新技术有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 小鼠足跖肿胀炎症模型制作[1]取健康昆明小鼠，随机分为4组，每组10只，雌雄各半，分开饲养，分别为中药复方制剂灌胃高剂量组(16g/kg)、中药复方制剂灌胃低剂量组(8g/kg)、模型组。其中模型组每次注射与制剂等体积生理盐水，连续4d。最后一次给药0.5h后，每只小鼠右后足足坏皮下注射1%角叉菜胶0.03m1致炎，4h后拉颈处死小鼠，齐踝关节切下两后足分别精确称重。

1.2.2 小鼠炎性组织中中PGE2含量的测定[2]在上述角叉菜胶所致小鼠足跖肿胀实验中处死小鼠，齐踝关节切下炎足，剥皮后浸于装有2.5ml生理盐水的试管中，充分振荡，2h后取出炎足，将浸泡液在离心机上3000rpm离心15min；取上清液0.5mI，加入到2m1 0.5mol/L KOH-甲醇溶液中，在50℃水浴中异构化20min；水浴后加甲醇至5m1进行稀释，在分光光度计278nm处测紫外吸收，以吸光度表示溶液中PGE2含量，OD278与质量的换算公式如下：CPGE2(µg/g)=A×13.31×D×V/炎足重(V=PGE2溶液体积，D：稀释倍数)。

1.2.3 小鼠炎性组织中血清溶菌酶含量的测定在上述角叉菜胶所致小鼠足跖肿胀实验中处死小鼠前眼眶取血，离心，取血清，-20℃保存待测，测定方法按南京建成试剂公司血清溶菌酶检测试剂盒测定方法测定。

1.2.4 小鼠炎性组织中丙二醛(MDA)[3]及血清中一氧化氮(NO)[4]含量的测定 在上述角叉菜胶所致小鼠足跖肿胀实验中处死小鼠前眼眶取血，离心，取血清，用Griess试剂法测血清中一氧化氮的含量；将上述角叉菜胶所致小鼠足跖肿胀试验中小鼠炎足剪碎放置于0.45ml20%的三氯醋酸(TCA)中浸泡，4h后弃炎足，加入0.1mo1/L盐酸1ml，1%的硫代巴比妥酸(TBA)0.55ml，充分混匀，90～95℃水浴中保温15min，然后加2ml生理盐水稀释，3000r/min离心5min，取上清液于532 nm处测吸光度值，计算MDA含量。

1.2.5 小鼠炎性组织中组胺(histamine)和5-色胺(5-TH)含量的测定[5]将上述角叉菜胶所致小鼠足跖肿胀试验中小鼠炎足划破皮肤组织后浸泡于酸化正丁醇4.0ml中4h，超声处理20min，按荧光分光光度法测组胺、5-色胺的含量。

2 结果

2.1 小鼠炎性组织中PGE2含量

结果(表1)表明，中药复方制剂高剂量组与模型组相比较差异不显著(P＞0.05)，中药复方制剂低剂量组与模型组相比较差异不显著(P＞0.05)，说明中药复方制剂对炎足中的PGE2的释放没有显著的影响。

表1 中药复方制剂对角叉菜胶所致小鼠足跖肿胀炎性组织中PGE 含量

2.2 小鼠炎性组织中血清溶菌酶含量

结果(表2)表明，中药复方制剂高剂量组与模型组组相比较差异显著(P＞0.05)，中药复方制剂低剂量与模型组组相比较差异不显著(P＞0.05)，说明中药复方制剂不能明显抑制致炎后血清溶菌酶的释放。

表2 中药复方制剂对血清溶菌酶含量的影响

2.3 小鼠炎性组织中丙二醛(MDA)[3]及血清中一氧化氮(NO)[4]含量

结果(表3)表明，中药复方制剂在8g/kg剂量下能显著抑制炎性组织中MDA及血清NO的释放，而高剂量对炎性组织中MDA及血清NO的释放抑制不明显。

表3 中药复方制剂对炎性组织中MDA及血清NO含量的影响

2.4 对小鼠炎性组织中组胺(histamine)和5-色胺(5-TH)含量的测定[5]

结果(表4)表明，中药复方制剂在高剂量(16g/kg)下能显著抑制炎性组织中组胺的释放，低剂量对炎性组织中组胺的释放抑制不明显；中药复方制剂能显著抑制炎性组织中5-色胺的释放，且以高剂量为优。

表4 中药复方制剂对炎性组织中组胺和5羟色胺含量的影响

3 讨论

（1）中药复方制剂是一种抗病毒新兽药，它在禽传染性支气管炎的预防与治疗中有良好的效果。而炎性反应是最基本的病理过程和机体对损伤性刺激最原始的保护性反应，也是许多不同类型疾病的一个共同的病理基础，包括生物性(感染、超敏反应等)、化学性及物理性等病因性疾病[6]。（2）研究表明中药复方制剂具有抗氧化能力，清除氧自由基，减少丙二醛的释放，避免机体损伤；可以抑制细胞释放的血管活性胺类炎性介质—组胺、5-色胺的释放，从而减少毛细血管通透性的增加；明显抑制血清中一氧化氮的过量释放，减少了它的细胞毒作用；而对溶菌酶的释放以及肾上腺素E2的释放无抑制作用。研究结果提示，中药复方制剂抗炎机制与抑制炎性组织中丙二醛、组胺、5-色胺及血清中一氧化氮的释放有关。