宣痹通瘀胶囊对异丙肾上腺素诱发大鼠心肌缺血的影响❋

刘迎辉，李双娣，隋永朋，李洪禹，刘爱东

(1.长春中医药大学，长春 130017；2.长春中医药大学附属医院，长春 130021； 3.长春中医药大学附属第三临床医院，长春 130117)

冠心病又被称为缺血性心脏病，是因冠状动脉粥样硬化导致血管腔变窄或阻塞，或因为冠状动脉发生功能性改变而导致心肌缺血、缺氧甚或坏死而引起的心脏病，属于中医学胸痹心痛范畴[1]。宣痹通瘀胶囊是国家级名中医、著名心血管专家黄永生教授的临床经验方,为治疗气滞血瘀型冠心病心绞痛的中药复方制剂，其临床疗效显著。本实验通过腹腔注射大剂量异丙肾上腺素注射液(ISO)诱发大鼠心肌缺血模型，通过观察大鼠心电图ST段变化，天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性变化及心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量变化，评价宣痹通瘀胶囊抗心肌缺血的作用，为临床治疗缺血性心脏病提供实验依据。

1 实验材料

1.1 实验动物

SPF级Wistar大鼠共计60只，雌雄各半，体质量200～220 g，购自长春亿斯实验动物技术有限责任公司(资格证号SCXK-(吉)2011-0004)。

1.2 药物、主要试剂及仪器

宣痹通瘀胶囊由长春中医药大学附属医院实验研究中心提供，每粒胶囊含生药4.03 g(批号20141201)；通心络胶囊由石家庄以岭药业股份有限公司生产，每粒胶囊含生药0.26 g(批号国药准字Z19980015)；ISO注射液(上海禾丰，批号41140601)；AST测定试剂盒(批号151261)、CK测定试剂盒(批号150911)、LDH测定试剂盒(批号150211)均由中生北控有限公司生产；SOD酶联免疫试剂盒(美国R&D Systems Inc，批号20160508 A)；MDA检测试剂盒(南京建成，批号20141015)；生理信号采集系统(澳大利亚埃德)；全自动生化分析仪(荷兰威图)；酶标仪(美国伯乐)；可调高速匀浆机(江苏荣华)；台式高速低温离心机(德国贺利氏)。

2 方法

2.1 动物分组及给药

实验动物适应性饲养1周后，按随机数字表法分为空白组、模型组、阳性对照组、宣痹通瘀高、中、低剂量组6组各10只，雌雄各半。给药前将宣痹通瘀胶囊内容物用0.5%羧甲基纤维素钠(CMC)配制成31.08 g/100 mL、15.54 g/100 mL和7.77 g/100 mL 3个浓度的悬液，通心络胶囊内容物用0.5%CMC配制成2.4 g/100 ml的悬液。对照组和宣痹通瘀各剂量组均按照10 ml/kg/次灌胃，每日1次，连续10 d。空白组和模型组均给予等体积的0.5%CMC悬液灌胃。

2.2 指标检测

末次给药后1 h，将大鼠用20%乌来糖经腹腔注射麻醉，固定于鼠板上，记录一段正常标准Ⅱ导联心电图。随后，除空白组动物腹腔注射生理盐水4 ml/kg外，其余各组动物均腹腔注射ISO 2 mg(4ml)/kg。记录各组注射后第1、3、5、10和30 min的肢体标准Ⅱ导联心电图。记录心电图后，经腹主动脉取血，3000rmp离心10 min分离血清。按试剂盒说明书操作要求测定血清AST、CK和LDH活性；取心脏制作心肌组织匀浆，3000 rmp离心15 min取上清液，测定心肌组织中MDA含量及SOD活性[2-3]。

2.3 统计学方法

3 结果

3.1 大鼠心电图ST段表达比较

表1显示，在腹腔注射ISO前各组动物的心电图ST段呈正态均匀分布，各组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。注射ISO后，除空白组外其他各组心电图ST段均有不同程度上移。在注射ISO后的各测试时间点，模型组大鼠心电图ST段上移幅度均明显高于空白组(P<0.05或P<0.01)，表明动物造模成功；宣痹通瘀高剂量组动物心电图ST段上移幅度均明显低于模型组(P<0.05或P<0.01)，表明用药有效。宣痹通瘀中、低剂量组的起效时间分别为注射ISO后3 min，以及注射ISO后5 min和10 min。对照组在注射ISO 3 min以后的各测试时间点、心电图ST段上移幅度明显低于模型组(P<0.05或P<0.01)。

表1 大鼠心电图ST段表达比较

注:与空白组比较：#P<0.05，##P<0.01；与模型组比较:*P<0.05，**P<0.01

3.2 各组大鼠血清心肌三酶活性、心肌SOD活性及MDA含量表达比较

表2显示，模型组动物血清心肌三酶(AST、CK、LDH)的释放量明显高于空白组(P<0.05或P<0.01)，而心肌组织中MDA含量明显高于空白组(P<0.05)，SOD活性明显低于空白组(P<0.01)，表明已经形成心肌缺血性损伤。宣痹通瘀高、中剂量组和对照组大鼠血清心肌三酶AST、CK和LDH的活性均明显低于模型组，心肌组织中MDA含量明显低于模型组，SOD活性均高于模型组，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)；宣痹通瘀低剂量组与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)，但有降低心肌三酶和MDA含量、增强SOD活性的趋势。

4 讨论

宣痹通瘀胶囊由6味中药构成，分别为延胡索(酒炙)、三七、川芎、郁金、人参、冰片。方中延胡索为君药，能行血中之气滞，气中之血滞，具有活血行气止痛之功[4]；三七、川芎、郁金三药共为臣药，助君药活血行气、化瘀止痛；方中人参有佐助和佐制之功，既可补气生血又能固护正气，还能防止君臣药因行气化瘀克伐太过而耗伤正气[5]；冰片善于走散，在方中亦为佐药，具有散气、散血、散火、散滞、通窍等功效[6]。在传统治疗胸痹心痛的组方中，往往着重于活血行气止痛，未兼顾到胸痹心痛实属本虚标实之证。而本方针对本病“虚气留滞”的病机特点，取其“邪盛难掩本虚”之本义，治标勿忘固本[7]。其组方优势，一是活血化瘀之药与行气导滞之品相配伍，可解血分、气分之瘀滞；二是行气之品与补气之药相伍，祛邪不忘扶正，使活血而不耗气，行气之又不伤及阴液；三是辛散有路,在活血行气的同时给邪以出路，使气机升降平和,气血运行调顺。本实验研究所选用的对照药物是与宣痹通瘀胶囊的功效、主治相近、药物剂型及给药途径相似的通心络胶囊，是吴以岭院士在其脉络学说理论指导下研制的治疗冠心病心绞痛的临床常用药物，具有益气活血、通络止痛之功效[8]。本实验结果显示，宣痹通瘀胶囊高剂量组的治疗效果优于通心络胶囊，宣痹通瘀胶囊中剂量组的治疗效果与通心络胶囊接近，宣痹通瘀胶囊低剂量组的治疗效果不及通心络胶囊。

表2 各组大鼠血清心肌三酶活性、心肌SOD活性及MDA含量表达比较

注:与空白组比较：#P<0.05，##P<0.01；与模型组比较:*P<0.05；**P<0.01

本实验采用腹腔注射 ISO诱发大鼠心肌缺血模型，这种造模方法与其他心肌缺血的动物造模方法比较，具有简单有效、成本低、可重复性强的优点，而且其病理改变非常类似人类急性心肌缺血的病变特征，是目前关于心肌缺血实验研究中常用的造模方法[9]。心电图ST段在等电位线上抬高程度与心肌缺血损伤程度呈正相关。同时在心肌缺血缺氧的情况下，细胞膜通透性增强导致心肌酶外漏，其中AST、CK、LDH 3种心肌酶释放最为明显，其释放量与心肌损伤、缺血缺氧程度呈正比。

研究表明，氧自由基增加是导致心肌发生缺血损伤的重要机制之一。SOD是生物体内重要的抗氧化酶，是清除氧自由基的首要物质。MDA可以反映脂质过氧化的程度，心肌发生缺血性损伤后，SOD的活性下降，清除氧自由基的能力下降，引起心肌细胞内氧自由基含量增多，导致细胞膜脂质进一步过氧化，过氧化代谢产物MDA含量增加，引起心肌细胞发生严重损伤[10-11]。此外相关研究表明，氧自由基可以激化细胞的氧化应激反应，进而导致细胞凋亡。当氧自由基处于低浓度时可以诱使细胞发生凋亡，而当氧自由基处于高浓度时则可导致细胞坏死。心肌细胞凋亡参与心肌缺血梗死的各个阶段，且细胞凋亡的程度直接决定心肌梗死的程度[12-16]。本实验验证了宣痹通瘀胶囊通过预防性给药，能够抑制动物心电图ST段的异常抬高，减少血清心肌三酶释放入血量，增强 SOD活性，降低 MDA含量，减轻心肌损伤程度，其治疗效果与用药呈正相关的量效关系，其作用机制可能与其能够调节能量代谢、减少自由基生成、进而阻断细胞凋亡有关，但具体的作用机制尚需进一步的研究探索。