肺癌组织中P65、CYFRA21-1、vimentin蛋白的表达情况及与临床特征的关系

高芸菲，杨婧，孔曼

首都医科大学附属北京潞河医院肿瘤科，北京101149

对肺癌细胞的细胞生物学改变过程进行探究，可以发现肿瘤调控相关因子或蛋白的波动能够通过多种病理途径促进肺泡上皮细胞的病变，从而提高肺癌的发生风险[1-2]。P65蛋白是核转录因子信号通路的重要效应因子，通过促进肿瘤细胞的持续性DNA扩增，增加肺泡上皮细胞细胞核DNA异常分裂的风险[3]；细胞角质蛋白19片段抗原21-1（cyto-keratin 19 fragment antigen 21-1，CYFRA21-1）的表达，能够通过提高肿瘤细胞的变形能力，促进肿瘤细胞的浸润和侵袭，进而促进肺癌的发生和转移[4]；波形蛋白（vimentin）的表达，通过提高肿瘤细胞对基底膜组织的浸润能力，增加了肿瘤细胞的转移能力，进而促进肺癌的进展[5]。为了揭示P65、CYFRA21-1、vimentin的表达与肺癌的关系，为临床上肺癌的诊疗提供理论基础，本研究对肺癌患者P65、CYFRA21-1、vimentin蛋白的表达情况及与肺癌患者临床特征的关系进行探讨，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2016年1月至2017年1月首都医科大学附属北京潞河医院收治的肺癌患者的病历资料。纳入标准：①临床资料完整；②经组织学或细胞学检查确诊为原发性肺癌；③术前未接受放化疗。排除标准：①伴有心、肝、肾等主要脏器功能不全或急慢性炎症；②合并其他部位恶性肿瘤；③妊娠期和哺乳期女性；④伴有免疫系统疾病。根据纳入和排除标准，本研究共纳入60例肺癌患者，其中男性40例，女性20例；年龄为36～79岁，平均年龄为（55.56±9.12）岁；腺癌28例，鳞癌20例，小细胞肺癌10例，未定性肺癌2例；按国际抗癌联盟（Union for International Cancer Control，UICC）分期系统[6]进行TNM分期：Ⅰ期5例，Ⅱ期8例，Ⅲ期15例，Ⅳ期32例；低分化31例，中分化20例，高分化9例。收集所有患者的肺癌组织标本及其对应的癌旁组织标本各60例。

1.2 检测方法

采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法（streptavidin-perosidase，SP）检测肺癌组织和癌旁组织中P65、CYFRA21-1、vimentin蛋白的表达情况。石蜡包埋后，采用连续性病理切片，脱蜡至水后采用H2O2室温下孵育10 min，磷酸盐缓冲液冲洗3次，每次3～5 min，8%的蛋白粉封闭液封闭2 h，弃去封闭液后加入一抗[兔来源，1∶（1000～1500）]，4℃冰箱过夜，磷酸盐缓冲液冲洗3次，每次 3～5 min，加入二抗[鼠来源，1∶（400～500）]，室温孵育 20～30 min，磷酸盐缓冲液冲洗 3次，每次3～5 min，加入辣根酶或碱性磷酸酶的标志物，室温孵育10 min，磷酸盐缓冲液冲洗3次，每次3～5 min，滴加显色剂（DAB），复染，脱水，封片。

1.3 判定标准

以细胞膜内出现棕黄色颗粒为阳性染色，综合阳性细胞占肿瘤细胞的比例和着色强度进行半定量判定。P65、CYFRA21-1、vimentin蛋白表达着色强度判定标准：不着色为0分；浅黄色为1分；黄棕色为2分；棕褐色为3分。阳性细胞占肿瘤细胞的比例判定标准：选择5～10个高倍视野，计算1000个肿瘤细胞中阳性细胞所占比例，阳性细胞所占比例＜5%为0分；5%～25%为1分；26%～50%为2分；51%～75%为3分；＞75%为4分。两种评分相加，最终结果0～1分为阴性（-）；2分为弱阳性（+）；3～4分为强阳性（++）；5～7分为极强阳性（+++）；本研究将强阳性和极强阳性归为阳性表达，阴性和弱阳性归为阴性表达。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0统计软件对数据进行分析。计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验；等级资料比较采用Wilcoxon秩和检验；计量资料以均数±标准差（±s）表示。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 P65、CYFRA21- 1、vimentin蛋白表达情况的比较

肺癌组织和癌旁组织中P65、CYFRA21-1、vimentin蛋白的表达情况比较，差异均有统计学意义（P＜0.01）（表1）；肺癌组织中P65、CYFRA21-1、vimentin蛋白的阳性表达率均明显高于癌旁组织，差异均有统计学意义（P＜0.01）（表2）。

表1 不同组织中 P65、CYFRA21- 1、vimentin蛋白表达情况的比较

表2 不同组织中 P65、CYFRA21- 1、vimentin蛋白阳性表达情况的比较

2.2 肺癌组织中P65、CYFRA21- 1、vimentin蛋白表达与肺癌患者临床特征的关系

不同临床分期、淋巴结转移情况肺癌患者肺癌组织中P65蛋白表达情况比较，差异均有统计学意义（Z=-3.411、-3.791，P＜0.01）。不同临床分期肺癌患者肺癌组织中CYFRA21-1蛋白表达情况比较，差异有统计学意义（Z=-4.07，P＜0.01）；但不同淋巴结转移情况肺癌患者肺癌组织中CYFRA21-1蛋白表达情况比较，差异无统计学意义（Z=-0.415，P=0.678）。不同临床分期、淋巴结转移情况肺癌患者肺癌组织中vimentin蛋白表达情况比较，差异均有统计学意义（Z=-4.024、-3.427，P＜0.01）（表3）。临床分期为Ⅲ～Ⅳ期的肺癌患者肺癌组织中P65、CYFRA21-1、vimentin蛋白阳性表达率均明显高于临床分期为Ⅰ～Ⅱ期的患者，差异均有统计学意义（χ2=6.597、16.362、9.467，P＜0.01）。有淋巴结转移的肺癌患者肺癌组织中P65蛋白和vimentin蛋白阳性表达率均高于无淋巴结转移的患者，差异均有统计学意义（χ2=6.686、9.467，P＜0.05）；不同淋巴结转移情况肺癌患者肺癌组织中CYFRA21-1蛋白阳性表达率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）（表4）。

表3 不同临床特征肺癌患者肺癌组织中 P65、CYFRA21- 1、vimentin蛋白的表达情况[ n=60， n（%）]*

表4 不同临床特征肺癌患者肺癌组织中 P65、CYFRA21- 1、vimentin蛋白的阳性表达情况[ n=60， n（%）]

3 讨论

长期吸烟、家族性肺癌病史等，均能够促进肺泡上皮细胞的细胞核异常病变，增加肺癌的发生风险，尤其是年龄大于65岁的长期吸烟男性人群，其肺癌的发生风险更高[7]。长期的随访观察发现，肺癌患者接受综合性治疗方案治疗后，5年生存率不足40%，远期复发率和转移率均明显增高[8]。免疫靶向性治疗在肺癌的辅助治疗过程中发挥着重要作用。本研究针对肺癌组织中P65、CYFRA21-1、vimentin蛋白的表达情况及其与肺癌患者临床特征的关系进行探讨，旨在为肺癌患者的血清学病情评估提供参考，为肺癌患者的免疫靶向性治疗提供作用靶点。

P65蛋白通过对糖蛋白末端进行磷酸化修饰，可以促进肿瘤细胞内核因子-κB（nuclear factorkappa B，NF-κB）信号通路的激活，提高肿瘤细胞DNA的复制速度[9]；CYFRA21-1是肿瘤细胞的骨架成分，其能够增加肿瘤细胞纺锤体异常分裂的风险[10-11]；vimentin作为细胞间质成分蛋白，能够促进肿瘤细胞间质成分的分解，降低上皮细胞间的黏附能力，促进肿瘤细胞的转移和扩散[12]。本研究结果显示，肺癌组织中P65、CYFRA21-1的阳性表达率均明显高于癌旁组织（P＜0.01），提示P65、CYFRA21-1的阳性表达均能够促进肺癌的发生。结合相关文献，P65、CYFRA21-1对肺癌发生的促进作用有以下几点[13]：①P65阳性表达能够导致肿瘤细胞内NF-κB信号通路的激活，造成局部肿瘤微环境的改变，增加了细胞的畸变风险；②CYFRA21-1表达水平的升高，能够促进肿瘤细胞形态学的改变，增加肿瘤细胞的异型性，提高肿瘤细胞对正常肺组织的浸润能力。段新春等[14]研究表明，相对于癌旁肺部组织，肺癌组织中CYFRA21-1蛋白的阳性表达率明显增高。在探讨P65、CYFRA21-1的表达与肺癌患者临床特征的关系中，可以发现在临床分期较晚或发生淋巴结转移的患者中，P65的阳性表达率较高，而CYFRA21-1的表达与肺癌患者的临床分期也有密切的关系，提示P65、CYFRA21-1的表达与肺癌患者的临床特征密切相关。在探讨vimentin的表达与肺癌患者关系的过程中发现，相对于癌旁肺部组织，肺癌组织中vimentin的阳性表达率明显增高，同时在临床分期较晚、有淋巴结转移的患者中，vimentin的表达水平进一步上升[15]。其临床意义在于临床上可以通过检测vimentin等标志物水平，进而评估肺癌患者的疾病进展情况。

综上所述，在肺癌患者中，P65、CYFRA21-1、vimentin蛋白的阳性表达率较高，同时P65、CYFRA21-1及vimentin的阳性表达情况与肺癌患者的临床分期、淋巴结转移情况有关。但本次研究缺乏对于P65、CYFRA21-1及vimentin的表达与肺癌患者临床预后的关系分析，故仍存在一定的局限性。