高效液相色谱法测定天力通片中天麻素含量

王 欣 ，李 兵 ，唐 坤,

（1.中国医学科学院 北京协和医学院 药用植物研究所，北京 100193；2.北京昌威科技有限公司，北京 100085）

天力通片是由天麻、人参等多味名贵药材制成的保健食品，具有缓解疲劳功能，主要适宜于易疲劳者。天麻为天力通片的主要原料，研究表明天麻中所含的天麻素是缓解疲劳的活性成分[1-2]。本实验建立了高效液相色谱法测定天力通片中活性成分天麻素含量的方法，并进行了方法学研究，为同类产品中天麻素的含量测定提供参考。

1 仪器与试药

Waters 2690液相色谱仪（996 PDA检测器，美国沃特世公司），赛多利斯SQP型十万分之一电子天平（德国Sartorius），ELGA/超纯水器（美国PURELAB Classic），KQ-700DE数控超声波清洗器型号（昆山市超声仪器公司）。

天麻素对照品（中国食品药品检定研究院，批号110807-201608，含量：97.6 %）；乙腈（色谱纯） ；磷酸（优级纯）；天力通片（批号：20170501，20170502，20170503，由北京昌威科技有限公司提供）

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Waters Symmetry C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.05 %磷酸溶液（1:99），流动相临用前以微孔滤膜过滤并经超声脱气处理；流速：1.0 ml/min；检测波长：220 nm；柱温：25 ℃；进样体积：10 μl。

系统适用性试验：理论塔板数（以天麻素对照品溶液峰计算）不低于5000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取天麻素对照品10 mg，加流动相溶解并稀释至20 ml，摇匀，制得每1 ml含天麻素0.5 mg对照品储备液。精密量取储备液1 ml，置入10 ml量瓶，加流动相稀释至刻度，制得每1 ml含天麻素50 μg对照品溶液。

图1 天麻素测定专属性试验HPLC图谱

2.2.2 供试品溶液的制备 取样品研成细粉（过三号筛），精密称取过筛细粉2.00 g，置具塞锥形瓶中，精密加入50 %稀乙醇50 ml，称定重量，超声处理（功率120 W，频率40 kHz）30 min，放至室温，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液10 ml，浓缩至近干，加乙腈-0.05 %磷酸溶液（1:99）混合溶液溶解，全部转移至25 ml量瓶中，用乙腈-0.05 %磷酸溶液（1:99）混合溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性 参照天力通片的配方和工艺，制备不含天麻的阴性样品，按2.2.2项下的方法制成阴性样品溶液。分别取对照品溶液、样品溶液和阴性样品溶液按2.1色谱条件分别进样测定，结果见图1。结果表明，样品中其他成分对测定没有干扰，方法具有较强的专属性。

2.3.2 稳定性 取同一供试品溶液，在0，2，4，6，8，10，12 h，按2.1项色谱条件进样10 μl，测得天麻素峰面积RSD为0.56 %（n=7），结果表明，样品溶液至少在12 h内稳定。

2.3.3 线性 分别精密量取2.2.1项下天麻素对照品溶液2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，8.0，10.0，12.0 μl进样，按2.1项下色谱条件，测定峰面积。以天麻素进样量（X，μg）为横坐标，以峰面积值（Y）为纵坐标，得线性回归方程Y=569 027X-9382.1（r=0.9993），表明天麻素进样量在0.1～0.6 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.3.4 精密度 取2.2.1项下浓度为50 μg/ml天麻素对照品溶液，在2.1项下色谱条件连续进样6次，测定峰面积。连续6次进样的峰面积RSD值为0.43 %。结果表明，仪器精密度良好。

2.3.5 重复性 取供试品，按2.2.2项下方法平行制备6份供试品溶液，按2.1项下色谱条件测定。结果，样品中天麻素平均含量为7.08 mg/g，RSD值为2.37 %（n=6），表明该方法的重复性良好。

2.3.6 检测限和定量限 将2.2.1项下天麻素对照品溶液，按不同比列进行稀释，进样量10 μl，当信噪比（S/N）为3:1时，天麻素对照品溶液浓度为0.25 μg/ml，检测限为2.50 ng；当信噪比（S/N）为10:1时，天麻素对照品溶液浓度为0.42 μg/ml，定量限为4.20 ng。

2.3.7 回收率 取已知天麻素含量（7.00 mg/g）的样品6份，每份1.00 g，精密称定，置锥形瓶中，分别加入对照品适量，按2.2.2项下供试品溶液的制备方法处理，进样量10 μl，测定天麻素的回收率。结果经加样回收率试验测定，样品中天麻素的回收率范围为96.39 %～100.40 %，平均值为98.70 %，RSD为1.36 %（表 1），结果回收率良好。

表1 天麻素加样回收实验结果（n=6）

2.4 样品测定

按上述色谱条件，检测3批天力通片样品中天麻素的含量，结果3批样品天麻素含量的平均值是6.92 mg/g，RSD值为0.928 %（表2）。结果表明，本产品天麻素的测定方法适用、可控、稳定。

表2 3批样品中天麻素的含量测定结果

3 讨论

天麻为天力通片配方中主要原料，天麻素（gastrodin，对羟基苯甲醇-β-D-吡喃葡萄糖苷）是天麻的主要化学成分，也是天麻活性成分中含量最高的单体成分。现代药理研究表明，天麻素能增强小鼠抗疲劳能力[3-4]，2015年版《中国药典》将天麻素作为天麻质量控制的主要功效成分指标[5]，因此本文选择天麻素作为天力通片的主要标志性成分。

色谱条件的流动相参考2015年版《中国药典》中天麻素含量测定所使用的流动相，但2015年版《中国药典》所使用的流动相为乙腈-0.05 %磷酸溶液（3:97），对本产品中天麻素峰和相邻色谱峰之间的分离效果不太理想。根据文献报道，天麻素含量测定的流动相有：乙腈-0.03 %磷酸溶液（1:99)[6]、乙腈-0.05 %磷酸溶液（3:97）[5]、乙腈-0.05 %磷酸溶液（2:98）[7]，经本实验摸索比较后得出乙腈-0.05 %磷酸溶液（1:99）时，峰形好，基线稳定，分离效果最佳。因此以乙腈-0.05 %磷酸溶液（1:99）作为天力通片测定天麻素的最佳流动相。

方法学考察结果表明， 本实验建立的HPLC法可准确测出天力通片中天麻素的含量，此方法操作简便、重现性好、专属性强，因此可作为天力通片及其同类产品中天麻素含量测定方法学研究提供参考。