金橘不同提取物对小鼠胃排空和小肠推进功能的影响

黄华花，陈景海，徐晶晶，王圣江，林亚珠

（1.厦门医学院 福建省中药精加工与健康产品开发重点研究室，福建 厦门 361023；2.厦门市妇幼保健院 中药房，福建 厦门 361003）

金橘又名金桔、山橘、金枣、金柑、金弹等，是芸香科植物，常以果实入药。其性温，味辛、甘，具理气解郁、消食化痰、醒酒之功效，主胸闷郁结、脘腹痞胀、食滞纳呆、咳嗽痰多、伤酒口渴[1]。金橘药食同源，除鲜食外，还加工成蜜饯、罐头、糕点、果汁、饮料等[2]，并已开发成具有保健功能的咸金枣、金栆丹，具有健脾胃、助消化、去痰下气、理气醒酒等功效，在东南亚一带久负盛名[3]。为了阐明金橘对胃肠道的影响情况，探讨其作用机制，为其深度开发提供实验依据，本实验考察了金橘水提、醇提液对正常状态、阿托品所致的抑制模型和新斯的明所致的亢进模型小鼠胃排空和小肠推进功能的影响[4-7]。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Nanogenius超微量光谱分析仪（上海美谱达）；TDL-60B台式离心机（上海安亭）；KQ5200E型超声波清洗器（昆山市超声仪器公司）；BSA822-CW电子天平（德国Sartorius公司）；CP124C电子天平[奥豪斯仪器（上海）公司]。

1.2 药品与试剂

金橘购自福建省三明市尤溪县管前镇，由厦门医学院鲍红娟副教授鉴定为Fortunella margarita(Lour.) Swingle；枸橼酸莫沙必利片（江苏豪森药业，批号171205）；硫酸阿托品注射液（天津金耀药业，批号1802061）；甲硫酸新斯的明注射液（上海信谊金朱药业，批号1710503）；明胶，乙醇（国药集团），氢氧化钠（西陇科学），酚红（天津光复精细化工研究所），均为分析纯。

1.3 实验动物及饲养条件

SPF级KM小鼠，雌雄各半，18～22 g，合格证号SCXK（京）2014-0004，由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，饲养于SPF级实验动物房。实验动物使用许可证号SYXK（闽）2013-0006。

2 方法

2.1 药物配制

2.1.1 金橘水提液的制备 取金橘50 g，粉碎，加蒸馏水500 ml，煎煮2 h，滤过，滤渣再加蒸馏水250 ml，煎煮1 h，滤过，合并滤液，浓缩至100 ml，得每1 ml相当于0.5 g金橘的药液，作为储备液。给药前稀释成最终浓度分别为0.03，0.06，0.12 g/ml的药液。

2.1.2 金橘醇提液的制备 取金橘50 g，粉碎，加75 %乙醇500 ml，回流提取2次，每次1 h，滤过，合并滤液，回收乙醇至浸膏状，加水配制成每1 ml相当于0.5 g金橘的药液，作为储备液。给药前稀释成最终浓度分别为0.03，0.06，0.12 g/ml的药液。

2.2 对正常状态小鼠胃排空、小肠推进的影响

取小鼠96只，雌雄各半，随机分为8组，分别为空白组、莫沙必利2.14 mg/kg组、金橘水提液0.625，1.25，2.5 g/kg 3个剂量组、金橘醇提液0.625，1.25，2.5 g/kg 3个剂量组。各给药组灌胃给予相应的药物溶液20 ml/kg，每日1次，连续3日，空白对照组给予等容积的蒸馏水。第3日给药前禁食12 h，给药后2 h，灌服酚红溶液0.25 ml/只。20 min后处死。同时取出胃和小肠，测量小肠内酚红所达距离和小肠全长；将胃剪开，置于30 ml 0.5 mol/L 氢氧化钠溶液中，洗下内容物，取5 ml离心（3000 r/min，10 min），取上清，560 nm处测吸光度（A）。按下式计算胃酚红排空率（gastric emptying rate，GER）和小肠推进率（small intestinal propulsiverate，SIPR）。

式中A0为0.25 ml 0.04 %酚红溶液加入30 ml 0.5 mol/L氢氧化钠溶液中所测得的吸光度。

2.3 对阿托品所致小鼠胃排空、小肠推进抑制的影响

取小鼠108只，雌雄各半，随机分为9组，分别为空白组、阿托品0.1 mg/kg模型组、莫沙必利2.14 mg/kg组、金橘水提液0.625，1.25，2.5 g/kg 3个剂量组、金橘醇提液0.625，1.25，2.5 g/kg 3个剂量组。各给药组灌胃给予相应的药物溶液，20 ml/kg，每日1次，连续3日，空白对照组给予等容积的蒸馏水。第3日给药前禁食12 h，给药后1.75 h除空白组外，各组皮下注射阿托品0.1 mg/kg，15 min后灌服酚红溶液，20 min后处死。按2.2项方法分别测量，计算GER和SIPR。

2.4 对新斯的明所致小鼠胃排空、小肠推进亢进的影响

取小鼠96只，雌雄各半，随机分为8组，分别为空白组、新斯的明0.1 mg/kg模型组、金橘水提液0.625，1.25，2.5 g/kg 3个剂量组、金橘醇提液0.625，1.25，2.5 g/kg 3个剂量组。各给药组灌胃给予相应的药物溶液20 ml/kg，每日1次，连续3日，空白对照组给予等容积的蒸馏水。第3日给药前禁食12 h，给药后1.75 h除空白组外，各组皮下注射新斯的明0.1 mg/kg，15 min后灌服酚红溶液，20 min后处死。按2.2项方法分别测量，计算GER和SIPR。

2.5 统计分析方法

数据以表示。采用SPSS 16.0进行单因素方差分析（ANOVA），并做方差齐性检验。方差齐时两两比较采用最小显著性差异（LSD）法，不齐时采用秩和检验。

3 结果

3.1 对正常状态小鼠胃排空、小肠推进的影响

结果见表1。由表1可见，与空白组比较，金橘水提液、醇提液各剂量组的胃酚红排空率没有明显变化，金橘水提液2.5 g/kg和醇提液1.25，2.5 g/kg剂量下小鼠的小肠推进率明显提高（P＜0.05或P＜0.01），表明金橘水提、醇提液对正常状态小鼠胃排空功能无明显影响，但能加快正常状态小鼠的小肠推进。相同剂量下水提液和醇提液对正常小鼠胃酚红排空率和小肠推进率影响的差异无统计学意义。

表1 金橘提取物对正常状态小鼠胃排空、小肠推进的影响（，n=12）

表1 金橘提取物对正常状态小鼠胃排空、小肠推进的影响（，n=12）

注：**P＜0.01，*P＜0.05 vs 空白组

组别 剂量/g·kg-1 GER/% SIPR/%空白组 - 61.37±9.03 49.42±6.49莫沙必利 2.14×10-3 73.52±7.18** 63.23±8.35**金橘水提液0.625 62.47±7.45 52.24±6.20 1.25 61.80±8.71 54.72±10.40 2.5 63.49±11.15 57.58±7.69*金橘醇提液0.625 59.14±8.98 52.36±5.23 1.25 63.81±6.45 57.53±9.83*2.5 62.81±10.86 61.04±5.64**

3.2 对阿托品所致小鼠胃排空、小肠推进抑制的影响

结果见表2。由表2可见，与模型组比较，金橘水提液和醇提液1.25，2.5 g/kg剂量下小鼠的胃酚红排空率明显提高（P＜0.05或P＜0.01），金橘水提液2.5 g/kg和醇提液1.25，2.5 g/kg剂量下小鼠的小肠推进率明显提高（P＜0.01），表明金橘水提、醇提液均可对抗阿托品所致小鼠胃排空的抑制和小肠推进的抑制。相同剂量（1.25 g/kg）下水提液和醇提液对阿托品所致小鼠胃酚红排空率的影响及相同剂量下水提液和醇提液对阿托品所致小鼠小肠推进率的影响差异有统计学意义（P＜0.05）。

表2 金橘提取物对阿托品所致小鼠胃排空、小肠推进抑制的影响（，n=12）

表2 金橘提取物对阿托品所致小鼠胃排空、小肠推进抑制的影响（，n=12）

注：*P＜0.05，**P＜0.01 vs 模型组；∆P＜0.05 vs 金橘水提液1.25 g/kg剂量组；‡P＜0.05 vs 金橘水提液2.5 g/kg剂量组

组别 剂量/g·kg-1 GER/% SIPR/%空白组 - 63.14±10.45**50.96±7.88**阿托品 1×10-4 46.96±7.67 38.41±7.91阿托品+莫沙必利 2.14×10-365.33±8.38** 51.52±6.62**阿托品+金橘水提液0.625 51.40±11.12 39.86±9.06 1.25 55.81±11.70* 43.00±9.76 2.5 62.28±7.64** 47.91±6.02**阿托品+金橘醇提液0.625 53.26±12.60 40.32±10.02 1.25 64.33±12.61**∆ 49.98±10.70**∆2.5 68.57±8.24** 55.23±7.98**‡

3.3 对新斯的明所致小鼠胃排空、小肠推进亢进的影响

结果见表3。与模型组比较，金橘醇提液2.5 g/kg剂量下小鼠的胃酚红排空率明显降低（P＜0.05），金橘水提液2.5 g/kg和醇提液1.25，2.5 g/kg剂量下小鼠的小肠推进率明显降低（P＜0.05或P＜0.01），表明金橘醇提液可拮抗新斯的明所致的小鼠胃排空加快，水提和醇提液均可拮抗新斯的明所致的小鼠小肠推进加快。相同剂量下水提液和醇提液对新斯的明所致小鼠胃酚红排空率和小肠推进率的影响差异无统计学意义。

表3 金橘提取物对新斯的明所致小鼠胃排空、小肠推进亢进的影响（，n=12）

表3 金橘提取物对新斯的明所致小鼠胃排空、小肠推进亢进的影响（，n=12）

注：*P＜0.05，**P＜0.01 vs 模型组

组别 剂量/g·kg-1 GER/% SIPR/%空白组 - 54.18±8.95** 49.06±9.67**新斯的明 1×10-4 74.44±11.61 75.06±12.27新斯的明+金橘水提液0.625 70.87±11.79 71.76±12.60 1.25 67.59±8.31 63.05±13.43*2.5 65.61±10.79* 61.99±12.01**0.625 70.92±11.86 70.01±12.49 1.25 69.39±9.47 65.97±11.24 2.5 66.61±10.11 64.20±13.68*新斯的明+金橘醇提液

4 讨论

理气药对胃肠运动功能有调节作用[8]，表现为兴奋、抑制或兴奋和抑制双向作用。胃肠运动受神经系统和体液因素的调控，与胃肠神经系统有关的神经递质、胃肠激素很多，各递质与其受体结合而发挥不同的生理功能，因此本实验以莫沙必利为阳性药物，研究金橘水提、醇提液分别对正常状态、阿托品负荷模型和新斯的明负荷模型小鼠胃排空和小肠推进的影响。

本实验以胃酚红排空率和小肠推进率为指标，研究金橘水提、醇提液对3种不同状态下小鼠胃肠道运动的影响。结果显示，金橘水提、醇提液均对正常状态小鼠胃排空功能无明显影响，但均能加快正常状态小鼠小肠推进功能；二者均可显著拮抗阿托品所致的抑制作用；二者均对新斯的明所致亢进有拮抗作用。相同剂量下对阿托品所致小鼠胃酚红排空率和小肠推进率的影响，醇提液的效果优于水提液。结果显示金橘提取物对小鼠胃排空和小肠推进具有双向调节作用，这种作用可能与胆碱能系统有关，而与肾上腺素能系统和其他胃肠激素有无关系还有待于进一步的研究。