离子色谱法测定枫糖浆中果葡糖浆

黄志强 梁世君 张倩瑶 董柳青

（浙江省蜂产品中心桐庐县检验检测中心，浙江桐庐 311500）

枫糖浆是加拿大著名特产，是由加拿大糖枫树树汁提炼而成的一种糖浆。枫糖浆主要成分为蔗糖，还含有丰富的苹果酸、植物蛋白、矿物质等物质，其热量低于蔗糖、果糖、玉米糖等糖类，所含的钙、镁和有机酸成分高于其他糖类，对由于营养不均衡引起的虚弱体质具有一定滋补作用。同时，对养颜美容和减肥都有功效。枫糖浆产量较低，造价较高，所以市场上出现了许多枫糖浆仿制品。枫糖浆仿制品通常以玉米糖浆（即玉米淀粉先经酸水解成葡萄糖，再经酶法转化成果葡糖浆，其味道和蜂蜜相似）为原料，加入一种香味接近于糖枫树树汁的“葫芦巴内酯”香精制成。所以检测枫糖浆中果葡糖浆对枫糖浆是否掺假的鉴别具有现实意义。目前检测果葡糖浆的方法主要有离子色谱法、稳定类碳同位素法、薄层色谱法、高效液相色谱一四极杆/静电场轨道阱高分辨率质谱法等。其中同位素仪、高效液相色谱质谱仪价格昂贵，不适用于基层实验室；薄层色谱法操作复杂，耗时长；离子色谱法操作相对简单、经济、快速，适用于基层实验室。

本研究采用离子色谱法，用凝胶柱净化去除果糖、葡萄糖，将寡糖富集后直接经离子色谱-电化学检测器检测，是一种快速检测枫糖浆中果葡糖浆的方法。

1 材料与方法

1.1 仪器与设备

ICS5000 离子色谱仪，配电化学检测器，美国戴安公司；CarboPacPA200 离子色谱柱（3 mm×250 mm）、CarboPacPA200 保护柱（3 mm×50 mm），美国戴安公司；聚丙酰胺凝胶微球，粒径45 μm～90 μm，分级分离 的相对分 子质量范 围100～1 800，德国普兰德公司。

1.2 材料与试剂

枫糖块、枫糖浆，购于淘宝、国外代购和机场免税店。

水，18.2 MΩ/cm 的高纯水；氢氧化钠，优级纯，天津市祥瑞鑫化工科技有限公司；无水乙酸钠，分析纯，济南萧试化工有限公司。

1.3 试验方法

1.3.1 试剂配制

麦芽糖标准储备液：分别精确称取10.0 mg 麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖的标准物质，用纯水溶解完全并定容至10 mL，配制成浓度为1.0 mg/mL 的储备液，存于棕色瓶中，4 ℃条件下保存。

麦芽糖混合标准使用液：分别吸取0.10 mL 麦芽糖标准储备液，0.20 mL 麦芽三糖标准储备液，0.30 mL 麦芽四糖标准储备液，0.40 mL 麦芽五糖标准储备液，0.50 mL 麦芽六糖标准储备液，1.00 mL麦芽七糖标准储备液，用纯水定容至10 mL。保存在4 ℃条件下不超过15 d。

1.3.2 样品前处理

凝胶层析柱：将聚丙酰胺凝胶加水煮沸15 min，冷却至室温装入15 mm×300 mm 空柱管中并压实，装入的聚丙酰胺凝胶高度为100 mm，上端保持10 mm 以上的水层，避免凝胶柱干涸。

称取固体枫糖浆块样品2.0 g 或枫糖浆5.0 g，用纯水完全溶解并定容至50.0 mL，然后用孔径0.22 μm 水性滤膜过滤备用。将准备好的聚丙酰胺凝胶层析柱中的水放至凝胶表面，关闭下端流速阀，取2.0 mL 备用滤液，沿管壁慢慢加至层析柱中，打开流速阀，使液体流出，待液面至凝胶填料上表面时，加3.0 mL 纯水冲洗管壁，继续待液面至凝胶填料上表面时，再加入5.0 mL 纯水冲洗凝胶柱，继续待液面至凝胶填料上表面时，关闭流速阀，弃去3 次共10.0 mL 流出液。准确加入2.0 mL纯水，打开流速阀，用干净的5 mL 塑料离心管，收集2.0 mL 流出液，混匀后作为待测样品溶液，24 h 内进行测定。处理好样品的凝胶柱用50 mL纯水清洗，待液体流出后即可处理下一个样品。

1.3.3 离子色谱条件

柱温：30 ℃；淋洗液：A 为200 mmol/L 氢氧化钠，200 mmol/L 无水乙酸钠；B 为100%纯水；洗脱条件：流速0.40 mL/min，等度洗脱（15%A+85%B）；检测器：检测池温度30 ℃，检测器用Au 工作电极和Ag-AgCl 参比电极，脉冲安培检测；进样量：20 μL。

1.3.4 样品测定

依次将麦芽糖标准混合使用液、纯枫糖浆阴性对照品、含5%果葡糖浆的枫糖浆阳性对照品的寡糖收集液注入离子色谱仪中，观察离子色谱图。

1.3.5 结果判定

对纯枫糖浆阴性对照样品和掺入5%果葡糖浆阳性对照样品的寡糖谱图进行分析，发现阴性对照和阳性对照之间的图谱差异，并以此作为纯枫糖浆中掺入果葡糖浆的判定标准。

2 结果与分析

2.1 色谱条件的选择

流动相流速、柱温、检测器温度、洗脱程序参考国家标准GB/T 21533—2008 《蜂蜜中淀粉糖浆的测定》 中离子色谱法和梁世君等在流速0.40 mL/min，柱温30 ℃、检测器温度30 ℃，等度洗脱(15%A+85%B)条件下测定麦芽糖标准混合液，分离效果好。因此，本文采用等度洗脱（15%A+85%B），得到的分离图谱见图1，以此图谱作为样品试验的参照谱图。

图1 麦芽糖混标图谱

2.2 待测枫糖浆样品的色谱分析

将纯枫糖浆样品阴性对照品、可能掺入糖浆的枫糖浆待测样品以及掺入果葡糖浆的阳性对照品，按上述条件等度洗脱（15%A+85%B）检测，对试验的多种纯枫糖浆样品进行色谱分析，纯枫糖浆未检出五糖以上寡糖。掺入果葡糖浆的枫糖浆样品，在麦芽五糖和麦芽六糖中间和麦芽六糖值麦芽七糖中间呈现2 个典型的“指纹峰”P1 和P2，根据这2 个峰的出现即可判断枫糖浆中掺入了果葡糖浆。

图2 麦芽糖混标、阳性对照、阴性对照图谱

图3 枫糖浆和枫糖块样品图谱

2.3 待测样品溶液有效期

将经凝胶柱净化处理后的枫糖浆阳性对照样品待测溶液放入4 ℃冰箱冷藏24 h、48 h 后再分别进行离子色谱分析，24 h 后色谱图中P1 和P2 峰峰高和处理后既进样的峰高基本一致，48 h 后色谱图中P1 和P2 峰峰高明显降低。因此，待测样品溶液需在24 h 内完成离子色谱分析。

2.4 方法的检测范围

在枫糖浆阴性对照样品中掺入1%果葡糖浆按照上述条件进行色谱分析，色谱图中依然明显可见P1 和P2 峰。考虑到掺入1%果葡糖浆实际意义不大，将1%果葡糖浆作为检出限比较合适。用纯果葡糖浆按上述条件进行色谱分析，出现平头峰，最终待测溶液稀释50 倍后，可以呈现明显P1 和P2 峰。所以当待测样品溶液色谱分析出现响应值高，峰分离不好的情况下，必须经稀释才可以继续分析。

2.4 实际样品检测

分别从国外超市、国外代购、机场免税店直接购买和电商渠道购买枫糖浆样品（该样品均声称100%枫糖浆），总共购买代表性样品20 批次，其中10 批枫糖浆块，10 批液态枫糖浆。检测结果见表1。

表1 样品检测结果

从表1 结果可以看出，枫糖浆果葡糖浆掺假的风险比较小，而10 批次枫糖浆块均检测出果葡糖浆掺假指标物，检出率100%，有较大的果葡糖浆掺假风险。因此，利用该法检测枫糖浆中果葡糖浆具有很大的现实意义。

3 小 结

本法采用离子色谱法检测枫糖浆中果葡糖浆，用凝胶柱净化去除果糖、葡萄糖，采用流速0.40 mL/min，柱温30 ℃，检测器温度30 ℃，等度洗脱对糖类进行分离，对实际枫糖浆样品进行检测，10 批次枫糖浆块果葡糖浆检出率为100%。该方法快速、方便，适用于枫糖浆中果葡糖浆的检测。