高效液相色谱法同时测定逐痰丸中4种成分的含量*

魏晓锐，周文礼，刘艳霞，潘彦荣

(许昌市食品药品检验检测中心，河南 许昌 461000)

逐痰丸为禹州中医院制剂室的中药制剂，批准文号为Z20121407(许)，由金礞石(煅)、大黄、黄芩、茯苓、枳实、陈皮、槟榔七味中药材组成，具有降火逐痰之功效，用于实热老痰发为癫狂、惊悸、咳喘、痰稠、痰多、眩晕、大便秘结等症的治疗。大黄是逐痰丸的主药，主要成分为蒽醌类化合物。为了全面、客观地评价逐痰丸的质量，本实验对逐痰丸中的大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚进行了研究，建立了高效液相色谱法同时测定此4种成分含量的方法[1-4]，作为逐痰丸的质量控制方法。

1 药品、试剂与仪器

逐痰丸(批号180601，180701，180802)与缺大黄阴性样品均由禹州中医院制剂室制备。对照品大黄酸(批号110757-201607)、大黄素(批号110756-201512)、大黄酚(批号110796-201621)和大黄素甲醚(批号110758-201415)均购自由中国食品药品检定研究院；甲醇为色谱纯，德国默克公司产品；水为自制超纯水；其余试剂均为分析纯。Waters e2695高效液相色谱仪，美国Waters公司产品；MSA225S-000-DU电子天平，德国赛多利斯公司产品；BK-360C超声波清洗仪，济南巴克超声波科技(集团)有限公司产品。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适应性试验

色谱柱：XSelect CSH C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为甲醇-1 ml/L磷酸溶液(83∶17)，流速1.0 mL/min，柱温30 ℃，检测波长254 nm，进样量10 μL。理论板数均不低于4 000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升含大黄酸17.32 μg、大黄素17.02 μg、大黄酚18.21 μg、大黄素甲醚8.46 μg的混合对照溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取逐痰丸细粉0.5 g，精密称定，精密加入甲醇25 mL，称定质量，加热回流1 h，放冷，用甲醇补足减失的重量，滤过。精密量取续滤液5 mL，挥去溶剂，加80 mL/L盐酸溶液10 mL，超声(功率250 W,频率40 kHz)处理 3 min，再加三氯甲烷10 mL,加热回流1 h，放冷，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷振摇提取3次，每次10 mL，合并三氯甲烷液，低温蒸干，残渣加甲醇定容至10 mL量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 阴性对照溶液的制备

取缺大黄阴性样品，按2.3项下的制备方法制备缺大黄阴性对照溶液。精密吸取上述混合对照品溶液、供试品溶液和缺大黄阴性对照溶液,按上述色谱条件进行测定。结果：在与对照品相同保留时间位置上无干扰。见图1。

1.大黄酸；2.大黄素；3.大黄酚；4.大黄素甲醚；A.对照品； B.供试品； C.缺大黄阴性对照品图1 逐痰丸的高效液相色谱图

2.5 线性关系考察

精密吸取混合对照品溶液1，4，7，10，13，17，20 μL，进行测定分析。以进样量(μg)为横坐标X，峰面积为纵坐标Y，分别进行线性回归，绘制标准曲线，结果见表1。

表1 逐痰丸中4种成分线性关系考察结果

2.6 精密度试验

取混合对照对照品溶液，按上述色谱条件连续进样6次，测定并计算大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚色谱峰面积的RSD分别为0.81%、0.76%、0.75%、0.78%。结果表明：本法精密度良好。

2.7 重复性试验

取逐痰丸细粉(批号180701)，精密称取6份，制备供试品溶液，测定并计算大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚色谱峰的RSD分别为1.26%、1.41%、1.39%、1.23%。结果表明：本方法具有良好重复性。

2.8 稳定性试验

取同一供试品溶液(批号180701)，室温放置，在0，2，4，6，8，10，12 h测定峰面积。结果：供试品中大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚色谱峰面积的RSD分别为1.17%、1.36%、1.28%、1.32%。结果表明：12 h内供试品溶液具有良好的稳定性。

2.9 回收率试验

取已知含量的逐痰丸(批号180701)，精密称定细粉6份，每份约0.25 g，分别精密加入已知质量分数的对照品溶液，并按供试品项下方法制备加样回收供试品溶液，进样测定。回收率计算结果见表2。

表2逐痰丸中4种成分的加样回收率测定结果

n=6

2.10 样品测定

取3批逐痰丸，按2.3项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进样测定，结果见表3。

表33个批号的逐痰丸中4种成分含量的测定结果

mg·g-1

3 讨 论

笔者在实验过程中，在提取方法研究中对加热回流和超声提取两种方法进行了比较，结果发现加热回流提取4种成分的含量略高于超声提取。对加热回流提取时间进行了比较，确定以加热回流提取60 min为宜。逐痰丸中4种蒽醌类成分极性较小且略显酸性，因此在研究报道中多采用有机相比例较大并含有酸的水相为流动相[5-6]。本实验采用了不同比例甲醇、不同体积分数的磷酸水溶液为流动相，测定逐痰丸中4种成分的含量。研究发现：流动相中甲醇比例过大，出峰时间提前，色谱峰的分离度不佳；磷酸溶液比例稍大时，出峰时间推迟而且峰形变宽、拖尾，峰形不佳。当以甲醇-1 mL/L磷酸(83∶17)的比例为流动相，分离效果为最好，且分析时间适中，故选择该配比作为流动相组成。

大黄是逐痰丸的主药。大多数文献都是对大黄中的大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚和芦荟大黄素5种成分进行含量研究[7-8]，但在本制剂中，芦荟大黄素在与对照品色谱峰相同保留时间位置上有干扰峰出现，因此未将芦荟大黄素作为研究指标。

采用高效液相色谱法同时测定逐痰丸中4种成分的含量，方法结果准确、重复性好，可用于逐痰丸的定量控制。