谷氨酰胺对22~28日龄热应激肉鸡骨骼肌氧化损伤的改善作用
2019-06-14戴四发李佳琦闻爱友吴学壮
白 晰 戴四发 李佳琦 张 丹 闻爱友 吴学壮 胡 洪
(安徽科技学院动物科学学院,凤阳 233100)
热应激是指高温环境下,动物机体产生的非特异性生理反应总和。肉鸡具有代谢旺盛、体温高且全身覆盖羽毛、皮肤无汗腺等生理特点,因此对高温较为敏感,21日龄后饲养温度一般为24 ℃左右为宜,高于30 ℃时,极易发生热应激。热应激条件下,肉鸡肌肉产量和质量下降,出现保水性差、纤维松散、色泽灰暗等问题。除此之外,研究发现热应激会引起肉鸡氧化应激反应,诱发产生大量活性氧自由基(ROS),易导致其氧化损伤,从而影响肉鸡生产,甚至死亡,造成较严重的经济损失[1-2]。
谷氨酰胺(Glutamine,Gln)可改善肉鸡肌肉品质,且在抗应激、抗感染、抗氧化、增强免疫力等方面发挥着重要作用[3-4]。在热应激条件下,机体对Gln需要量增加,自身合成的Gln不能满足需要,此时需额外增加外源性Gln,来维持机体代谢平衡,增强抗热应激损伤作用[5-6]。
本试验通过在热应激肉鸡日粮中添加Gln,旨在探讨Gln对肉鸡胸肌和腿肌抗氧化功能的作用,进一步为肉鸡抗热应激和抗氧化应激的绿色调控技术提供依据。
1 材料与方法
1.1 谷氨酰胺与日粮配方
谷氨酰胺购自上海生工生物工程有限公司。基础日粮采用玉米-豆粕型日粮,其日粮组成及营养水平按照 NRC(1994)进行设计,具体饲料配方参考Hu等[6],见表1。
表1 基础日粮饲料配方和营养水平/%
1.2 试验动物及设计
常规饲养3周,选取300 只、22日龄爱拔益加(AA)肉鸡(公母混养、体重相近),按随机原则分为五个处理组(每组60只鸡:包括6个重复,每个重复10只鸡):Ⅰ为常温组,饲喂不含Gln的基础日粮;Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ为热应激组,分别饲喂0%Gln、 0.5% Gln、1.0% Gln和1.5% Gln的基础日粮。
1.3 饲养管理和热应激环境条件
按常规程序进行鸡的饲养管理及免疫接种,鸡入笼前打扫好鸡舍、鸡笼,熏蒸消毒,采用网上平养的方式,利用温控仪控制鸡舍温度。试验期间24 h光照,自由饮水采食。适温对照组(Ⅰ组),温度保持在(24±2) ℃,相对湿度为45%~55%;热应激组(Ⅱ~Ⅴ组),每天 9:00~17:00 温度控制在(34±2) ℃,相对湿度为60%~70%,18:00 至次日 8:00 温度控制在(24±2) ℃,相对湿度为45%~55%。试验期为 7 d(22~28日龄),采用加热器及加湿器方式控制鸡舍温湿度,随时观察全天的温度和湿度及记录试验鸡的生长状况。
1.4 取样与指标测定
试验结束,每个重复随机取1只肉鸡进行肉鸡屠宰,拔除羽毛后,利用手术剪、手术刀、玻璃分针等对胸肌和腿肌进行取样,放置于EP管中,编号后-80 ℃保存备用。丙二醛(MDA)、抗超氧阴离子能力、抗羟自由基能力、总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽巯基转移酶(GST)等氧化指标,均采用南京建成生物有限公司生产的试剂盒进行测定。
1.5 数据分析
统计分析采用SPSS 18.0 软件中 One-Way ANOVA分析,对热应激组和常温对照组的数值进行Duncan′s 检验。数值用平均值±标准误来表示。P值小于0.05时表示差异显著。
2 结果与分析
2.1 Gln对热应激肉鸡胸肌MDA和抗氧化能力的影响
由表2可知,与常温对照Ⅰ组相比,热应激Ⅱ组28日龄肉鸡胸肌的MDA含量显著升高(P<0.05)。Gln热应激Ⅴ组的MDA含量显著低于热应激Ⅱ组(P<0.05);与对照Ⅰ组相比,Gln热应激Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组的MDA含量无显著差异(P>0.05)。
与常温对照Ⅰ组相比,热应激Ⅱ组28日龄肉鸡胸肌抗超氧阴离子能力显著降低(P<0.05)。Gln热应激Ⅳ组的抗超氧阴离子能力显著高于热应激Ⅱ组(P<0.05);与对照Ⅰ组相比,Gln热应激Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组的抗超氧阴离子能力无显著差异(P>0.05)。
与常温对照Ⅰ组相比,热应激Ⅱ组28日龄肉鸡胸肌的T-AOC活性显著下降(P<0.05)。Gln热应激Ⅳ和Ⅴ组的T-AOC活性显著高于热应激Ⅱ组(P<0.05);与对照Ⅰ组相比,Gln热应激Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组的T-AOC活性无显著差异(P>0.05)。
此外,Ⅰ~Ⅴ组肉鸡胸肌的抗羟自由基能力均无显著差异。
表2 Gln对热应激肉鸡胸肌MDA和抗氧化能力的影响
注:Ⅰ为常温对照组,饲喂不含Gln的基础日粮;Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ为热应激组,分别饲喂0% Gln、 0.5% Gln、1.0% Gln和1.5% Gln的基础日粮;同行字母不同表示差异显著(P<0.05),相同字母或无字母表示差异不显著(P>0.05),余同。
2.2 Gln对热应激肉鸡腿肌MDA和抗氧化能力的影响
由表3可知,与常温对照Ⅰ组相比,热应激Ⅱ组28日龄肉鸡腿肌的MDA含量显著升高(P<0.05)。Gln热应激Ⅳ和Ⅴ组的MDA含量显著低于热应激Ⅱ组(P<0.05)。Gln热应激Ⅳ和Ⅴ组的MDA含量与对照Ⅰ组相比无显著差异(P>0.05)。此外,Ⅰ~Ⅴ组肉鸡腿肌的抗超氧阴离子能力、抗羟自由基能力和T-AOC均无显著差异。
表3 Gln对热应激肉鸡腿肌MDA和抗氧化能力的影响
2.3 Gln对热应激肉鸡胸肌抗氧化剂活性的影响
由表4可知,与常温对照Ⅰ组相比,热应激Ⅱ组28日龄肉鸡胸肌的GSH活性显著下降(P<0.05)。Gln热应激Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组的GSH活性显著高于热应激Ⅱ组(P<0.05)。Gln热应激Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组的GSH活性与对照Ⅰ组相比无显著差异(P>0.05)。
与常温对照Ⅰ组相比,热应激Ⅱ组28日龄肉鸡胸肌的CAT活性显著下降(P<0.05)。Gln热应激Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组的CAT活性显著高于Gln热应激Ⅱ组(P<0.05)。Gln热应激Ⅳ和Ⅴ组的CAT活性与对照Ⅰ组相比无显著差异(P>0.05)。
与常温对照Ⅰ组相比,热应激Ⅱ组28日龄肉鸡胸肌的SOD活性显著下降(P<0.05)。Gln热应激Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组的SOD活性与热应激Ⅱ组相比差异不显著(P>0.05)。
与常温对照Ⅰ组相比,热应激Ⅱ组28日龄肉鸡胸肌的GST活性显著下降(P<0.05)。Gln热应激Ⅳ和Ⅴ组的GST活性显著高于热应激Ⅱ组(P<0.05),但Gln热应激Ⅲ组的GST活性与热应激Ⅱ组相比差异不显著(P>0.05)。Gln热应激Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组的GST活性与常温对照Ⅰ组相比无显著差异(P>0.05)。
此外,Ⅰ~Ⅴ组肉鸡胸肌的GSH-Px活性无显著差异。
表4 Gln对热应激肉鸡胸肌抗氧化剂活性的影响
2.4 Gln对热应激肉鸡腿肌抗氧化剂活性的影响
由表5可知,与常温对照Ⅰ组相比,热应激Ⅱ组28日龄肉鸡腿肌的GSH活性显著下降(P<0.05)。Gln热应激Ⅳ和Ⅴ组的GSH活性显著高于热应激Ⅱ组(P<0.05)。Gln热应激Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组的GSH活性与常温对照Ⅰ组相比无显著差异(P>0.05)。
与常温对照Ⅰ组相比,热应激Ⅱ组28日龄肉鸡腿肌的SOD活性显著下降(P<0.05)。Gln热应激Ⅴ组的SOD活性显著高于热应激Ⅱ组(P<0.05)。Gln热应激处理Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组的SOD活性与常温对照Ⅰ组相比无显著差异(P>0.05)。
此外,Ⅰ~Ⅴ组肉鸡腿肌的GSH-Px、CAT和GST活性均无显著差异。
表5 Gln对热应激肉鸡腿肌抗氧化剂活性的影响
3 讨论
由于长期快大型的选育方向,白羽肉鸡适应能力弱,对高温环境尤为敏感,易发生热应激。正常生理状态下,白羽肉鸡机体产生适量自由基,保持相对平衡状态;然而,高温降低机体清除自由基的能力,产生过多的自由基使细胞自溶,影响细胞膜的功能,导致脂类过氧化物堆积,造成动物机体氧化应激损伤,降低生产性能[7-8]。MDA为自由基引发的脂质过氧化反应的终产物,其含量越高,说明自由基对机体脂肪的氧化损伤程度越大。Zhang等[9]等研究发现热应激可提高肉鸡胸肌MDA和ROS的水平,引起肌肉氧化损伤。李叶涵等[10]研究表明,热应激显著提高了肉鸡肝脏MDA和过氧化氢的含量,增加了肉鸡肝脏氧化应激程度。Ma等[11]也发现热应激提高了蛋鸭血浆和肝脏中MDA和乳酸的含量,降低了T-AOC的活性,引起氧化损伤。本研究结果同样表明热应激显著提高肉鸡胸肌和腿肌MDA含量,从而引起骨骼肌氧化损伤。
Gln作为一种条件性必需氨基酸,在热应激、饥饿、疾病等情况下增加摄入量,可提高畜禽抗氧化能力[12]。虽然热应激提高肉鸡胸肌和腿肌MDA的含量,而日粮添加1.5%Gln能显著降低骨骼肌MDA含量,说明Gln能缓解热环境中肉鸡骨骼肌的氧化损伤,其原因是Gln提高了机体的抗氧化能力。李文立等[13]研究证明,在热应激环境下,Gln显著降低肉鸡血清和肠道中MDA 含量,而显著提高它们抑制羟自由基能力和T-AOC水平。本试验结果显示,热应激条件下,在饲粮中添加一定的Gln,可提高肉鸡胸肌T-AOC和抗超氧阴离子能力,抗羟自由基能力也有不同程度的提高。
肌细胞抗氧化系统能抵御自由基的攻击,由酶(SOD、CAT、GSHPx等)和非酶(维生素E、类胡萝卜素、多酚、GSH等)系统组成,其活性反映出机体清除自由基的能力[14]。Gln作为机体内GSH的重要合成原料,在热应激时,机体自身合成的Gln不能满足需要,因此增加外源Gln的摄入量,可提高GSH生成量,同时GSH-Px、CAT、SOD及GST的活性也会增加,有效缓解机体氧化应激[13]。Marques 等[15]研究表明,Gln可减轻氧化应激,使SOD活性正常化,提高总GSH水平,阻断NO的过量产生和过氧亚硝酸盐的形成,增强胃的抗氧化能力。唐现文等[16]在肉鸡抗热应激中的研究发现,日粮添加0.6% 谷氨酰胺显著降低热应激肉仔鸡血清MDA含量,并提高血清T-AOC、SOD及GSH-Px活力,其机制是通过抑制脂质过氧化反应来增强机体的抗氧化能力。本试验结果显示,在饲粮中添加一定量的Gln,显著提高热应激肉鸡胸肌的GSH、CAT和GST活性,并显著提高腿肌GSH和SOD活性,表明日粮添加Gln能改善热应激对肉鸡胸肌和腿肌的氧化损伤。
4 结论
热应激条件会引起白羽肉鸡胸肌和腿肌的氧化损伤,且抗氧化酶活性和抗氧化能力都有所下降;日粮中添加一定量的Gln可增强热应激肉鸡胸肌和腿肌的抗氧化能力,抑制肌肉脂质过氧化反应,缓解骨骼肌氧化损伤。