高浓度三酰甘油对免疫比浊法检测项目的影响

宋 霖，戴 雯，张 宁

(武汉大学人民医院：1.检验科；2.肾内科，湖北武汉 430060)

脂血是临床生化检验中最常见的不合格样本类型之一，也是影响检验结果的重要的分析前影响因素[1-3]。不同于溶血，对脂血样本单纯地进行样本退回，并嘱临床重新采血也无法避免脂血的再次出现。血清中三酰甘油(TG)的浓度过高，通常是引起脂血的重要原因。免疫比浊法是当今临床生化检验中常用的检测方法。其是通过血清中的抗原与试剂中的抗体，经一定时间后形成抗原抗体复合物，使反应体系中出现浊度。通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照，即可计算出样本中抗原含量[4]。从反应原理可知，免疫比浊法是否能准确测定出样本中分析物的含量，与样本的浊度密切相关。本研究利用脂肪乳模拟不同浓度TG的脂血样本，分析了不同浓度TG对常见免疫比浊法生化检测项目的影响，现报道如下。

1 材料与方法

1.1材料 收集检验指标正常且接近并排除有免疫球蛋白血症的血清样本20份。

1.2方法

1.2.1不同浓度TG脂血样本的制备 将20份血清样本制成混合基质血清15 mL。将混合基质血清分为50份，每份300 μL。将样本分为5组(M1～M5组)，按下述比例向每组加入不同量的脂肪乳，模拟5种不同浓度TG的脂血样本：(1)M1组为0 μL脂肪乳、20 μL生理盐水；(2)M2组为5 μL脂肪乳、15 μL生理盐水；(3)M3组为10 μL脂肪乳、10 μL生理盐水；(4)M4组为15 μL脂肪乳、5 μL生理盐水；(5)M5组为20 μL脂肪乳、0 μL生理盐水。

1.2.2检测方法 使用西门子全自动生化分析仪Advia2400测定血清总胆固醇(TC)、TG、前清蛋白(PA)、纤维蛋白原(Fn)、胱抑素C(CYC)、β2-微球蛋白(β2-MG)、视黄醇结合蛋白(RBP)、补体C1q(C1q)、脂蛋白a[Lp(a)]、载脂蛋白A1(ApoA1)、载脂蛋白B(ApoB)、宽范围超敏C反应蛋白(wr-CRP)。TC、TG、ApoA1、ApoB、wr-CRP为西门子配套试剂，批号分别为359288、348374、362876、357771、360673；PA、CYC、β2-MG、RBP试剂来源自上海景源生物科技公司，批号分别为1630147、4090R、411H0、40695；Lp(a)试剂来源于Orion Diagnosticaoy，批号为1701021；Fn、C1q试剂来源于上海北加生物科技公司，批号分别为15102803、20151217。随后通过超高速离心(12 000 r/min离心10 min)，检测离心前后免疫比浊项目测定值的变化。

1.3统计学处理 采用SPSS19.0统计软件对数据进行分析，多组间比较采用单因素方差分析，超高速离心前后两组间比较采用配对t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1基质血清各指标检测结果 20份样本混合而成的基质血清所有检测指标均在正常范围内。见表1。

表1 基质血清各指标检测结果(n=20)

2.2不同浓度TG对免疫比浊法检测项目的影响 M2～M5组TG、Fn水平与M1组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)，且随TG浓度升高，Fn检测值逐步升高，M1～M5组Fn检测值比较，差异均有统计学意义(P<0.05)； M2～M5组RBP水平与M1组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)，且随TG浓度升高，RBP检测值逐步降低，M1～M5组RBP检测值比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。M1组PA检测值与M2组比较，差异无统计学意义(P>0.05)；但与M3～M5组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)，且随TG浓度升高，PA检测值逐步降低，M3～M5组PA检测值比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。M1组C1q水平与M2～M5比较，差异均有统计学意义(P<0.05)，且M5组C1q水平与M2～M4比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。各组CYC、β2-MG、Lp(a)、ApoA1、ApoB、wr-CRP比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 不同浓度TG对免疫比浊法检测项目的影响

注：与M1组比较，*P<0.05；与M2组比较，#P<0.05；与M3组比较，▲P<0.05；与M4组比较，△P<0.05

表3 离心前后脂血样本检验指标的变化

续表3 离心前后脂血样本检验指标的变化

2.3超高速离心前后脂血样本检验指标的变化 M1组超高速离心后所有检测指标与离心前比较，差异均无统计学意义(P>0.05)；M2组超高速离心后TG水平与离心前比较，M3组超高速离心后TG、Fn、RBP水平与离心前比较，M4、M5组超高速离心后TG、Fn、RBP、PA与离心前比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表3。

3 讨 论

脂血是临床常见的不合格样本类型，对临床生化检测结果具有巨大影响[5-7]。造成脂血的原因主要分为生理性和病理性两大类。生理性脂血主要是由于患者进食后1～2 h内采血造成的，这类情况可通过嘱患者空腹8 h后采血得到消除；病理性脂血主要是由于脂肪代谢或运转异常使血浆中一种或多种脂质水平高于正常范围，病因包括糖尿病、肾脏疾病、甲状腺功能减退症、肥胖、雌激素作用、高尿酸血症、大量摄入单糖、吸烟、饮酒、糖皮质激素、久坐不动、基因异常等[8]。

TG血症是高脂血症中最常见的类型，更重要的是临床常通过TG的浓度来判断脂血的程度，权衡检验结果的准确性[9-10]。因此，探讨TG对生化检验中免疫比浊项目的影响是十分有必要的。

本研究通过向混合基质血清中添加不同量的脂肪乳，模拟了轻度脂血样本(M2)、中度脂血样本(M3)、高度脂血样本(M4)和重度脂血样本(M5)。结果发现，轻度脂血即可使Fn、RBP检测结果受到干扰，且TG浓度越高，检测的干扰就越严重。轻度脂血对PA的检测并无影响，但当TG水平超过9 mmol/L，达中度脂血后PA检测值明显降低，且TG浓度越高，检测的干扰就越严重。轻度脂血使补体C1q检测值轻微升高，而重度脂血才会对补体C1q的检测产生明显干扰。同时，本研究还发现，不同浓度TG对CYC、β2-MG、Lp(a)、ApoA1、ApoB、wr-CRP的检测均未产生显著影响。表明不同浓度TG对不同免疫比浊项目会产生不同程度的干扰。

实验室常用的消除脂血影响的方法主要是稀释法和超高速离心法[11-12]。前者由于对结果正常或低值的检测项目会产生较大的误差，因而不建议作为一般处理方法使用。本研究结果表明，采用超高速离心法去除浑浊后可明显减轻对Fn、RBP、PA的干扰，然而这种干扰并不能完全消除至对照水平。同时，超高速离心法无法消除TG对补体C1q测定的干扰。因此，对脂血样本，建议超高速离心后再检测Fn、RBP、PA。必须注意的是，超高速离心法必定会造成TG浓度的降低，因此，对TG项目的测定不能采用超高速离心法，建议使用稀释法进行测定。

4 结 论

不同浓度的TG会对不同免疫比浊项目检测造成干扰，超高速离心法可减轻这种干扰，但不能完全消除。因此，检验人员应强化分析前质量控制重要性的教育，建立规范的样本前处理流程，及时将脂血样本筛选出来进行预处理，减少其对检测的干扰。面对脂血样本，检验人员必须备注样本性状为脂血或重度脂血，提示临床医生样本的检测结果存在不准确性；另一方面，临床医生也应深入学习脂血样本对检测项目的影响，为更好地解读检验报告，更准确地诊断病情、判断预后奠定理论基础。