明荷菊减肥茶的制备及其总黄酮和总生物碱的含量测定

药学院，山东第一医科大学(山东省医学科学院)，山东 泰安 271016

随着人们生活水平的提高，食入的营养、热量过剩，肥胖症的发病率不断升高。肥胖会引起高血压、心脏病、糖尿病等多种疾病，严重影响人们身体健康[1-2]。明荷菊减肥茶是以荷叶、决明子、野菊花、泽泻、制首乌、枸杞、山楂、薏米、大枣、乌龙茶为原料制备成的保健品，具有提神醒脑、降脂减肥的功效。野菊花、山楂、制首乌、决明子药材中所含的黄酮具有很强的抗氧化性以及调节血脂的活性[3-6]，能很好地清除人体内的自由基，起到调脂减肥的作用；荷叶和枸杞药材中所含的生物碱具有降脂减肥的功效[7-8]。因此，本研究采用紫外分光光度法建立了明荷菊减肥茶中总黄酮和总生物碱含量的测定方法，以期为明荷菊减肥茶中有效成分的质量控制提供依据。

1 材料与仪器

荷叶、决明子、野菊花、泽泻、制首乌、枸杞、山楂药材均购于泰安金泰联药店，薏米、大枣、乌龙茶均为市售。芦丁标准品(含量>98%，批号：171109)购于上海融禾医药科技有限公司，荷叶碱标准品(含量>98%，批号：CY20180205)购于杨凌慈缘生物技术有限公司。实验所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。

759S系列紫外可见分光光度计(上海菁华科技仪器有限公司)，FA505N型电子分析天平(上海菁海仪器有限公司)。

2 方法与结果

2.1 明荷菊减肥茶的制备

减肥茶原料比例为荷叶∶决明子∶野菊花∶泽泻∶制首乌∶枸杞∶山楂∶薏米∶大枣∶乌龙茶=10∶10∶10∶10∶5∶5∶5∶5∶10∶40。将荷叶、决明子、泽泻、制首乌、野菊花、山楂混合，用70%乙醇提取2次，每次1.5 h，过滤，合并滤液，减压回收乙醇，喷雾干燥得粗粉。将薏米、枸杞、大枣加水煎煮2次，每次1 h，过滤，合并滤液，滤液喷雾干燥得粗粉。将乌龙茶粉碎过40目筛。将所有粉末混合均匀，制成茶包，每包重9 g，然后辐射消毒，制得减肥茶。

2.2 总黄酮含量测定

2.2.1对照品溶液的制备

精密称定芦丁对照品23.75 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，得对照品储备液(每1.0 mL中含芦丁0.95 mg)。精密量取10 mL，置50 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得(每1.0 mL中含芦丁0.19 mg)。

2.2.2供试品溶液的制备

称取减肥茶0.50 g，精密称定，加入50%乙醇150 mL，称重，超声处理30 min，补足减失的重量，过滤，取续滤液，即得。

2.2.3测定波长的选择

精密吸取芦丁对照品溶液和供试品溶液各1.0 mL，分别置25 mL容量瓶中，加水至6.0 mL，加5%亚硝酸钠溶液1.0 mL，摇匀，放置6 min，加10%硝酸铝溶液1.0 mL，摇匀，放置6 min，加氢氧化钠试液10 mL，再加水至刻度，摇匀，放置15 min；另同时吸取对照品溶液和供试品溶液各1.0 mL，分别置25 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，分别作空白对照溶液，采用紫外-可见分光光度法，在200～600 nm区间扫描吸收曲线。结果发现供试品溶液在510 nm处有最大吸收，与芦丁对照品溶液吸收曲线相似，故选用510 nm为测定波长。

2.2.4方法学考察

线性关系考察：精密量取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，分别置25 mL量瓶中，依“2.2.3”项下方法测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。回归方程：A = 0.012 71C +0.142 4，r=0.999 7，线性范围为7.6～45.6 μg·mL-1。

稳定性实验：精密吸取供试品溶液3.0 mL，按“2.2.3”项下方法测定，在显色后10、20、30、40、50、60 min测定吸光度，RSD为1.13%，表明显色后60 min内稳定。

精密度实验：精密吸取供试品溶液3.0 mL，按“2.2.3”项下方法重复测定6次吸光度，RSD值为1.04%，表明精密度良好。

重复性实验：取减肥茶0.50 g，平行制备6份供试品溶液，按“2.2.3”项下方法测定吸光度，计算含量。结果总黄酮含量平均值为3.03%，RSD为1.28%，表明重复性良好。

回收率实验：取同一批次已知含量的减肥茶，按“2.2.1”项下制成供试品溶液，平行制备6份，分别精密加入对照品储备液1.6 mL,按“2.2.3”项下方法测定吸光度，计算回收率，平均回收率为100.06%，RSD为1.88%。结果见表1。

表1 总黄酮回收率实验结果(n=6)

2.2.5样品测定

取减肥茶0.5 g，按“2.2.1”项下制成供试品溶液，按“2.2.3”项下方法测定吸光度，样品平行测定3次，结果总黄酮含量平均值为3.03%。

2.3 总生物碱含量测定

2.3.1对照品溶液的制备

精密称取荷叶碱对照品10.01 mg，加甲醇溶解并定容至25 mL量瓶，作为对照品储备溶液(每1.0 mL中含荷叶碱0.40 mg)。

2.3.2供试品溶液的制备

取减肥茶约5.0 g，精密称定，置于具塞锥形瓶，精密加入甲醇120 mL，称定重量，加热回流2.5 h，放冷，补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。

2.3.3测定波长的选择

精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1 mL，分别置于分液漏斗中，挥干甲醇，加入枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲溶液(pH值4.5)5.0 mL，加入溴甲酚绿溶液2.0 mL，摇匀，以三氯甲烷10 mL萃取，取萃取液，以随行试剂为空白，采用紫外可见分光光度法，在200～700 nm区间扫描吸收曲线。结果发现供试品溶液和对照品溶液在415 nm处有最大吸收，选定为测定波长。

2.3.4方法学考察

线性关系考察：精密吸取对照品溶液0.4、0.6、0.8、1.2 mL，分别置于分液漏斗中，挥干甲醇，依“2.3.3”项下方法测定吸光度。以荷叶碱的量为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，求得回归方程为Y=0.014 075X-0.022 5(r=0.999 2)，表明荷叶碱在19.24～57.72 μg范围内与吸光度值线性关系良好。

稳定性试验：精密量取供试品溶液2.0 mL，照“2.3.3”项下方法操作，在室温下每隔1 h测定，结果样品在5 h内稳定，RSD为1.37%。

精密度试验：取同一供试品溶液2.0 mL，照“2.3.3”项下方法操作，连续测定6次，吸光度的RSD为1.03%，表明仪器的精密度良好。

重复性实验：取减肥茶，平行制备6份供试品溶液，照“2.3.3”项下方法操作，计算含量，结果为3.12%，RSD为1.81%，表明重复性良好。

回收率实验：取同一批次已知含量的减肥茶2.5 g，精密加入对照品溶液2.6 mL，按“2.3.2”项下制成供试品溶液，平行制备6份，按“2.3.3”项下方法测定吸光度，计算回收率，平均回收率为97.37%，RSD为2.09%。结果见表2。

表2 总生物碱回收率实验结果(n=6)

2.3.5样品测定

取减肥茶5.0 g，按“2.3.2”项下制成供试品溶液，按“2.3.3”项下方法测定吸光度，样品平行测定3次，结果总生物碱含量为0.042%。

3 讨 论

本研究在明荷菊减肥茶的制备过程中，采用将荷叶、决明子、泽泻、制首乌、野菊花、山楂用70%乙醇合并提取的方法，利用了黄酮和生物碱易溶于有机溶剂的特点，此提取方法简便易行，黄酮和生物碱的提取率高。

在总黄酮的含量测定中，本实验比较了4种不同的显色试剂NaNO2-Al(NO3)3-NaOH、KOH、NaBH4、AlCl3，实验结果显示Al(NO3)3络合法的测定结果相对于其他方法准确度高，是测定明荷菊减肥茶中总黄酮含量的有效方法。在总生物碱的含量中，本实验采用酸性染料比色法，相比紫外薄层层析法、滴定法等，该法灵敏度高，操作简便，重现性好。

在明荷菊减肥茶总黄酮和总生物碱的含量测定中，发现总黄酮的含量相对较高，而总生物碱的含量相对较低。本方法简单、快速、准确，易于推广，故该方法可作为减肥茶类保健食品的质量评价的方法之一。