澳洲白绵羊不同精液剂型、输精部位对湖羊受胎率的影响

赵咏中 ，董 伟 ，王建军 ，李 兵 ，徐 宁

（1.武威市畜牧兽医科学研究院，甘肃 武威 733000；2.武威普康养殖有限公司，甘肃 武威 733000）

澳洲白绵羊是澳大利亚第一个利用现代基因测定手段培育而成的粗毛型、中大型肉羊品种，集成了白头杜泊绵羊、万瑞绵羊、无角陶赛特羊和特克塞尔羊的优良品种基因，具有抗逆性好、生长速度快、性成熟早、四季发情、合群性强、胴体质量好、肉质好等特点，对杂交改良湖羊体躯不丰满、胴体形状欠佳等种质特性具有重要意义。而人工授精技术是实现澳洲白绵羊纯繁和湖羊杂交改良的重要技术措施。目前，在生产实践中，羊的人工授精一般采用鲜精，且通过子宫颈口输精，但对精液的不同剂型、输精部位对母羊情期受胎率影响的研究报道较少。因此，本试验选用澳洲白绵羊精液研究不同精液剂型和输精部位对湖羊情期受胎率的影响，以探索最佳精液剂型和输精部位，同时也为澳洲白绵羊的繁殖育种技术提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验时间与地点

2016年至2018年的春夏时节在甘肃普康养殖有限公司（饲养量达3万只）进行试验。

1.2 试验动物与饲养管理

试验母羊选取年龄2岁左右、生长发育良好、无繁殖疾病的经产湖羊，试验期间参加配种母羊共2 431只。试验公羊为纯种澳洲白公羊（天津奥群牧业有限公司引进），年龄3岁左右，体格健壮，无传染性疾病。

试验羊全部舍饲，饲喂全混合日粮，上、下午各1次，自由饮水，羊舍内放置舔砖，自由舔舐。为提高配种公羊的精液品质，采精前15 d开始对公羊进行采精训练，并对精液进行品质检查。

1.3 试验药品与仪器

高锰酸钾、生理盐水、75%乙醇、青链霉素、甘油等药品；Motic SMZ-140显微镜、腹腔内窥镜、恒温水浴锅、高压灭菌锅、液氮罐等仪器；母羊保定台、子宫钳、手术剪等、开膣器、集精杯等输精器械。

1.4 试验设计与分组

试验母羊均为自然发情，采用试情法鉴定母羊发情。公羊使用假阴道法采集精液，镜检合格稀释后，通过人工授精方式进行配种。母羊1个情期应输精2次，发情时输精1次，间隔10 h左右复配1次。阴道底部、子宫颈口输精的母羊，返情时要追配1次。

发情母羊随机分组，3种精液剂型对母羊受胎率影响试验采用常规的子宫颈内口部位输精；3种输精部位对母羊受胎率影响试验采用鲜精精液剂型。即Ⅰ组：冷冻精液—子宫颈内口；Ⅱ组：4℃冷却精液（24 h后废弃）—子宫颈内口；Ⅲ组：鲜精—子宫颈内口；Ⅳ组：阴道—鲜精；Ⅴ组：子宫颈内口—鲜精；Ⅵ组：腹腔子宫角—鲜精。

1.5 方法

1.5 .1发情鉴定

1.5.1 .1体外观察鉴定 试情员将系有试情布的公羊牵入母羊群中寻找发情母羊，每天上、下午2次试情。公母羊试情比例1∶25，试情30 min。如果母羊主动接近公羊，或公羊爬跨时母羊静立不动视为发情母羊。

1.5.1 .2卵巢观察鉴定 腹腔镜子宫角输精时，观察卵巢上卵泡、红体及黄体数目。如果卵巢上有卵泡发育，视为发情母羊；如果卵巢处于静止或无卵泡发育，即使体外有发情表现，也视为未发情母羊。

1.5.2 精液处理

1.5.2 .1 稀释液配制 100 mL蒸馏水中加葡萄糖3 g、柠檬酸钠1.4 g，溶解后过滤3～4次，蒸煮30 min灭菌，降至室温后，再加新鲜卵黄20 mL，青霉素10万IU，震荡溶解待用［4］。

1.5.2 .2鲜精 输精前1 h对澳洲白种公羊进行采精，快速送往镜检室对精子活力进行鉴定，活力在0.7以上的精液稀释后留下待用。

1.5.2 .3冻精 冻精为纯种澳洲白绵羊冻精，由天津奥群牧业有限公司提供。输精前，从液氮中取出精液细管，迅速放置到37℃的保温水浴锅中，10 s后取出待用。

精液通过上述有效处理后，确保输精时有效精子数在4 000万个以上（采用PHOTOMETER SDM5全自动精子密度仪进行测定），以提高参配母羊的受胎率。

1.5.3 人工授精

1.5.3 .1阴道底部输精 母羊自然站立，保定母羊头部，向上提起尾巴对阴门周围消毒，输精器插入阴道底部，注入精液，完成输精。

1.5.3 .2子宫颈内口输精 母羊倒立保定，阴门周围消毒，阴道内慢慢插入开膣器，寻找子宫颈口，后将输精器插入到子宫颈口内0.5～1.0 cm深处，注入精液，完成输精。保定员拍打母羊股部一掌，使其子宫颈收缩，以防精液外流，影响母羊受胎率［5］。

1.5.3 .3腹腔镜子宫角输精 输精前12 h母羊禁食。母羊仰卧保定，剪去乳头近腹部被毛，消毒，腹中线右侧2～3 cm处纵切，插入套管针，充入适量CO2，向腹腔伸入内窥镜，观察子宫角及排卵情况；腹中线左侧相同部位切口，用牵引钳将有黄体发育一侧的子宫角拉出，生理盐水冲洗，子宫角远端1/3处刺破子宫壁，输入精液，放回子宫角，取出器械，缝合，肌肉注射土霉素3 mL（消炎），完成输精。

1.5.4 输精后的管理与观察 人工授精完成后，对母羊维持较高营养水平的日粮，随时观察母羊状态，减少刺激，避免应激。配种一周后，要特别注意观察母羊的返情情况，对返情母羊进行追配。

1.5.5 妊娠鉴定 人工授精后，对未返情的母羊第28天时利用直肠探头测孕仪进行孕检，并详细记录妊娠情况。

1.6 数据分析

试验数据处理、统计、图表制作采用Excel 2007软件，结果运用SPSS 17.0软件进行卡方检验分析。

2 结果与分析

2.1 澳洲白绵羊不同精液剂型对湖羊情期受胎率的影响

由表1可知，通过常规部位子宫颈内口输精，采用冷冻精液、4℃冷却精液和鲜精的第1情期受胎率分别为 66.7%、81.2%、88.0%，组间均呈极显著差异（P＜0.01）；情期受胎率分别为 66.5%、80.3%、87.8%，组间也均呈极显著差异（P＜0.01），与第1情期受胎率相比均有所降低；3组试验母羊的受胎率分别为88.7%、95.4%、98.3%，其中Ⅲ组鲜精的受胎率最高，与Ⅰ组间呈极显著差异（P＜0.01），与Ⅱ组间呈显著差异（P＜0.05），而Ⅱ组与Ⅰ组间呈极显著差异（P＜0.01）。

表1不同精液剂型对湖羊母羊情期受胎率的影响

2.2 不同输精部位对湖羊情期受胎率的影响

由表2可知，不同输精部位对母羊受胎率也有影响。采用鲜精，通过阴道底部、子宫颈内口和腹腔子宫角进行输精的第1期受胎率分别为74.1%、85.8%、95.7%，组间均呈极显著差异（P＜0.01）；情期受胎率分别为72.9%、86.4%、95.1%，组间也均呈极显著差异（P＜0.01）；受胎率分别为91.8%、98.7%、99.2%，其中腹腔子宫角受胎率最高，与Ⅳ组间呈极显著差异（P＜0.01），与Ⅴ组间差异不显著（P＞0.05），但Ⅳ组与Ⅴ组间呈极显著差异（P＜0.01）。

表2不同输精部位对母羊情期受胎率的影响

3 讨论

3.1 澳洲白绵羊不同精液剂型对母羊受胎率的影响

近年来，很多研究表明精液剂型影响母畜的受胎率。刘桂娟等［6］研究表明，鲜精子宫颈口输精母羊受胎率（53.33%）明显优于冻精人工授精的受胎率（30.61%）。乌达巴拉等［7］验证，鲜精子宫颈口人工授精母羊的受胎率（76.68%）极显著高于冻精子宫颈口的受胎率（57.05%）（P＜0.01）。赵有璋［4］提出，新鲜精液、低温保存和冷冻精子到达受精部位的能力分别为0.8～1分、0.5～0.8分、0.4分，若要提高冻精受胎率，在输精时应注重输精部位和输精次数。本试验对冷冻精液、4℃冷却精液、鲜精3种精液剂型通过常规子宫颈内口人工输精对湖羊母羊情期受胎率进行比较研究，结果表明，鲜精的情期受胎率和平均受胎率均最高，其中情期受胎率87.8%，与冷冻精液（66.5%）和4℃冷却精液（80.3%）之间均呈极显著差异（P＜0.01）；平均受胎率98.3%，与冷冻精液（88.7%）之间差异极显著（P＜0.01），与 4℃冷却精液（95.4%）之间差异显著（P＜0.05）。鉴于以上研究成果，为提高湖羊母羊的情期受胎率，在保证单次输精的平均有效精子浓度达3 000万个以上［8］，优先选择鲜精，其次为4℃冷却精液，以提高母羊人工授精的受胎率。

尽管鲜精和4℃冷却精液的情期受胎率较高，但由于精子有效存活期较短（鲜精一般4 h，冷却精液一般在12 h以内［9］），远距离运输配种会降低精子活力，影响母羊受胎率；而冷冻精液活力具有较高的稳定性且不受地域限制，有效保存时间达10年以上（澳大利亚Salamon用保存11年的绵羊冻精进行子宫颈输精，产羔率达55%），可省去因引进优质种公羊的高额成本［4］。因此，鲜精、4℃冷却精液、冻精这3种精液剂型各具其优缺点，应根据当地各养殖场的具体养殖状况选择适宜的精液剂型。

3.2 不同输精部位对母羊情期受胎率的影响

采用输精时有效精子数在4 000万个以上的鲜精剂型，通过阴道底部、子宫颈内口、腹腔子宫角3个输精部位进行人工授精的情期受胎率分别为72.9%、86.4%、95.1%，组间均呈极显著差异（P＜0.01）；但母羊的平均受胎率却是子宫颈内口输精（98.7%）极显著高于阴道底部输精（91.8%）（P＜0.01），与腹腔子宫角输精（99.2%）无显著性差异（P＞0.05）。多项研究表明［6-7，10］，腹腔镜子宫角输精效果要比阴道（受胎率较低）和子宫颈口输精效果好很多，这可归结为绵羊子宫颈较为复杂的结构，精液不能到达子宫颈深部，而腹腔镜子宫角深部输精可逾越这种生理结构上的障碍，提高精子进入输卵管壶腹部的密度，增加精卵结合几率，从而提高了受胎率。虽然采用子宫角深部输精可大大提高母羊的情期受胎率，但平均受胎率差别不明显，而且此项技术要想取得较高的受胎率，其前提是要保证拥有高水平的技术人员，并且操作环境要保证无菌，否则易损伤子宫粘膜，引起感染，影响母羊受孕。

4 小结

综上所述，在满足单次输精的平均有效精子浓度达3 000万个以上的条件下，采用腹腔子宫角深部鲜精的输精方式，可有效提高母羊的情期受胎率。但从经济效益、技术人员、外界环境等方面综合考虑，最佳、最契合生产实际的人工授精方式则是通过母羊子宫颈内口输入鲜精剂型，此项技术既省时省力，又省成本，同时受胎率仅比腹腔子宫角输鲜精的受胎率低0.5%。