人乳头瘤病毒DNA检测在宫颈癌前病变筛查中的应用

伍艳卉

(广州医科大学附属顺德医院 佛山市顺德区乐从医院妇产科，广东 佛山 528315)

宫颈癌是妇科发病率仅次于乳腺癌的常见生殖道恶性肿瘤之一[1]。人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)是一种球形的DNA病毒，感染后可导致人皮肤黏膜鳞状上皮增殖[2]。持续感染高危型HPV可发展为宫颈癌前病变，最终发展为宫颈癌，这一过程大概用时13年[3]。大多数妇女感染后，会在9个月左右自行消失，少部分妇女会持续感染，提升癌前病变风险，严重危及患者生命。因此，对HPV感染者进行早期诊断，对指导后续治疗尤为重要[4]。HPV DNA检测是临床常用的检测方法，可直接反映宫颈感染HPV的情况[5]。本研究选取我院收治的宫颈癌前病变疑似患者100例，旨在观察HPV DNA检测在宫颈癌前病变筛查中的应用价值。

1 对象与方法

1.1 研究对象

纳入标准：①阴道分泌物增多；②接触性出血；③已婚或有性生活史；④检查前3 d无性生活且未用药物进行阴道清洁者；⑤本研究经医院伦理委员会批准，研究对象签署知情同意书。排除标准：①有宫颈手术史；②妊娠或哺乳期女性；③合并其他肿瘤或血液疾病者；④急性生殖道炎症；⑤精神异常，不能配合检查者。

本组纳入2016年4月至2019年6月我院收治的宫颈癌前病变疑似病例100例，年龄20～55岁，平均(30.23±5.11)岁；包括宫颈上皮内瘤变(CIN)?疑似病例34例、CIN Ⅱ疑似病例28例、CIN Ⅲ疑似病例23例、宫颈浸润癌疑似病例15例。

1.2 方法

1.2.1样本采集 采用检查专用的宫颈刷在宫颈内鳞柱状上皮交界处顺时针旋转5圈，将采样完成的宫颈刷放置于专用的保存试管中进行刷洗，然后封管，放置于-20℃的环境中保存待测(禁止反复冻融)。

1.2.2HPV DNA检测 取出待测样本后使探针杂交，信号放大后混合底物及其催化剂，进行底物发光反应后放入冷光仪中检测。HPV DNA检测阳性标准：样本中HPV DNA含量不低于1.0 pg/mL。

1.2.3病理检测 用10%的福尔马林固定标本，取1.5 cm×1.5 cm×0.2 cm的病理组织，分别用不同纯度的乙醇溶液脱水2 h，再用二甲苯溶解石蜡，切片厚度为4～6 mm，染色后封片。将待测样本进行病理检查，检查结果分级，包括CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CIN Ⅲ和宫颈浸润癌。以病理结果为确诊结果。

1.3 统计学方法

应用SPSS21.0统计学软件进行分析，计数资料以率表示，两组比较采用c2检验；以病理结果为确诊结果，对比两组检测对宫颈癌前病变的灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值及阴性预测值。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种检验方法阳性率比较

HPV DNA检测HPV阳性率为86.0%(86/100)，高于宫颈刮片筛查的52.0%(52/100)，差异有统计学意义(χ2=27.020，P=0.000)。

2.2 HPV DNA检测与病理诊断结果比较

100例宫颈癌前病变疑似患者病理诊断结果显示，CIN Ⅰ 21例、CIN Ⅱ 16例、CIN Ⅲ 13例、宫颈浸润癌7例。HPV DNA检测显示，CIN Ⅰ16例、CIN Ⅱ 12例、CIN Ⅲ 10例、宫颈浸润癌6例。见表1。

表1 HPV DNA检测与病理诊断结果比较(例)

2.3 HPV DNA检测宫颈癌前病变的评价

HPV DNA检测CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CIN Ⅲ、宫颈浸润癌的特异度、灵敏度、阳性预测值、阴性预测值、Kappa值见表2。

表2 HPV DNA检测宫颈癌前病变的评价

3 讨论

近年来，宫颈癌发病率显著升高，HPV病毒持续感染是女性宫颈癌发病的高危因素之一[6-7]。研究表明，HPV感染是宫颈癌前病变和宫颈浸润癌发生的必要条件[8]。HPV感染者一般无明显临床症状，极易被忽视，不少人在潜伏感染期后可能自然转阴，若高危型HPV持续感染可能导致宫颈癌前病变，威胁患者生命安全[9]。因此，定期进行HPV的检测和基因分型对于预防控制宫颈癌的发生发展具有重要意义[10]。目前，HPV的检测方法包括PCR法、荧光原位杂交法、斑点印迹法、HPV DNA检测等，其中HPV DNA检测利用杂交捕获信号放大的原理检测多种高危型HPV，可分析不同亚型HPV感染状况，克服了宫颈刮片、细胞检验等方法的缺点，结果可靠、操作简单、干扰因素少，既适用于临床HPV诊断工作，也适用于大规模宫颈癌前病变的筛查[11-12]。

本研究中HPV DNA检测HPV阳性率高于宫颈刮片筛查，充分说明在进行宫颈癌前病变的筛查中，HPV DNA检测是一种极为高效、简便的筛查方法，对相关疾病的检测更为有效、准确，有利于临床诊断。李琪[13]研究表明，在宫颈癌前病变筛查中，HPV-DNA检测的阳性率较高。本研究中HPV-DNA检测CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CIN Ⅲ、宫颈浸润癌的灵敏度在75.00%～85.71%，特异度在69.23%～87.50%，这与陶志梅等[14]研究结果一致，表明HPV-DNA检测具有较高灵敏度和特异度，也提示该筛检方法真实性较高。本研究中HPV-DNA检测的阳性预测值在80.00%～85.71%，阴性预测值在64.28%～87.50%，说明筛检试验阳性者患宫颈癌前病变的可能性大，阴性者患宫颈癌前病变的可能性小，提示HPV DNA检测的预测性较好。潘敏等[15]研究发现，在早期宫颈癌及癌前病变诊断中，HPV DNA检测的阳性预测值高于液基细胞学检测。

综上所述，HPV DNA检测在宫颈癌前病变筛查中的特异度、敏感度较好，可作为临床宫颈癌前病变筛查的重要方法。但由于本研究样本量较少，所得结论存在一定的局限性，日后还需进行更大样本量的研究讨论。