DRD2(-141C Ins/Del)多态性与利培酮所致精神分裂症患者高泌乳素血症的相关性分析

邬俊福，张运才，彭红波

0 引言

精神分裂症是一种慢性精神紊乱疾病，发病率占精神障碍患病率的50%左右，临床症状涉及感知能力、思维、情感等多方面障碍[1-3]。研究表明，多巴胺系统的过度表达是造成精神分裂的原因之一[4]，多巴胺D2受体在多巴胺通路中发挥重要功能[5]，常用利培酮治疗，效果显著，但也有明显不良反应，即高泌乳素血症。长期高泌乳素对女性造成闭经、溢乳、月经不调等不良影响，极大抑制了利培酮的长期应用[6]。DRD2-141C Ins/Del多态性为D2基因启动子区域-141位点上胞嘧啶的插入/缺失突变，可能与泌乳素的升高有一定联系[7]。本研究应用PCR-LDR检测基因多态性，探讨DRD2-141C Ins/Del多态性与高泌乳素血症之间的相关性,从基因水平为精神分裂症患者临床合理用药提供指导。

1 临床资料

1.1 一般资料 收集2013年6月至2018年10月148例我院汉族精神分裂症患者作为研究对象。入组标准：在患者本人或监护人知情同意的情况下，自愿参加本研究，征得同意后抽取其外周静脉血样；符合中国精神障碍分类与诊断标准第3版(CCMD-3)精神分裂症诊断标准[8]；入组前1个月内未服用过抗精神病药、抗抑郁药等影响本实验结果药物；年龄16～58岁；利培酮单药治疗6周，起始剂量1 mg/d，在1周左右的时间内逐渐将剂量加大到2～4 mg/d，第2周内可逐渐加量到4～6 mg/d，此后维持此剂量不变，或根据个人情况进一步调整。每日剂量一般不超过10 mg。收集全部研究对象的临床资料。男性精神分裂症患者73例，年龄20～45岁，平均年龄(36.21±6.29)岁；女性75例，年龄21～53岁，平均年龄(37.19±7.12)岁。另选130例汉族体检健康者为对照组。本研究获得医院伦理委员会批准，研究对象知情并签署同意书。

1.2 血样采集 征求患者及监护人同意，采肘部静脉血5 ml，置于EDTA二钠抗凝管中，上下颠倒摇匀，记录研究对象信息，-20 ℃保存，现用现融，避免多次冻融。

1.3 基因分型 按常规方法提取基因组DNA。采用RFLP-PCR方法分析D2R2(-141C Ins/Del)多态性，引物采用primer 5.0设计，PCR引物序列为：5′-TCGTGGACGCCGTGATTCAGG-3′；5′-AGGTCTGACAACGGGTCAGGC-3′，引物由TaKaRa公司合成。PCR的反应条件：95 ℃预变性2 min，然后设定以下循环：95 ℃ 5 s，95 ℃ 15 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 15 s，共41个循环，72 ℃终延伸10 min。PCR产物长度为217 bp。D2R2(-141C Ins/Del)基因分型：取扩增产物10 μl，用5 μl BstN1限制性内切酶酶切，37 ℃处理4 h后，以15%聚丙烯酰胺凝胶电泳，EB染色，紫外灯下观察分型。分型标准：D2R2-141等位基因可被酶切为144 bp和160 bp两个片段。若两条等位基因均可被酶切，则基因型为-141C Ins/Ins；若两条等位基因均不能被酶切，则基因型为-141C Del/Del；若一条等位基因可被酶切，另一条等位基因不能被酶切，则基因型为-141 C Ins/Del。

1.4 泌乳素水平检测 使用EDTA真空采血管收集外周血后当天送交医院临床检验科进行检验。全血离心后分离血清，采用微粒酶免疫分析法对泌乳素含量进行测定。正常血清泌乳素的范围为2.64～13.13 ng/ml。

2 结果

2.1 遗传平衡性实验 Hardy-weinberg遗传平衡吻合度检验显示，研究组与对照组各基因型分布符合与等位基因频率上差异无统计学意义(χ2=2.20，df=1，P>0.05；χ2=1.95，df=1，P>0.05)，符合遗传平衡差异。见表1。

2.2 精神病患者人口学因素与DRD2(-141C Ins/Del)多态性分析 DRD2(-141C Ins/Del)基因多态性在性别、年龄、婚姻史、家族史、起病形式、有无精神创伤史等方面差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表1 遗传平衡表

注：HWE代表哈迪-温伯格平衡定律检验

2.3 精神分裂症患者接受利培酮治疗前后泌乳素水平比较 研究组患者接受利培酮治疗6周后，血清泌乳素水平较用药前显著升高[(78.26±10.13)ng/ml vs.(20.16±3.27)ng/ml]，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.4 DRD2(-141C Ins/Del)多态性与利培酮所致高泌乳素血症相关性 治疗前，不同基因型泌乳素水平差异无统计学意义(P>0.05)。患者经利培酮治疗后，不同基因型泌乳素水平变化差异有统计学意义，Del携带者升高幅度显著低于Ins携带者，且Del/Del型泌乳素升高幅度最低(P<0.05)。见表3。

3 讨论

精神分裂症是一种严重的精神类疾病，病因尚未阐明，占精神障碍终身患病率的50%左右[9]，是精神疾病中患病率最高的一种。精神分裂症多发生于青壮年人群，重度刺激可诱发发病，临床症状涉及感知能力、思维、情感等多方面障碍，部分患者发展为精神残疾，少数患者通过治疗可痊愈或基本痊愈。研究表明，额前皮质多巴胺的活性变化是精神分裂症的主要病因猜想之一。多巴胺D2受体在多巴胺通路中发挥重要功能。研究表明，DRD2基因多态性与精神分裂症密切相关。Frank等[5]报道，260例日本精神分裂症患者中，-141C 缺失的频率为0.14，312例对照中，-141C缺失频率为0.22，OR=0.6，95%CI：0.44～0.81，P<0.001，该研究提示，-141C缺失是一种保护性因素,而-141C插入是一种遗传易感因素。Wang等[10]研究则得出不同结论，精神分裂症和DRD2-141C Ins/Del基因多态性之间没有统计学关联。王锦毓等[11]研究表明，DRD2-141C Ins/Del基因多态性与农村自杀未遂密切相关，表明DRD2-141C Ins/Del基因多态性与精神类疾病密切相关。本研究结果显示，D2R2基因-141C Ins/Del基因型分布频率在研究组与对照组之间差异无统计学意义。

利培酮是苯并异恶唑衍生物，是治疗急性和慢性精神分裂症的常用药物，对焦虑、抑郁等情感问题有较好的疗效。活性成分为选择性单胺能拮抗剂，可与多巴胺D2受体特异性结合[12]，但其有明显不良反应[13]，即易导致患者泌乳素升高，形成高泌乳素血症。长期高泌乳素对女性造成闭经、溢乳、月经不调等不良影响，对男性亦可导致性功能障碍等后果，极大抑制了利培酮的长期应用[14]。研究表明，DRD2受体基因多态性与抗精神疾病药物所致锥体外系不良反应密切相关[15]，因此，研究DRD2(-141C Ins/Del)多态性与利培酮所致精神分裂症患者高泌乳素血症的相关性确有必要。

表2 一般人口学资料与DRD2(-141C Ins/Del)多态性分析

表3 基因多态性与高泌乳素变化相关性

注：*与Ins/Ins型比较，P<0.05；#与Ins/Del型比较，P<0.05

本实验Hardy-weinberg遗传平衡吻合度检验显示，所选取研究对象研究组与对照组各基因型分布符合与等位基因频率上差异均无统计学意义，符合遗传平衡差异，说明本研究样本来自随机婚配大群体，无近亲婚配、迁移、偶然因素的干扰。本研究精神分裂症患者经利培酮治疗后，泌乳素水平发生明显升高，与韩勇等[16]研究结果类似。推测原因可能为部分精神分裂症患者有额叶5-HT功能亢进，抑制了额叶多巴胺功能，继而又引起皮质下多巴胺功能亢进，从而使这部分患者泌乳素水平偏低，应用利培酮后，抑制了5-HT功能，解除了皮质多巴胺功能的抑制，从而抑制了皮质下多巴胺功能，而引起了血浆泌乳素水平的升高。Alladi 等[17]实验结果表明，289例精神分裂患者利培酮诱导的高催乳素贫血症中，DRD2-141 Ins/Del和Del/Del多态性的发生与利培酮的催乳素水平增加显著相关；而乔屹等[18]未发现-141C Ins/Del基因多态性与泌乳素水平的变化有明显相关性。不同结果可能与人群选择差异有关。本研究结果显示，DRD2-141C Ins/Del基因多态性与泌乳素水平的变化有明显相关性，Ins携带者治疗前后血清泌乳素变化幅度较低，且Ins/Ins型升高幅度最低，表明DRD2-141C Ins/Del多态性中Ins/Ins基因型在接受利培酮治疗后，造成泌乳素升高作用最轻，有利于较长时间采用利培酮治疗，达到更好疗效。

综上所述，DRD2-141C Ins/Del基因多态性参与了利培酮治疗精神病患者导致泌乳素水平上升的病理过程，Ins/Ins、DRD2-141C Ins/Del多态性有望成为改善利培酮所致高泌乳素的生物学标志。精神分裂症通常是由基因与基因、基因与环境之间相互作用形成的复杂性状疾病，单独分析某个位点的多态性往往不能得出准确结果，因而今后将对多个位点进行联合检测，以期得到更全面的认识。