水煮薇菜中食品添加剂的检测

王建化，王英平，孙高飞，谷建昀，张玲玲*

(1.青岛农业大学 海都学院，山东 莱阳 265200；2.黄岛海关，山东 黄岛 266000； 3.烟台市富林矿山机械有限公司，山东 招远 265400)

薇菜作为食用蔬菜已有悠久的历史，过去在荒年是救荒草，现已步入高档餐桌，其经济效益为一般蔬菜的4～5倍。野生薇菜鲜嫩味美，营养丰富，未展开的嫩叶尤为上品。薇菜既可鲜食，又可腌渍、干制，是向日本出口的大宗山珍野菜。水煮薇菜中主要含有防腐剂和甜味剂[1，2]，由于日本的标准严苛，因此检测出口食品中的食品添加剂含量达到标准，对于国内食品添加剂含量的检测也是一种保障。

我国标准检测方法有很多，如滴定法、比色法、薄层色谱法、气相色谱法等[3]，但都是对样品分别处理进行不同方法的测定，没有同时检测的方法。现在相对先进的检测机构都在研究这5种食品添加剂同时检测的方法，针对于不同的基质使用不同方法，目前按照检测样品的不同大致可以分为肉食品、饮品、乳制品、含油量高的基质和普通基质等检测方法[4]。在我国国标中，最早出现对于食品添加剂检测的是在2003年，那时的检测针对于单独的添加剂且方法相对落后。本法采用一种简单的前处理方法，使用的样品为水煮薇菜，基质简单易得，用高效液相色谱法对5种添加剂同时进样，一次检测得到多种结果，大大节省了人力、物力和时间，结果准确可靠。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

甲醇(色谱纯):Fisher Scientific公司；乙酸铵(分析纯)、称取1.54 g乙酸铵加水溶解并稀释至1000 mL，静置，过0.45 μm孔径滤膜[5]，盐酸(分析纯)：量取100 mL盐酸，与100 mL水充分混合，静置)；氨水、乙醚(分析纯)：天津市科密欧化学试剂有限公司;实验用水为屈臣氏蒸馏水。

1.2 仪器与设备

LX-130离心机(控温) 日本TOMY公司；UW402S电子天平 梅特勒-托利多有限公司；UMV-2多管涡旋混合器 北京优晟联合科技有限公司；Agilent-1100高效液相色谱仪 安捷伦公司；50 mL离心管、10 mL移液管、移液枪、一次性吸管、pH试纸、0.45 μm水性滤膜等。

1.3 样品前处理

大多数样品中存在许多大分子物质，如蛋白质、脂肪等[6]，需要使用沉淀剂进行净化处理，如乙酸锌、亚铁氰化钾等，但本样品不含有上述大分子物质，故无需进行净化操作。

本法为反提法，即将样品中的食品添加剂先正提取到乙醚层中，后用水反提取至水层中，定量检测水层中的食品添加剂。

将水煮薇菜经破碎处理后，称取2.0 g样品于50 mL离心管中，加水10 mL和0.5 mL盐酸(1+1)进行酸化处理。加入乙醚8 mL震荡提取2次(共16 mL)，合并提取液。将提取液震荡，离心(4000 r/min，5 min)，弃掉下层水层，向提取液中准确加入10.0 mL水，加氨水调节pH为7～8，震荡离心(4000 r/min，5 min)，取下层水层过0.45 μm水性滤膜。

1.4 标准品配制

标准物质纯品溶液稀释，配制成10 mg/L浓度的储备液，将储备液稀释成0.01,0.03,0.05,0.07,0.09,0.10 mg/mL的标准溶液[7]，用于测定标准曲线。

1.5 色谱柱条件

Waters SymmetryShield C18(150 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱，流动相为0.02 mol/L乙酸铵-甲醇(100+5)缓冲溶液，检测波长为220 mm，紫外检测器，柱温25 ℃，流速1 mL/min[8]，进样量10 μL。

1.6 精确度测定

为保证试验精确度，取6份样品分别编号1，2，3，4，5，6，各称取2 g于50 mL离心管中，加入10 mL水和0.5 mL盐酸(1+1)进行酸化处理。分别加入8 mL乙醚提取2次(共16 mL)，合并提取液经震荡离心(4000 r/min) 5 min，弃去下层水层，准确加入10.0 mL水，用氨水调节pH为7～8，震荡离心(4000 r/min，5 min)，取下层水层过0.45 μm水性滤膜。

1.7 准确度测定

为保证试验方法提取到的添加剂含量的有效性，人为地向样品中添加定量标准物质进行检测，通过回收率判断样品的检测结果是否有效。大量实验证明，当回收率在85%～110%之间时，结果可靠。

向样品中加入1 mL 1 mg/L的混标溶液，与样品进行相同的前处理步骤，经0.45 μm滤膜过滤后进仪器检测。

2 结果与分析

2.1 标准曲线的建立

对混标稀释后浓度为0.01,0.03,0.05,0.07,0.09,0.10 mg/mL的标准系列溶液进行测定，以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，分别得到回归方程，见表1。安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢醋酸钠这5种添加剂的出峰图见图1，按照出峰的时间分别是安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢醋酸钠。

表1 线性方程和相关系数Table 1 Linear equations and correlation coefficients

由表1可知，该混标溶液出峰时间分散，在检出限浓度范围内呈良好线性关系。

图1 10 mg/L标准品溶液谱图Fig.1 Spectrum of 10 mg/L standard solution

由图1可知，5种添加剂出峰时间间隔明显，且峰不存在重合现象，即如果样品中含有上述5种添加剂，谱图中会在相应位置出峰。

2.2 样品测定

对水煮薇菜使用反提法检测食品添加剂含量，其结果见表2，谱图见图2。

表2 样品添加剂含量Table 2 Content of sample additives

图2 样品谱图Fig.2 Sample spectrogram

对比图1和图2可以看出，图2中的谱图没有在相应位置出峰，所以水煮薇菜样品中不含有安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢醋酸钠这5种食品添加剂。

2.3 精确度试验

为保证样品的精确度，分别对水煮薇菜进行6次平行试验，试验结果见表3。

表3 精确度试验Table 3 Test of precision

由表3可知，进行6次平行试验均无检出添加剂，可能的情况是含有添加剂，但含量低于检出限导致未检出；另一种情况是均不含添加剂，故无检出。上述2种情况均达到标准，结果判定为水煮薇菜不含有安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢醋酸钠5种添加剂。

2.4 准确度试验

为了保证检测的准确度，进行回收试验[9，10]，标准曲线见图3，结果见表4。

图3 回收样品谱图Fig.3 Spectrum of recovered samples

名称保留时间(min)线性方程相关系数回收率(%)安赛蜜4.789Y=30.07804x+4.409060.9999189.7糖精钠6.679Y=22.31909x-3.229500.99986102.3苯甲酸8.102Y=33.34349x+7.878380.9999495.5山梨酸11.206Y=54.49386x-5.473310.9999491.9脱氢醋酸钠12.356Y=39.72542x-3.220050.9997699.6

由图3和表4可知，人为加入含有混标的样品检测结果是含有添加剂的，且同一种方法回收得到的添加剂含量不同。回收率可以证明该方法得到的结果可信，因为在前处理过程中提取得到的添加剂会有一定程度的损失；当回收率低于100%时证明提取不完全或者有损失；当回收率高于100%时，说明样品中同时也含有该添加剂。本法的相关系数均在0.999以上，回收率在89%以上，说明试验结果可靠。

2.5 结果计算

样品中山梨酸、苯甲酸、脱氢醋酸钠、安赛蜜、糖精钠的含量按照下式计算[11，12]：

式中：X为样品中食品添加剂含量，mg/kg；A为进样体积中食品添加剂的含量，mg；V为试样稀释体积，mL；m为试样质量，g。

3 讨论

试验表明：对样品进行破碎、浸提后，使用Waters SymmetryShield C18(150 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱，流动相为0.02 mol/L乙酸铵-甲醇(100+5)缓冲溶液，检测波长为220 mm，紫外检测器，柱温25 ℃，流速1 mL/min，进样量10 μL时，混标中安赛蜜、糖精钠、山梨酸、苯甲酸、脱氢醋酸钠的出峰时间分别为4.785，6.681，8.117，11.310，12.987 min，样品中未检出。不同回收率表明在实验操作过程中，会有不明原因的损失，可能是提取时间不足，可能是提取试剂还有待改善，还有可能是检测时间不及时，导致部分添加剂降解。在国标中以水煮薇菜为例，使用反提法检测5种食品添加剂，方法简便，可以节约大量人力、物力，节约成本和资源，加快工作效率。