HPLC法测定30种市售果味饮料中苯甲酸、山梨酸的含量

陈悬悬+李琴+刘雪梅+吴芝园

摘 要：本研究采用高效液相色谱法检测了30种常见果味饮料中苯甲酸、山梨酸的含量。结果表明：果汁饮料中苯甲酸、山梨酸含量分别在0～100μg/mL 范围内呈线性关系（r>0.9998），RSD 为 0.38%和0.26%。用该方法测定的30种市售饮料中均未检出苯甲酸，7种饮料被检出山梨酸，均未超过最大添加量。该方法精密度、重复性和准确度均良好，可用于果汁饮料中苯甲酸和山梨酸含量的测定。

关键词：HPLC；果汁饮料；苯甲酸；山梨酸

食品中该两项防腐剂的检测方法主要有气相色谱法[2]、高效液相色谱法[3-5]和紫外分光光度法[6]等。本研究利用高效液相色谱法对30种常见果味饮料中苯甲酸和山梨酸的含量进行了测定。该方法成本低、步骤简单，适合所有果味饮料的測定。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

普源3000 高效液相色谱仪（配有UV检测器）：北京普源；AP-01P真空泵：塞恩斯公司；As120型超声波清洗器：塞恩斯公司；砂芯过滤装置：塞恩斯公司；0.45μm 微孔滤膜（水系和有机系）和 0.45μm针头式过滤器（水系和有机系）：上海亚新；CP2250电子天平：塞特利斯公司。

1.2 试剂

甲醇（色谱纯）：天津大茂公司；氨水（分析纯）：天津大茂公司；乙酸铵（分析纯）：天津大茂公司；苯甲酸标准品：南京春秋生物技术有限公司（CAS No.65-85-0）；山梨酸标准品：南京春秋生物技术有限公司（CAS No.110-44-1）；果汁饮料样品：汇源等品牌果汁，均来源于当地大型超市。

2 方法

2.1 流动相与标准液的配制

2.1.1 乙酸铵溶液配制

精密称取乙酸铵1.54g，加水溶解后定容至1000ml，并用0.45μm微孔滤膜抽滤，超声脱气。

2.1.2 标准储备液的配制

精密称取0.1001g苯甲酸钠标准品和0.1055g山梨酸钾标准品，分别用蒸馏水溶解并定容至100ml，其含量均为1.00mg/ml。

2.2样品前处理

精密量取市售的果汁饮料少量于烧杯中，用氨水（1+1）调节pH值至中性，精密量取2ml，至10ml量瓶，用超纯水定容至刻度，经水系针头式过滤器（0.45μm）过滤，备用。

2.3 色谱条件

色谱柱：C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相：甲醇-乙酸铵（5：95）；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长230nm；进样体积10μl；实验用保留时间定性，外标法定量。

3 结果与分析

3.1 系统适用性实验

在2.3的色谱条件下，用60μg/ml苯甲酸和山梨酸标准混合溶液进样，记录色谱图，如图1所示。

3.2 精密度实验

取60μg/ml的标准混合液，由2.3的方法，取 10μl注入液相色谱仪，进行精密度试验，进行6次重复测定，记录峰面积，计算RSD。见表2

3.3线性范围实验

将浓度为0、20、40、60、80、100μg/ml的混合标准使用液，各取10μl注入液相色谱仪，记录色谱峰面积。并以各标准品浓度（xμg/ml）为横坐标，峰面积y为纵坐标进行线性回归，得苯甲酸和山梨酸的回归方程及相关系数，见表2。

3.4样品测定

取市售30种果汁饮料样品按照2.2的样品处理方法和2.3的色谱条件进行分析，得到30种样品的色谱谱图，记录峰面积，计算样品中苯甲酸和山梨酸含量。

4 结果与结论

通过实验研究和计算发现，被检的30种市售果汁饮料均未检出苯甲酸，有7个样品检出山梨酸，但其含量均未超出国家标准。

实验中利用的HPLC法操作简单、结果准确、成本低廉，具有较好的稳定性和线性范围，可满足常规对这2种添加剂的检测需要。

基金项目 江苏省大学生创新创业训练计划（201612688009Y）

参考文献

[1] GB2760-2014，食品添加剂使用标准[S].

[2] 徐陆妹.气相色谱法快速检测食品中的苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸[J].中国卫生检验杂志，

2011，21（9）：2199-2201.

[3] 王丽莉，宋 宇，刘连利.HPLC法快速测定软饮料中苯甲酸、糖精钠、山梨酸的含量[J].渤海大学学报，

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[4] 胡丽华.HPLC法同时测定食品中的乙酰磺胺酸钾、苯甲酸、山梨酸、糖精钠[J].中国卫生检验杂志，2013，

23（7）：1690-1692.

[5] 冯金荣，彭剑峰，刘 芳.HPLC法测定酸奶中苯甲酸和山梨酸[J].萍乡高等专科学校学报，2012，29（3）：

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[6]王金贵，郑 霞.紫外分光光度法测定苯甲酸含量影响因素的探究[J].青海师范大学学报（自然科学版），

2016，21-28.endprint