注射用盐酸万古霉素与三种常用电解质注射液的配伍稳定性考察

刘 钢，秦 侃，袁 杰，吴文华

0 引言

万古霉素(Vancomycin)属糖肽类抗菌药物，是目前治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、表皮葡萄球菌和耐药肠球菌引起重症感染的一线用药[1-2]，临床主要用于上述致病菌引起的败血症、感染性心内膜炎、骨髓炎、关节炎、灼伤、手术创伤等浅表性继发感染等的治疗。万古霉素临床应用中国专家共识(2011版)中推荐的临床常用静脉输液配制方法为：注射用盐酸万古霉素0.5 g用10 ml灭菌注射用水溶解后，再用5%葡萄糖溶液或0.9%氯化钠溶液载体稀释成最终浓度为5 g/L的溶液，供静脉滴注[3]。

关于混合糖电解质注射液(MSEI)、转化糖电解质注射液(ISEI)、钠钾镁钙葡萄糖注射液(SPMCGI)，临床常通过非口服途径为患者补充，以维持水分、电解质和能量。重症感染的患者容易出现电解质紊乱，往往需要补充此类电解质注射液[4]，但是目前除了万古霉素临床应用中国专家共识(2011版)中推荐的静脉输液配制方法外，尚没有万古霉素与上述3种电解质注射液的相关配伍稳定性报道，因此,本实验模拟临床用药浓度，旨在不同条件下考察万古霉素与上述3种电解质注射液的配伍稳定性，以期为临床用药提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1260series四元梯度高效液相色谱仪和DAD检测器(美国Agilent公司)，PB-10型酸度计(德国Sartorius公司)，XSE204型电子天平(瑞士METTLER TOLEDO公司)，H.H.S电热恒温水浴锅(上海医疗器械五厂)。

1.2 试药 万古霉素对照品(中国食品药品检定研究院，批号：130360-201302)，注射用盐酸万古霉素(美国礼来公司，批号：C778985)，混合糖电解质注射液(江苏正大丰海制药有限公司，批号：1712252)，转化糖电解质注射液(上海海尼药业有限公司，批号：1801143)，钠钾镁钙葡萄糖注射液(江苏恒瑞医药股份有限公司，批号：170421EK)，磷酸二氢钾(国药集团化学试剂有限公司，批号：20140114)。乙腈为色谱纯，水为纯化水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Thermo Scientific C18-ODS(100 mm×2.1 mm,3 μm)；流动相：乙腈-0.05 mol/L KH2PO4(pH 3.6)(6∶94)；柱温：30 ℃；检测波长：236 nm；流速：0.8 ml/min；进样量：10 μl；万古霉素对照品、空白溶液和供试品溶液的色谱图见图1。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取万古霉素对照品24.9 mg，置25 ml容量瓶中，流动相溶解定容至刻度，摇匀即得对照品溶液。

2.3 空白溶液的制备 向未含有注射用盐酸万古霉素的空白小瓶中加入10 ml注射用水，平行制备3份，再分别用MSEI、ISEI、SPMCGI溶解定容至100 ml容量瓶中，摇匀后在室温下避光保存。

2.4 供试品溶液的制备 模拟临床用药浓度，向含有注射用盐酸万古霉素0.5 g的小瓶中加入10 ml注射用水溶解，平行制备3份，再分别用MSEI、ISEI、SPMCGI溶解定容至100 ml容量瓶中，摇匀后在室温下避光保存。

2.5 标准曲线的制备 精密吸取对照品溶液1 ml，置于10 ml容量瓶中，流动相溶解定容至刻度，摇匀，HPLC分别自动进样1、2、5、10、15、20 μl，按“2.1”项下方法测定万古霉素的含量，以万古霉素浓度为横坐标、峰面积为纵坐标，得回归方程Y=1 548.8 X+4.201 4(r=0.999 9，n=6)，表明万古霉素在0.099 6～1.992 0 μg范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液，按“2.1”项下方法分别进样6次，测定万古霉素的含量，结果RSD=0.93%。

2.7 重现性试验 精密吸取同一供试品溶液，按“2.1”项下方法分别进样6次，测定万古霉素的含量，结果RSD=1.27%。

图1 万古霉素对照品、空白溶液和供试品溶液的色谱图

注：A.万古霉素对照品，B.MSEI空白溶液，C.MSEI供试品溶液，D.ISEI空白溶液，E.ISEI供试品溶液，F.SPMCGI空白溶液，G.SPMCGI供试品溶液;1、2、3、4均为万古霉素

2.8 加样回收率试验 精密吸取已知含量的万古霉素供试品溶液0.5、1.0、1.5 ml和对照品溶液0.5、1.0、1.5 ml至100 ml容量瓶中，配制为低、中、高浓度各3份，按“2.1”项下方法测定万古霉素的含量，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果

2.9 配伍稳定性试验

2.9.1 外观、pH值变化 按“2.4”项下方法配制供试品溶液，于药液配好后即刻(0 h)及1、2、4、6、8 h取样，测定3种不同配伍液的pH值，同时观察配伍液外观及澄明度，结果见表2、表3。

2.9.2 含量测定结果 按“2.4”项下方法配制供试品溶液。将3种配伍液分别置于25 ℃和40 ℃恒温水浴锅中，采取避光和光照2种储存条件进行处理。分别按上述储存条件于药液配好后即刻(0 h)及1、2、4、6、8 h取样，测定3种不同配伍液中万古霉素的含量变化，以配制后0 h的含量为100%，换算出其他时间点的百分含量，结果见表4、表5。

表2 三种不同配伍液的pH值

3 讨论

3.1 含量测定方法的选择 《中国药典》(2015年版)中万古霉素项下的含量测定方法为抗生素微生物检定法。其对于医疗机构来说具有步骤繁琐、耗时长、结果受多种因素影响等缺点。高效液相色谱法具有灵敏度高、重复性好、对微量浓度样本具有高灵敏度等优点，更适合在实际工作中进行操作使用[5-6]，故本实验中选用高效液相色谱法进行万古霉素的含量测定。

表3 三种不同配伍液的外观及澄明度

表4 25 ℃下3种配伍液的相对百分含量变化(%)

表5 40 ℃下三种配伍液的相对百分含量变化(%)

3.2 流动相的筛选 本实验参考了多篇文献中的方法进行预试验，筛选了磷酸盐缓冲液的pH值(3.2、3.4、3.6、3.8)和浓度(0.025、0.05、0.1 mol/L)，结果显示，酸性越大、盐浓度越大，万古霉素的保留越强，分离越好；但酸性过大或盐浓度过高对色谱系统影响较大，故最终选定0.05 mol/L KH2PO4(pH 3.6)作为流动相中的磷酸盐缓冲液。

另通过预试验对2种流动相的比例进行了筛选，结果显示，采用乙腈-0.05 mol/L KH2PO4(pH 3.6)(6∶94)，溶剂峰和药物峰分离完全，无杂质干扰，峰形和主药保留时间较佳[7-9]。

3.3 对照品溶媒的选择 预试验过程中，选用甲醇溶解万古霉素对照品并进行含量测定，发现甲醇溶剂峰对万古霉素对照品主峰干扰较大，遂改用流动相溶解万古霉素对照品，对照品主峰峰形较好。

3.4 三种配伍液的稳定性 本实验通过对注射用盐酸万古霉素与3种常用电解质注射液的配伍稳定性考察，结果显示，三种不同配伍液在室温条件下8 h内外观及pH值均无明显变化；25 ℃下8 h内三种不同配伍液在避光、光照条件下万古霉素含量与初始含量相比均无明显变化；40 ℃下6 h后三种不同配伍液在避光、光照条件下万古霉素含量与初始含量相比均有小幅降低。

4 结论

高效液相色谱法可以用于万古霉素的含量测定，注射用盐酸万古霉素可以与三种常用电解质注射液配伍使用，但应控制环境温度，一般情况下不应在超过30 ℃的环境下配伍使用，并且配制后的溶液应尽量在6 h内使用。