江西省2005～2017年鲤春病毒血症病毒感染流行病学研究

田飞焱，欧阳敏，谢世红，徐节华，刘文珍，孟霞，银旭红，花麒

（江西省水产技术推广站，江西 南昌 330046）

鲤春病毒血症病毒（Spring Viremia of Carp Virus,SVCV）可引起鲤科鱼类大规模暴发鲤春病毒血症（Spring Viremia ofCarp,SVC），该病是一种急性、高致病性的传染性疾病，曾在欧洲很多国家发生，给当地鲤养殖业造成巨大的经济损失[1,2]。2003年以来我国不断检测到SVCV，在个别地区暴发SVC疫情，表明SVC在我国逐步蔓延[3,4]。SVC发生和传播对我国水产养殖业，特别是鲤科鱼类的养殖构成潜在威胁，因此深入研究其病原的自然感染率、地区分布、遗传变异等流行病学特征，对疾病的监测、防控及诊断试剂和疫苗的研发都具有重要意义。

本研究于2005—2017年间，应用细胞分离法和反转录聚合酶链式反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,PCR）方法监测了江西省一些重要渔场养殖鲤科鱼类SVCV，比较了不同地区SVCV分离株的分子特征，旨在摸清本省SVCV流行情况，提高疫病风险预警防控能力，保障江西省养殖业的持续健康发展。

1 材料与方法

1.1 样品来源

2005—2017 年春秋季，根据SC/T 7103-2008[5]的采样要求，组织县级水生动物防疫站在全省范围内的渔场采集鲤科鱼类活体样品，采样水温范围11～20℃，每个渔场每年只采集一份样品，每份样品采集数≥150尾（假定某一鱼类养殖群体≥100 000尾，2%感染率），依照GB/T15805.5-2008检测方法[6]进行检测。

1.2 病原监测

按照GB/T 15805.5-2008规范，将样品组织悬液接种到鲤上皮瘤细胞（EPC）中培养，观察细胞是否出现细胞病变效应（cytopathic effect,CPE）；用套式RT-PCR方法扩增SVCV的糖蛋白（G）基因片段，依照标准综合判定是否存在SVCV感染。引物序列为：SVCV-R2：5’-AGATGGTATGGACCCCAA TACATHACNCAY-3’；SVCV-R4：5’-CTGGGGTTT CCNCCTCAAAGYTGY-3’；SVCV-F1:5’-TCTTGGA GCCAA ATAGCTCARRTC-3’。其中F1和R2用于扩增714bp片段，而F1和R4则从中再扩增606bp的片段。

1.3 序列分析

阳性样品的PCR产物经基因测序后用DNAS-tar对测序结果进行核苷酸序列同源性分析，从GenBank中选取与阳性序列相似的参考毒株，用MEGA7.0软件采用邻位相连法（Neighbor-joining）构建进化树。

2 结果与分析

2.1 检测结果

2005—2017 年的春秋季在江西11个地市的69个县（市、区）随机采集、检测了576份样品（表1）。其中锦鲤样品64份，鲤样品113份，鲫Carassius auratus样品177份，草鱼Ctenopharynogodon idellus样品202份，草金鱼Carassius auratus样品2份，鲢Hypophthal michthys molitrix样品13份，鳙Aristichthysnobilis样品3份，鳊Parabramis pekinensis样品1份，刺鲃Spinibarbus caldwelli样品1份。共监测到SVCV阳性样品23份（表2），总的阳性检出率为3.99%，其中2009以前的5年仅2007年有2份阳性样品检出，2010年起阳性样品检出增多，其中2012—2016年连续5年均有阳性检出。

表1 2005～2017年江西省渔场SVCV监测情况Tab.1 SVCV surveillance in Jiangxi Province,China,from 2005 to 2017

2.2 流行特征

2.2.1 种类分布

本研究采样的（品）种类覆盖度较高，包含鲤科的锦鲤、鲤、草鱼、鲫、草金鱼、鲢、鳙、鳊和刺鲃，其中从锦鲤、鲤、草鱼、鲫中检出阳性样品数分别是4、2、3和14个，占各（品）种类样品数的6.25%、1.77%、1.48%和 7.91%，草金鱼、鲢、鳙、鳊、刺鲃样品中未检出阳性样品。鲫的阳性检出率最高，其次是锦鲤，鲤和草鱼阳性检出率相对较低。统计分析与χ2检验表明，鲫的SVCV的携带率与鲤（P＜0.05）、草鱼（P＜0.01）具有统计学意义，与锦鲤的SVCV的携带率差异不具有统计学意义（P＞0.05）。

2.2.2 季节分布

2005—2017 年在江西省春季采集样品312份，水温范围11～20℃，检出阳性15份，阳性检出率4.81%；秋季采集样品264份，水温范围11～20℃，检出阳性8份，阳性检出率3.03%。春、秋季的SVCV的阳性检出率差异不具有统计学意义（P＞0.05），即春秋季节SVCV的阳性检出率无显著差异（表2）。

表2 江西省渔场2005—2017年SVCV阳性样品信息Tab.2 Information regarding SVCV isolates in Jiangxi Province,China,from 2005 to 2017

2.2.3 遗传进化分析

根据SVCV G基因序列的遗传进化，SVCV分离株可分为4个基因亚型：Ⅰa、Ⅰb、Ⅰc和Ⅰd[7,8]。用MEGA7.0将获得的部分江西分离株的G基因部分序列和SVCV各基因型序列构建的遗传进化树表明，江西分离株与中国株772、461、A1、BJ0505-02、SVCV-265；亚洲株 D148、英国株 H264、G108；美国株 North Carolina Isolate of2002、500549、316715；加拿大株HHOcarp06等在同一分支上，亲缘关系较近，聚为一类，同属于Ⅰa基因亚型；与其他基因型分离株在不同的分支上，亲缘关系较远（图1）。江西分离株的同源性分析显示：获得的江西分离株同源性非常高，达到95.5%，部分江西分离株之间同源性达到了100%，SVCV江西分离株间的亲缘关系较近，本地区存在SVCV的近距离传播

图1 江西省SVCV分离株与其他地区的SVCV分离株部分G基因序列的遗传进化树Fig.1 Phylogenetic trees based on partial glycoprotein gene sequences of SVCV isolates from Jiangxi Province and other SVCV species in Genbank

2.2.4 区域分布

本研究采样区域较广，覆盖了全省11个地市的69个县（市、区）。2009年以前江西省仅在南昌县发现SVCV，2010年起发现SVCV分布范围逐步扩大，截止目前江西省仅新余市、抚州市未发现SVCV分布，其余9个地市均发现SVCV，阳性渔场主要集中在赣中的南昌县、新建县、上高县；赣西的安福县、吉安县、上栗县；赣东的广丰区、贵溪市；赣北的彭泽县、庐山市；赣南的信丰县、石城县。江西省SVCV阳性样本分布区域较为分散，阳性渔场在地理上呈零星分布，分布范围较广。

3 讨论

鲤春病毒血症（Spring Viremia of Carp,SVC）是鲤科鱼类的一种急性出血性并高度传染的流行病，通常在春季水温10～20℃时流行，引发幼鱼和成鱼大量死亡。100多年来SVC在欧洲各国（包括俄罗斯）流行，给欧洲的鲤养殖业造成了巨大的经济损失[2,9,10]。本研究2005—2017年持续进行SVCV感染流行病学研究发现：在锦鲤、鲤、草鱼、鲫中均检出SVCV，鲤科鱼类带毒较为广泛，阳性检出率从高至低依次为：鲫7.91%、锦鲤 6.25%、鲤1.77%、草鱼1.48%，其中鲫和锦鲤的阳性检出率相对较高。Eveline等[11]用浸泡和注射方式将SVCV美国株（AY527273/North Carolina Isolate of 2002）感染锦鲤、黄鲈Diploprion bifasciatum、大马哈鱼Oncorhynchus keta等6种不同科的鱼类，结果表明SVCV对锦鲤高度易感染。统计分析与χ2检验表明：江西省采集的样品中鲫的SVCV的携带率与鲤（P＜0.05）、草鱼（P＜0.01）具有统计学意义，与锦鲤的SVCV的携带率差异不具有统计学意义（P＞0.05），即鲫的SVCV的携带率显著高于鲤、草鱼，与锦鲤相当。说明在本地区除锦鲤外，鲫也是一种SVCV高度易感种，发生该疫病的风险也较高。在江西省春、秋两季均能检测到阳性样品，春、秋季节与阳性检出率间无相关性，11～20℃的水温范围内有阳性样品检出。

系统进化树显示，江西分离株与中国株（SVCV-265、772、461、G067、A1、BJ0505-2）、亚洲株（D148）、英国株（H264,G108）、美国株（North Carolina Isolate of 2002、316715、500549）、 加 拿 大 株（HHOcarp06）等在同一分支上，亲缘关系较近，聚为一类，属于Ⅰa基因亚型，这与Zhang等[12]构建的进化树中亚洲分离株主要属于Ⅰa基因亚型的结论一致。聚为一类可认为来源相近，表明江西分离株与已发表的中国分离株、美国株来源相近。2005—2017年江西省所有检测出SVCV的阳性渔场经流行病学现场调查均未发生SVC。Xiao等[13]将SVCV中国株（SVCV-265）人工感染锦鲤，试验亦未观察到锦鲤有明显的临床症状和死亡现象，但同属于Ⅰa基因亚型的美国株（North Carolina Isolate of2002）曾导致2002年美国的北卡罗来钠州暴发SVC[14,15]，表明不同区域的环境因素影响Ⅰa型SVCV的致病性。因此，Ⅰa型SVCV感染鲤科鱼类并引起发病的因素还有待进一步的研究，Ⅰa型SVCV阳性的鲤科鱼类养殖场依然存在发生SVC的风险。

2009年以前江西省仅在南昌县发现SVCV，2010年起陆续在全省其他渔区发现，SVCV存在省内近距离传播，分布点近些年也有所扩散，表明感染区域范围有逐渐扩大的趋势。SVCV主要是水平传播（带毒鱼、被污染的水、网具等）[16]。江西省主要有赣江、抚河、信江、饶河、修河等五大水系，水流均最终汇入鄱阳湖及周边湖泊。本研究主要监测江西省内渔场的养殖鲤科鱼类情况，尚未监测野生鱼类。从江西水系分布来看，全省主要水系通过鄱阳湖密切相连，一旦SVCV传染到河流内的野生鱼类，通过带毒鱼和病毒污染的水体传播，可能会加剧该病疫情在江西更大范围传播的风险。因此，为了降低SVC病原的传播和扩散风险，需要扩大疫情监测范围（包括野生鱼类），加强生物安保意识的宣传，提高渔民在养殖环节中对染疫对象的生物无害化处理意识，筑牢生物安全屏障。