高效液相色谱分析法测定食品中5种防腐剂和甜味剂

蔡小钦 谭珊 李红丽 吴晓琴

本次研究中对食品中5种添加剂采用液相色谱法检测，重点分析色谱条件和其检测结果相关性，并构建食品添加剂检测方法。在本次研究中发现：液相色谱法的应用，能够同时实现食品中的山梨酸、苯甲酸、脱氢乙酸、糖精钠、安赛蜜的同时检测。测定条件：色谱柱ZORBAX SB- C18柱分离，甲醇∶0.02 mol/L乙酸铵溶液=5∶95为流动相，流速1.0 mL/min，紫外检测波长为230 nm。5种添加剂为400 μg/mL时相关性良好。最小检出限介于0.196～1.452 mg/kg。相对标准偏差<5%，回收率>90%，该方法检测快捷高效，便于检测人员对食品中5种添加剂含量情况作出快速判断。

检测实验

实验材料与实验方法

（1）实验材料：①实验原料为市售饮料、调味品等。②实验仪器包括安捷伦1260高效液相色谱仪，自动进样器，PURELAB flex超纯水机，高速冷冻离心机，超声波清洗仪。③主要试剂包括甲醇、乙酸铵、乙酸锌、亚铁氰化钾。标本为苯甲酸、糖精钠、山梨酸、脱氢乙酸（生产厂家德国Dr.Ehrenstorfer GmbH，纯度=99.9%），安赛蜜（生产厂家德国Dr.Ehrenstorfer GmbH，纯度=99%）。相关检测中的5种添加剂检出限分别为：山梨酸线性方程Y=105.276 6X+33.575 0，检出限为0.42 mg/kg；脱氢乙酸线性方程Y=104.225X+58.798 8，检出限为0.78 mg/ kg；糖精钠线性方程Y=67.225X+29.665 6，检出限为0.65 mg/kg；安赛蜜线性方程Y=38.554 7X+58.224 5，检出限为0.67 mg/kg；苯甲酸线性方程Y=25.667 1X+103.225 0，检出限为0.50 mg/kg。

（2）标准溶液配制：①脱氢乙酸标准溶液。称取脱氢乙酸标准品0.101 0 g，以NaOH溶液（20 g/L）溶解，得到浓度为1.0 mg/mL的脱氢乙酸标准溶液。②混合标准溶液。将含苯甲酸、山梨酸、安赛蜜、糖精钠等添加剂的溶液稀释配制成待用混合标准溶液。③亚铁氰化钾溶液。准备样品，选取106 g亚铁氰化钾，放置在1 000 mL容量瓶中。④乙酸锌溶液。质量为220g，再将其进行称取之后放置在1 000 mL容量瓶中。⑤乙酸铵溶液。质量为1.54 g，转移至1 000 mL溶液瓶中，对其实施经抽滤超声波脱气，以备使用。

（3）色谱条件：色谱柱选取的是ZORBAX SB- C18柱，柱温设置为30 ℃，检测选用230nm波长，在实验过程中选取甲醇- 0.02 mol/L乙酸铵溶液为流动相。检测中的选取样品10 μL为进样量。

（4）样品前处理：检测中的样品质量为5g，并将其放置在小烧杯中，并向容量为50mL瓶中进行转移。在对烧杯连续进行3次清洗之后，放置到容量瓶中，检测过程中将亚铁氰化钾和乙酸锌一一加入，加入质量为3mL，离心处理，吸取上清液滤膜后等待检测。

（5）定性定量方法：稀釋配置配制完成的5种添加剂混合标准溶液，结合设计需求稀释到相应的浓度。检测中从出峰时间实现定性，在标准曲线制作中，横坐标为标准品浓度，纵坐标为峰面积，目标样品物计算含量为5g。

实验方法

（1）色谱柱的选择：本次研究重点分析ZORBA× SB- C18（5 μm，4.6 mm×150 mm）液相色谱柱，ZORBA× SB- C18（5μm，4.6 mm×150 mm）液相色谱柱的分析时间长，以上色谱柱的长度不足，检测5种添加剂分离性不够完善。最终在检测中确定色谱柱长ZORBA×SB- C18柱（5 μm，4.6 mm×150 mm），等待检测。

（2）加标回收实验精密度：检测对象选取的市场上的糕点以及饮料，对其实施加标回收实验。液相色谱检测中全部得到良好的回收率，相对标准偏差（n=6）值全部在7%以下。不但具有一定精密度，同时适用范围也比较广泛。

（3）基质适用性分析：本次检测中选用的是市售饮料等典型食品样品，同时检测以上样品中的甜味剂以及防腐剂。

实验讨论

首先确定分层提取中的目标分析物分配系数，以能够保障在液萃取中回收率良好。防腐剂和甜味剂标准品混合溶液需要在检测过程中加入在互相不溶的溶剂中，对其防腐剂含量采用液相色谱法检测，得到了溶液中的分析物浓度比，实现对目标分析物中防腐剂及甜味剂的估算以及分配。对于食品基质中的蛋白质杂志采用亚铁氰化钾和乙酸锌溶液进行清除，对检测结果没有太大影响力。

在本次实验检测过程中，可以对食品中不同的甜味剂和防腐剂实现同时检测。在检测过程中对目标物采用液相色谱法，在应用中检测食品具体较高应用范围，不但具有一定经济性，而且高效安全，可以实现对食品中防腐剂和甜味剂的同时检测。