酱油中防腐剂的液相色谱法检测结果研究

苏记红 刘强 焦志培 冯园园 刘琦

酱油是日常生活中常见的调味料，由于其中带有大量的蛋白类物质，容易滋生细菌，所以对保质期进行管理成为了酱油生产中的重要环节。在当前的市场环境中，为了不影响酱油的鲜美口感，又为了能保存一定的时间，酱油生产环节中添加防腐剂，是较为普遍的方法。但是，在防腐剂的影响下，又会对食品安全产生影响。因此，必须采用科学的检测方法，分析并确定酱油中的防腐剂含量，以此平衡食品安全与酱油口感。本文以液相色谱为实践检测方法，对酱油中的防腐剂材料进行提取分析。在介绍液相色谱法基本技术原理的前提下，阐述研究实践的具体内容与方法，并根据实验所得数据，对实验结果进行分析研究，说明酱油中防腐剂的检测方法，为相关研究实验活动提供参考材料。

液相色谱法原理

液相色谱法是由俄国植物学家M·S·Tswett于1906年意外發现的研究方法。在该方法中，可以通过不同色带的色素差异，标记并分离有色物质，完成有机化合物的分离。色谱法的操作方法中，不能直接对未知物质进行鉴定，必须通过与标准对照物的比对展开分析。需要通过质谱、红外光谱以及其他化学方法的配合，完成物质的定性鉴定工作，这里不做过多介绍。

技术原理上，液相色谱法通过不同化合物在两相之间亲和力的差异进行化合物分离。在固定相的基本差异条件下，使用液固色谱、液液色谱、键合色谱的方法完成分类工作。其中以液固色谱与键合色谱的应用最为常见。同时，液相色谱法还可以根据固定相形式、吸附力水平等条件进行分类。

研究内容与方法

实验材料与器材。实验材料的备制中，需准备液相色谱仪、超声波水浴器、酱油样品材料、甲醇、0.02moL/L乙酸铵溶液、苯甲酸标准溶液、山梨酸标准溶液、脱氢乙酸标准溶液、羟基苯甲酸脂（甲、乙、丙三种类型）、滤膜（有机、无机两种类型）。在确定设备仪器与材料类型之后，需对部分的材料配置方法进行说明：1.准确称取羟基苯甲酸脂（甲、乙、丙三种类型）标准物质，用甲醇配成1mg/ L的标准储备液。2.这里提到的苯甲酸标准溶液、山梨酸标准溶液、脱氢乙酸标准溶液均为液标，可以根据需要直接稀释使用。

样品检测前处理。在样品进液相色谱仪检测前，需要对样品进行相应的前处理。因为不确定防腐剂含量，我们按照2g、3g、4g、5g的标准分别放置在量度为50ml的比色管中，用塞具进行封口处理。然后，分别向这四个比色管中，加入纯度为80%的甲醇溶液，将经过混合的二次溶液，定容至50mL，做好管口封闭处理。待其均匀混合后，将完成混合的比色管放置在超声波水浴器设备中，在经过15min的处理后，再次混匀，再使用参数为0.45μm的滤膜进行过滤处理，当过滤完成后，可以进液相色谱仪执行具体的检测工作。

回收率实验。初步检测完成后，需对相应的信息做好记录，然后执行回收实验。在回收实验中，要对选用的酱油样品进行回收处理，并按照实验设计的水平标准执行。通常情况下，回收实验的添加水平为3，且在每个独立的添加水平中，设置6个平行样本，以此保证实验效果。在选取空白样品进行实验准备之前，应准备好苯甲酸标准溶液、山梨酸标准溶液、脱氢乙酸标准溶液羟基苯甲酸脂（甲、乙、丙三种类型）标准储备液。然后，在接下来的三次回收测定分析中，对加标量进行调整，加标量应在接近仪器信噪比3- 10倍范围内选取。在经过这三次的测定处理后，需统计出单独样品的最低检出限值。在完成一个酱油样品的处理后，分别对其它酱油样品执行此工序处理，并得到所有的最低检出限参数。

吸收波长。在对混合标准溶液的最大吸收波长进行确定的过程中，必须利用被测组分的光谱扫描图在二极管中最为明显的特征进行确认。技术原理上，二极管阵列的检测中，二极管阵列检测器可以先进行全波长扫描，然后选取单个的波长作为检测波长。使用检测器完成全波长扫描后，观察光谱图，选择各个物质的特征吸收峰来确定该物质的检测波长。二极管阵列检测器可以选择多个通道，根据物质特定吸收的不同，可以选择不同的通道进行分析。

流动相及色谱柱的选择。液相色谱仪的核心是色谱柱。另外，流动相对改善分离效果也有重要的辅助效应。色谱柱的关键内容是制备出高效的填料。现代液相色谱填料多使用键合固定相。在酱油中防腐剂的测定中我们选择的是C18液相色谱柱，粒径为5μm，比较常见。流动相的选择上，我们知道，理想的液相色谱流动相应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品、毒性低等特征。根据这些特点及所测化合物的性质，我们选择的流动相为甲醇和乙酸铵溶液。

样品净化。经过前面的实验过程，我们发现，由于酱油样品中，带有较为浓稠的颜色，并带有极多的蛋白质物质，如果直接进入液相色谱仪，会对色谱柱产生误导，影响观测参数的采集，使其准确率水平大大降低，并最终造成试验结果出现误差或是错误的问题。严重时，没有经过净化的酱油溶液，甚至会由于其中的大颗粒物质，造成液相色谱仪色谱柱的堵塞，影响仪器设备的正常使用。因此，在酱油溶液进入液相色谱仪进行数据分析之前，必须对被试验的样品进行净化，并重点对其中的色谱柱物质进行处理，防止其对观测过程产生影响。技术原理上，应当使用固相萃取柱进行净化处理。用C18固相萃取柱对提取后的样品进行净化处理后，酱油溶液在颜色上较淡，但是经过直接提取的酱油溶液颜色较深，仍然保留着较多体积较大的杂质物质与蛋白质。所以，为了进一步的对酱油样品进行分析，必须对其溶液进行净化，以达到观测的客观需求指标。确定好净化方案后，我们再次根据前面提到的回收率实验过程的加标水平进行再次加标，对提取液进行净化处理，我们会发现净化后，回收率效果得到提升，并使酱油样品溶液中的水油度达到最佳状态，经过净化处理，样品杂质减少，对色谱柱和仪器伤害较小，在一定程度上提高了色谱柱和仪器的使用寿命。

结果计算。使用无菌水把6种标准储备液配成混标浓度分别为2μg/mL、4μg/mL、8μg/mL、16μg/mL、32μg/mL的标准混合工作液，然后再使用液相色谱仪进行分析，并将完成测量的实验对象数据整理出来，绘制成完整的曲线参数，就可最终确定样品中每种防腐剂的含量。

综上，酱油防腐剂是生产厂家为了延长其保质周期而使用的食品添加剂材料。在对多种防腐剂进行分析的过程中，可以使用液相色谱法进行检测，在核对防腐剂成分的同时，分析其使用的具体剂量，为食品安全问题提供保障。从技术角度出发，液相色谱法有着较高的精确度，可以便捷的完成多种成分的检定。对于此项内容的研究探讨，可提升酱油防腐剂的检测技术，并满足应用需要。