外周血NK细胞 补体C3及血清蛋白水平检测在急性颅脑损伤患者中诊断价值

李想 范晓峰

颅脑损伤为常见的神经外科疾病，常伴有复杂的病理与生理变化，致残、致死风险高［1-2］。研究显示，颅脑损伤患者在出现血脑屏障受损后易产生T细胞聚集、小胶质细胞激活，进而诱导促炎因子介质释放，引发系统性炎症反应综合征［3-4］；同时重要的抗炎物质亦起到一定作用，能诱发抗炎性反应综合征，若两者平衡受到破坏可引发器官功能障碍，增加易感性［5］。目前，临床针对颅脑损伤多以降低颅内压、保护脑功能、维持脑灌注、预防并发症、改善神经功能等治疗为主，但预后欠佳［6］。本研究为提高急性颅脑损伤治疗效果与预后，对患者外周血NK细胞、补体C3、血清蛋白水平进行分析，以减少病残、病死风险。报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年5月至2018年1月本院收治的急性颅脑损伤患者60例，纳入标准：（1）所有患者均经头颅CT、MRI等临床检查确诊为急性颅脑损伤；（2）外伤史明确，且外伤后6h内入院接受诊治；（3）入院时GCS评分在3～12分范围内。排除标准：（1）存在高血压、糖尿病、肝炎等慢性或感染性疾病；（2）其他部位合并有严重性损伤；（3）伴有恶性肿瘤及心脏、肝、肾等重要脏器疾病者；（4）妊娠期或哺乳期妇女；（5）近期发生感染者；（6）近期曾应用免疫抑制剂。按GCS评分将其分为轻中型组（GCS为9～12分）和重型组（GCS为3-8分），轻中型组37例，重型组23例。轻中型组中男20例，女17例；年龄18～68岁，平均年龄（39.35±3.72）岁。致伤原因：交通事故伤20例，坠落伤10例，暴力打击伤3例，其他4例。重型组中男13例，女10例；年龄19～70岁，平均年龄（38.96±3.81）岁。致伤原因：交通事故伤13例，坠落伤6例，暴力打击伤2例，其他2例。另选取同期本院接受体检健康者60例为对照组，其中男35例，女25例；年龄18～70岁，平均年龄（39.52±2.43）岁。三组性别、年龄方面比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法 三组人员入院时均接受CT或X线、MRI检查。轻中型组和重型组患者在入院第1、3、5、7天采集血液标本，患者在入院诊治时首次采集血液样本2～3ml，入院第3、5、7天于清晨患者空腹状态下抽取肘静脉血2～3ml；对照组体检时采集血液样本2～3ml，采集条件为早晨空腹状态。样本采集2h内送至血液检验科进行标本制备，在室温环境下行15min的3000r/min离心，留取上清液，放入-20℃冰箱内保存，待测。以CD3- PercP-Cy5.5（深圳欣博盛生物科技有限公司）与CD56-PE（深圳欣博盛生物科技有限公司）标记，用流式细胞仪检测NK细胞水平，采用免疫散射比浊法检测补体C3水平。血清蛋白包括：血清ALB、IL-6、CRP，应用溴甲酚绿比色法检测ALB水平，应用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）检测IL-6水平，应用免疫透射比浊法检测hs-CRP水平，所有操作均严格按照说明书执行。

1.3 统计学分析 采用SPSS20.0统计软件。计数资料以［n（%）］表示，组间比较采用χ2检验；计量资料采用（x±s）表示，组间比较采用t检验；以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组NK细胞阳性率比较 见表1。

表1 三组NK细胞阳性率比较［%（x±s）］

2.2 三组补体C3水平比较 见表2。

表2 三组补体C3水平比较（x±s）

2.3 三组血清蛋白水平比较 轻中型组和重型组患者入院第1、3、5、7天的ALB水平均低于对照组，IL-6、CRP水平均高于对照组，且随着时间延长不断降低，差异有统计学意义（P＜0.05），同时重型组患者入院第1、3、5、7天的ALB水平均低于轻中型组、IL-6、CRP水平均高于轻中型组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表 3。

表3 三组患者血清蛋白水平比较（x±s）

3 讨论

急性颅脑损伤病因复杂，机体可在病发数小时或几天内出现复杂的串联性代谢变化，导致机体产生病理、生理改变。若急性颅脑损伤患者不及时接受有效治疗与控制，易产生继发性脑损害，增加脑损伤患者病残与病死风险。临床研究、动物实验表明，急性颅脑损伤的病理发展过程与炎性细胞因子存在密切关系，炎性细胞因子易因激活过度引发炎症反应，进一步加重继发性脑损伤［7］。

NK细胞是机体骨髓造血干细胞分化、发育形成，多分布在外周血与脾脏中，其主要生物学功能表现为抗感染、抗肿瘤及免疫调节作用，在病毒感染后，NK细胞能分泌TNF-α、IFN-γ等因子，对病毒复制进行干扰，阻止其对吞噬细胞进行进一步活化，使机体抗感染免疫功能增强；同时NK细胞能通过释放IFN-γ、TNF-β等因子调节机体免疫，使机体早期免疫监视、抗感染免疫功能增强；若机体内NK细胞表达减少，则机体早期感染风险增加［8-9］。补体C3细胞主要是由肝细胞、巨噬细胞产生，能合成局部组织特异因子及激素，其生物学功能主要表现为：能参与宿主的早期抗感染免疫工作、维持机体内环境的稳定、连接获得性免疫与天然免疫，同时与其他酶系统存在相互作用，故通过检测补体C3水平能对补体活化、功能状态进行良好的反映［10-11］。本资料结果显示，轻中型组和重型组患者入院第1、3、5、7天的NK细胞阳性率均低于对照组，且随着时间延长不断减少，同时重型组患者入院第1、3、5、7天的NK细胞阳性率均低于轻中型组，而外伤后患者补体C3细胞水平出现短暂下降，后迅速升高，继而持续降低，同时重型组患者入院第3、5、7天的补体C3水平高于轻中型组；说明急性颅脑损伤患者NK细胞水平呈动态降低，抗感染能力降低，且补体水平出现异常，不同病情之间存在一定的差异，外伤后具有一定免疫抑制状态，早期感染风险增加。分析原因可能是外伤后患者的血清内产生多种血清因子，这些因子存在免疫抑制作用，而血清内存在免疫增强功能的物质不断减少，共同作用于机体，引起免疫抑制，而NK细胞减少不利于机体免疫功能恢复；同时急性颅脑损伤后补体C3细胞水平发生短暂降低可认为在应激状态下，机体多伴有高分解代谢所致的消耗性降低、蛋白酶水解作用；随后在血脑屏障受到破坏后，血浆接触中枢神经系统相关抗原物质，细胞缺血坏死后所释放的亚细胞结构，能使补体顺着不依赖抗体经典途径进行激活；或是抗磷脂抗体和鞘磷脂、脑磷脂等物质能形成抗原、抗体复合物，通过依赖抗体相关经典途径能将补体激活；或是损伤后产生脑缺血，破坏毛细血管内皮细胞，能通过MBL途径将补体激活。相关研究显示，在颅脑损伤出血时机体内红细胞相关溶解能激活补体。

白蛋白作为基础生命物质，急性颅脑损伤患者在出现脑外伤后多处于高度的应激状态，在神经内分泌系统、大量炎症因子的相互作用下，影响白蛋白mRNA表达及白蛋白合成，同时处于应激状态下的高消耗、高分解均易引起白蛋白水平降低；若白蛋白水平偏低，易导致血浆胶体渗透压平衡丧失，可引发组织水肿，导致水电解质紊乱情况加剧，机体经肝脏及肾脏的自我调节能维持稳定状态，进而引发高钠血症，而血钠水平升高易引起外周组织抵抗胰岛素并升高血糖，造成的恶性循环能破坏肝脏代谢功能，增加并发症发生风险［12-13］。同时血浆白蛋白对机体具有一定运输功能，对球蛋白具有关键的胶体保护作用，在血浆球蛋白稳定性降低，影响机体内营养物质代谢及利用、转运，导致机体处于亚健康情况。本资料结果显示，白蛋白水平与患者病情具有一定的联系，可反映患者的病情严重程度。IL-6对B细胞的成熟、分化形成抗体具有诱导作用，在免疫系统中发挥重要作用，能参与神经细胞发生，正常情况下神经元、胶质细胞成熟反映IL-6存在广泛性损伤序列，多种状态下IL-6常以神经营养因子方式表达，IL-6对神经细胞生成因子生成具有促进作用；同时IL-6在创伤中起到双重作用，在患者体温升高情况下IL-6存在一定损害作用，影响预后，若不及时控制，IL-6可引发严重脑损伤［14］。本资料结果显示，血清IL-6、CRP表达水平越高，患者脑损伤程度越严重。C反应蛋白作为急性相反应的蛋白，正常机体内含量较少，在机体发生感染、创伤等损害后快速升高，急性颅脑损伤CRP水平增加能对炎症反应状态进行良好的反映，存在较高的预后不良风险［15］。因此，观察急性颅脑损伤患者外周血NK细胞、补体C3、血清蛋白水平动态变化，能反映颅脑损伤程度，利于临床医生制定、选取安全有效的治疗方案，为临床治疗提供参考依据。

综上所述，急性颅脑损伤患者病情严重程度与外周血NK细胞水平、补体C3、血清蛋白水平动态呈密切关系，外伤后患者外周血NK细胞水平、补体C3水平及血清ALB、IL-6、CRP水平多处于高水平状态，随着时间延长外周血NK细胞水平及血清ALB、IL-6、CRP水平不断降低，补体C3水平不断增加，故观察患者外周血NK细胞、补体C3及血清蛋白水平动态变化，能为临床预测急性颅脑损伤程度、评估预后提供参考依据。